Name: Préparation et imagerie en temps réel des sphéroïdes hydres en régénération (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Découvrez la préparation et l'imagerie en temps réel des sphéroïdes Hydra en régénération. Ce protocole permet de capturer la dynamique spatiotemporelle de la formation de l'organisateur et du patronnage tissulaire.

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<ol><li>Bode, P. M., Bode, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+pattern+in+regenerating+tissue+pieces+of+hydra+attenuata%3A+I.+Head-body+proportion+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Formation of pattern in regenerating tissue pieces of hydra attenuata: I. Head-body proportion regulation.</a> Dev Biol. 78 (2), 484-496 (1980).</li>
<li>Fütterer, C., Colombo, C., Jülicher, F., Ott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenetic+oscillations+during+symmetry+breaking+of+regenerating+hydra+vulgaris+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Europhys+Lett%22%5BJournal%5D)">Morphogenetic oscillations during symmetry breaking of regenerating hydra vulgaris cells.</a> Europhys Lett. 64 (1), 137(2003).</li>
<li>Weevers, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanochemical+patterning+localizes+the+organizer+of+a+luminal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Mechanochemical patterning localizes the organizer of a luminal epithelium.</a> Sci Adv. 11 (26), eadu2286(2025).</li>
<li>Oreopoulos, J., Berman, R., Browne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+9+-+Spinning-disk+confocal+microscopy%3A+present+technology+and+future+trends%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 9 - Spinning-disk confocal microscopy: present technology and future trends.</a> Meth Cell Biol. 123, 153-175 (2014).</li>
<li>Stelzer, E. H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+sheet+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Meth+Primers%22%5BJournal%5D)">Light sheet fluorescence microscopy.</a> Nat Rev Meth Primers. 1 (1), 73(2021).</li>
<li>Moos, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open-top+multisample+dual-view+light-sheet+microscope+for+live+imaging+of+large+multicellular+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Open-top multisample dual-view light-sheet microscope for live imaging of large multicellular systems.</a> Nat Meth. 21 (5), 798-803 (2024).</li>
<li>Soriano, J., Colombo, C., Ott, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydra+molecular+network+reaches+criticality+at+the+symmetry-breaking+axis-defining+moment%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+Lett%22%5BJournal%5D)">Hydra molecular network reaches criticality at the symmetry-breaking axis-defining moment.</a> Phys Rev Lett. 97 (25), 258102(2006).</li>
<li>Livshits, A., Shani-Zerbib, L., Maroudas-Sacks, Y., Braun, E., Keren, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+inheritance+of+the+actin+cytoskeletal+organization+determines+the+body+axis+in+regenerating+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Structural inheritance of the actin cytoskeletal organization determines the body axis in regenerating hydra.</a> Cell Rep. 18 (6), 1410-1421 (2017).</li>
<li>Hanson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+monitoring+of+neural+activity+with+single-cell+resolution+in+behaving+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Sc+Rep%22%5BJournal%5D)">Automatic monitoring of neural activity with single-cell resolution in behaving hydra.</a> Sc Rep. 14 (1), 5083(2024).</li>
<li>Escobar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terminal+differentiation+precedes+functional+circuit+integration+in+the+peduncle+neurons+in+regenerating+hydra+vulgaris%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Terminal differentiation precedes functional circuit integration in the peduncle neurons in regenerating hydra vulgaris.</a> Neural Dev. 19 (1), 18(2024).</li>
<li>Ferenc, J., Tsiairis, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+Mechanical+Oscillations+During+Whole-Body+Regeneration+in+Hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Whole-Body+Regenerat%22%5BJournal%5D)">Studying Mechanical Oscillations During Whole-Body Regeneration in Hydra.</a> Whole-Body Regenerat. 2450, 619-633 (2022).</li>
<li>Bossert, P., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+use+hydra+as+a+model+system+to+teach+biology+in+the+classroom%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">How to use hydra as a model system to teach biology in the classroom.</a> Int J Dev Biol. 56 (6-8), 637-652 (2012).</li>
<li>Jemielita, M., Taormina, M. J., Delaurier, A., Kimmel, C. B., Parthasarathy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+phototoxicity+during+the+development+of+a+zebrafish+craniofacial+bone+using+confocal+and+light+sheet+fluorescence+microscopy+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Comparing phototoxicity during the development of a zebrafish craniofacial bone using confocal and light sheet fluorescence microscopy techniques.</a> J Biophotonics. 6 (11-12), 920-928 (2013).</li>
