Test de la barrières physiologiques à la transmission virale chez les pucerons avec microinjection

S’il s’agit de transmetteurs efficaces de virus végétaux, s’il s’agit d’une micro-injection de virus, la procédure que nous allons vous montrer aujourd’hui est une technique permettant aux chercheurs d’injecter le virus directement dans la cellule hémologique de la fibrillation auriculaire, en contournant l’intestin, l’une des deux barrières majeures à la transmission du virus de manière circulative. Bonjour, je suis Cecilia Tamrin Dehi post-doc au département de phytopathologie de l’Université Cornell. Aujourd’hui, je vais vous montrer comment injecter un virus dans le virus de l’hémocellule AFI qui peut ensuite être transmis à différentes espèces végétales.

Par exemple, cette plante FE est infectée par le virus des feuilles de pomme de terre PLRV. Vous pouvez voir la différence entre une plante saine et une plante infectée. Le symptôme le plus notable est la sclérose de Taven.

Le PLRV est un virus luthier qui est porté par l’APHIS dans son hémolymphe, l’équivalent insecte du sang de mammifère. Lorsqu’un AFI non infecté se nourrit d’une plante infectée, il contracte le virus par le biais de la grippe végétale, que vous pouvez voir ici. Une fois ingéré, le virus doit passer de l’intestin de l’insecte à l’hémolymphe, puis doit passer par la glande salivaire afin d’être transmis à nouveau à la plante ESE.

Et s’il peut prendre de nombreux virus lorsqu’il se nourrit d’une plante ESE, cependant, seulement comme plus de fraction passera par l’intestin et les glandes salivaires. Les deux principaux obstacles à la transmission sont d’infecter plus de plantes à tester. Si un AFI ne peut pas transmettre un virus, nous nourrissons l’AFIS sur des tissus infectés pendant deux jours, puis nous le laissons se nourrir dans une plante saine pendant cinq jours.

La plante est ensuite fumigée et après trois semaines, nous commençons à rechercher des symptômes. Lorsque nous trouvons une fibrillation auriculaire qui ne peut pas vectoriser un virus, nous pouvons évaluer laquelle des deux barrières arrête le virus à l’aide de la procédure de micro-injection, que je vais vous montrer aujourd’hui. Dans cette procédure, le virus est injecté directement dans la cellule hémologique, en contournant la barrière de transmission intestinale.

Alors commençons, et je vais vous montrer comment micro-injecter un apex. C’est donc le verre, les aiguilles de verre que nous utilisons. Nous tirons les aiguilles de verre de ces écrans de verre à l’aide de l’APU apu.

Il s’agit donc du micro-injecteur. Pour faire la micro injection d’un virus. Je vais commencer à mettre l’aiguille dans le porte-aiguille.

Donc, je vais juste mettre l’aiguille et la mettre en place. Alors maintenant, je vais charger le virus dans l’aiguille au sommet de ce gouvernail. Nous devons maintenant positionner l’AFI pour la micro-injection.

Je vais donc prendre un AFI avec la pression de la douleur et je vais le placer dans le support AFI. Idéalement, je vais essayer de placer l’arrière du puceron contre le support afin d’avoir accès à la partie abdominale de la fibrillation auriculaire. D’accord, super.

Maintenant, nous pouvons aller de l’avant et micro-injecter. D’accord, maintenant je vais positionner l’aiguille et je vais la rapprocher de la fibrillation auriculaire. Alors maintenant, je vais mettre l’aiguille en contact avec la fibrillation auriculaire et pour percer l’exosquelette, le mieux est d’essayer de percer entre le segment à la base des jambes.

Je vais donc injecter. Maintenant, je prends l’AFI avec le pinceau et je le mets dans le papier de récupération où je vais lui permettre d’enregistrer pendant un moment. Nous devons donc également micro-injecter de l’afi de contrôle.

Cette micro injection de contrôle se fait uniquement avec le tampon sans le virus. Le tampon que nous utilisons est 0,1 tampon phosphate de plus pH sept. Je vais donc placer l’ajustement A dans une plante saine où je vais lui permettre de s’adapter pendant cinq jours après que je vais destiner la plante et attendre l’apparition des symptômes après la micro-injection de l’AN échoué inférieur pendant une semaine chaque jour, le niveau d’expression du gène cible est mesuré dans l’afi.

Nous venons donc de micro-injecter un afit qui n’a pas pu transmettre le virus. Si après la micro-injection, l’AFI est capable de transmettre le virus, cela signifiera que cet AFI a une barrière intestinale qui bloquait le virus. Si, en revanche, il n’y a pas de développement de symptômes, cela signifiera que cet afit a une forte barrière des glandes salivaires.

Nous venons donc de montrer comment micro-injecter du virus dans les pucerons. Cette même procédure est utilisée pour micro-injecter ces ARN échoués dans les pucerons afin d’effectuer une interférence oculaire RNI, ce qui est une technique intéressante pour aider à étudier la fonction des gènes chez les pucerons. Voilà donc pour la micro injection.

J’espère qu’il vous plaira et qu’il vous sera utile pour vos expériences. Merci.