<li>Icha, J., Weber, M., Waters, J. C., Norden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phototoxicity+in+live+fluorescence+microscopy%2C+and+how+to+avoid+it%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Phototoxicity in live fluorescence microscopy, and how to avoid it.</a> Bioessays. 39 (8), 1700003(2017).</li>
<li>Ravichandran, Y., Vogg, M., Kruse, K., Pearce, D. J. G., Roux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology+changes+of+hydra+define+actin+orientation+defects+as+organizers+of+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Topology changes of hydra define actin orientation defects as organizers of morphogenesis.</a> Sci Adv. 11 (3), eadr9855(2025).</li>
<li>Maroudas-Sacks, Y., Garion, L., Suganthan, S., Popović, M., Keren, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confinement+modulates+axial+patterning+in+regenerating+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22PRX+Life%22%5BJournal%5D)">Confinement modulates axial patterning in regenerating hydra.</a> PRX Life. 2 (4), 043007(2024).</li>
<li>Bailles, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+stretch+biases+the+self-organization+of+actin+fibers+in+multicellular+hydra+aggregates%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Anisotropic stretch biases the self-organization of actin fibers in multicellular hydra aggregates.</a> Proc Natl Acad Sci. 122 (32), e2423437122(2025).</li>
<li>Luu, P., Fraser, S. E., Schneider, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+than+double+the+fun+with+two-photon+excitation+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">More than double the fun with two-photon excitation microscopy.</a> Comm Biol. 7 (1), 364(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>20&times;/0.8 Objectif Plan-Apochromat</td><td>Zeiss</td><td>440640-9903-000</td><td>Pour la microscopie confocale à disque tournant</td></tr><tr><td>Objectif plongeur aquatique 20x/1.0 W Plan-Apochromat</td><td>Zeiss</td><td>421452-9700-000</td><td>Utilisé comme objectif de détection dans le Zeiss Lightsheet 7</td></tr><tr><td>Support imprimé en 3D pour montage de chambre FEP</td><td></td><td></td><td>fait sur mesure</td></tr><tr><td>Plaque à 4 puits à fond en verre (#1.5H)</td><td>Ibidi</td><td>80427</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Carl Roth</td><td>3810.4</td><td></td></tr><tr><td>Moule en aluminium pour chambre FEP</td><td></td><td></td><td>fait sur mesure</td></tr><tr><td>Chlorure de calcium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Air comprimé</td><td>Durable</td><td>POWERCLEAN STANDARD 400</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire (6 cm)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8769</td><td></td></tr><tr><td>Feuille de FEP (épaisseur de 127 &mu;m)</td><td>Adtech Polymer Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FluoSpheres modifiés par carboxylate (0,2 &mu;m, rouge foncé)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F8807</td><td></td></tr><tr><td>Capillaire en verre</td><td>Brand</td><td>701904</td><td></td></tr><tr><td>Pipette pasteur en verre (150 mm)</td><td>VWR</td><td>612-1701</td><td></td></tr><tr><td>Hydra vulgaris</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Logiciel d'imagerie</td><td>Visitron</td><td>VisiView</td><td>Pour la microscopie confocale à disque tournant</td></tr><tr><td>Microscope à lumière inversée</td><td>Zeiss</td><td>Axio observer 7</td><td>Pour la microscopie confocale à disque tournant</td></tr><tr><td>Microscope à feuille de lumière</td><td>Leica</td><td>Viventis Deep LS2</td><td></td></tr><tr><td>Microscope à feuille de lumière</td><td>Zeiss</td><td>Lightsheet 7</td><td></td></tr><tr><td>Agarose à faible point de fusion</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0801</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>Microscalpel</td><td>pfm medical</td><td>200300745</td><td></td></tr><tr><td>Gomme à pipette</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piston transferpettor</td><td>Brand</td><td>701932</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de potassium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Brûleur Bunsen de sécurité</td><td>INTEGRA Biosciences</td><td>FIREBOY plus</td><td></td></tr><tr><td>Caméras sCMOS</td><td>Photometrics</td><td>Prime 95B</td><td>Pour la microscopie confocale à disque tournant</td></tr><tr><td>Bicarbonate de sodium</td><td>Fluka Analytical, Sigma-Aldrich</td><td>71630</td><td></td></tr><tr><td>Citrate de sodium dihydraté</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W302600</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>Unité de balayage confocale à disque tournant (trous de 50 &mu;m)</td><td>Yokogawa</td><td>CSU-W1</td><td>Pour la microscopie confocale à disque tournant</td></tr><tr><td>Stéréoscope</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>TES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1375</td><td></td></tr><tr><td>Thermoformeur</td><td>Yuyao Jintai Machine Factory</td><td>Jintai JT-18</td><td></td></tr><tr><td>Plat de culture tissulaire (10 cm)</td><td>VWR</td><td>734-2321</td><td></td></tr><tr><td>Tampon Tris-HCl</td><td>Roche Diagnostics</td><td>10812846001</td><td></td></tr></tbody></table>

préparation et imagerie en temps réel des sphéroïdes hydres en régénération

Preparation and Live Imaging of Regenerating Hydra Spheroids

Préparation et imagerie en temps réel des sphéroïdes hydres en régénération

Hydra is renowned for its exceptional regenerative capacity. Remarkably, small regenerating fragments of Hydra tissue, called Hydra spheroids, can ...

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Research

Recherche

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Cette vidéo montre une technique permettant d’établir une culture tridimensionnelle de cellules gliales. Les cellules gliales dérivées du cerveau de rat sont encapsulées dans une matrice polymère photoréticulable contenant des composants de matrice extracellulaire. Lors de l’incubation dans un milieu de croissance, les cellules gliales prolifèrent dans la matrice de support pour créer une culture tridimensionnelle.

Etablissement d’une culture tridimensionnelle de cellules gliales dérivées du cerveau de rat

Les Hydra transgéniques stables sont fabriqués par micro-injection d’ADN plasmidique dans les embryons, suivie d’une intégration génomique aléatoire et d’une propagation asexuée pour établir une lignée uniforme. Les hydres transgéniques sont utilisées pour suivre les mouvements cellulaires, surexprimer les gènes, étudier la fonction du promoteur ou inhiber l’expression des gènes à l’aide de l’ARNi.

La génération d'transgénique Hydra Par micro-injection d'embryons

Nous décrivons ici une méthode pour générer des cultures sphéroïde en trois dimensions des cellules épithéliales nasales humaines. Sphéroïdes sont alors stimulés au lecteur Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR)-ion charge et sécrétion de liquide, quantifier le changement de la taille de luminal sphéroïde comme approximation de fonction CFTR.

Génération de cellules épithéliales nasales humaines sphéroïdes pour mucoviscidose individualisé Transmembrane Conductance Regulator étude

Les ligands de matrice extracellulaire peuvent être modelés sur des hydrogels de polyacrylamide pour permettre la culture des cellules souches embryonnaires humaines dans les colonies confinées sur des substrats conformes. Cette méthode peut être combinée avec la microscopie de force de traction et des essais biochimiques pour examiner l'interaction entre la géométrie de tissu, les forces cell-générées, et la spécification de destin.

Modelage de la géométrie des colonies de cellules souches embryonnaires humaines sur des substrats conformes pour contrôler la mécanique de niveau tissulaire

Ce protocole décrit l’utilisation d’un peroxyde d’hydrogène génétiquement codé (H2O2)-biocapteur dans les neurones et les larves de poisson zèbre cultivés pour évaluer les rôles physiologiques de signalisation deH2O2pendant le développement du système nerveux. Il peut être appliqué à différents types de cellules et modifié avec des traitements expérimentaux pour étudier les espèces réactives de l’oxygène (ROS) dans le développement général.

ROS Imagerie des cellules vivantes au cours du développement neuronal

La présente étude décrit des méthodologies pour la culture, la congélation, la décongélation, le traitement, la coloration, l’étiquetage et l’examen de sphéroïdes et d’organoïdes entiers sous divers microscopes, alors qu’ils restent intacts dans un hydrogel dans un dispositif polyvalent.

Culture, congélation, traitement et imagerie d’organoïdes et de sphéroïdes entiers alors qu’ils sont encore dans un hydrogel

Nous présentons ici un protocole qui permet une fabrication rapide, robuste et peu coûteuse de sphéroïdes tumoraux, suivie d’une encapsulation d’hydrogel. Il est largement applicable car il ne nécessite pas d’équipement spécialisé. Il serait particulièrement utile pour explorer les interactions sphéroïde-matrice et construire des modèles de physiologie tissulaire ou de pathologie in vitro .

Fabrication et encapsulation de sphéroïdes tumoraux dans des hydrogels de polyéthylène glycol pour étudier les interactions sphéroïde-matrice

Les organoïdes révolutionnent la modélisation tissulaire personnalisée pour le développement d’organes, la découverte de médicaments et la recherche sur les maladies. L’ingénierie des organoïdes progresse dans la création de tissus synthétiques complexes. L’objectif est d’intégrer la morphogenèse, la technologie assembloïde et les biomatrices pour faire progresser l’ingénierie tissulaire. Ce protocole aide à modéliser l’organogenèse hépatique et à établir des lignes directrices pour la...

Techniques de culture in vitro pour modéliser l’organogenèse du foie, construire des assembloïdes et concevoir des tissus synthétiques à l’aide de lignées cellulaires humaines

Ici, nous décrivons différentes méthodes de formation de sphéroïdes multicellulaires pour effectuer une microscopie multiparamètre de suivi sur cellules vivantes. À l’aide de la microscopie d’imagerie à vie de fluorescence (FLIM), de l’autofluorescence cellulaire, des colorants de coloration et des nanoparticules, l’approche d’analyse du métabolisme cellulaire, de l’hypoxie et de la mort cellulaire dans le cancer tridimensionnel vivant (3D) et les sphéroïdes dérivés de cellules souches est...

Production et microscopie imageuse à vie multiparamètre en fluorescence de cellules vivantes (FLIM) de sphéroïdes multicellulaires

Cette étude présente le test de migration bidimensionnel (2D) et le test de germination de sphéroïdes tridimensionnel (3D), ainsi que leurs méthodes d’analyse respectives en aval, y compris l’extraction d’ARN et l’immunocytochimie, comme des tests appropriés pour étudier l’angiogenèse in vitro.

Étude de l’angiogenèse aux niveaux fonctionnel et moléculaire en exploitant le test de migration des plaies par égratignures et le test de germination des sphéroïdes

Nous présentons un modèle de migration 3D du glioblastome utilisant des gliomasphères magnétiques dérivées du patient générées à partir de tumeurs nouvellement diagnostiquées et récurrentes. Cette plateforme permet de visualiser la dynamique migratoire spécifique au patient et d’évaluer l’efficacité thérapeutique. Le test peut être multiplexé après migration afin d’évaluer la localisation et les schémas d’expression des protéines.

Essai de migration du glioblastome 3D reproductible avec localisation sphéroïde médiée par nanoparticules magnétiques dans des conditions hypoxiques

Découvrez la préparation et l'imagerie en temps réel des sphéroïdes Hydra en régénération. Ce protocole permet de capturer la dynamique spatiotemporelle de la formation de l'organisateur et du patronnage tissulaire.

Préparation et imagerie en temps réel des sphéroïdes hydres en régénération

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