Name: Vérification de la tolérance à la nicotine chez les pucerons Utiliser une alimentation artificielle Experiment (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:17:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Découvrez comment évaluer la tolérance des pucerons à la nicotine par alimentation artificielle. Cette méthode compare les lignées adaptées et non adaptées au tabac pour comprendre les mécanismes d'adaptation écologique.

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Dans cette expérience, 4 pucerons adultes sont enfermés dans une petite tasse en plastique. Ils se nourrissent de l&#39;alimentation liquide pipeté entre 2 couches de parafilm tendue sur le haut de la tasse. Après 3 jours d&#39;alimentation, de la toxicité des diètes contenant différentes concentrations de nicotine est comparée au contrôle des régimes en comptant les adultes et les pucerons des larves dans chaque tasse. <ol><li> Faire des solutions contenant du saccharose et de 20 acides aminés. Les pucerons peuvent subsister sur ce régime, reproduisant à des niveaux normaux, pendant au moins 1 semaine. S&#39;il vous plaît voir le fichier joint pour l&#39;alimentation artificielle. </li><li> Aliquote de 1 ml de ce régime en 6 tubes eppendorf différents contenant de la nicotine. Les étiqueter à l&#39;égard de diverses concentrations de nicotine utilisés, allant de 0-500 um. </li><li> Sélectionnez 4 pucerons, rouge ou vert, et de mettre dans ces coupes expérimentales. </li><li> Lors de la sélection des pucerons, il est important qu&#39;ils soient en âge de cohérent. Typiquement, chercher des pucerons de la même taille et la couleur (rouge, les pucerons deviennent plus sombres quand ils sont plus âgés). </li><li> Couvrir la tasse avec un morceau de parafilm. Joindre l&#39;alimentation entre les deux morceaux de parafilm. Partiellement étirer le niveau parafilm secondes sur les bords de la tasse. Aliquoter la diète liquide entre les couches, la couche d&#39;étanchéité et de haut en bas. </li><li> Conservez ces coupes dans la salle des insectes sous les lumières dans une photopériode longue journée pour 3 jours, après quoi les données de l&#39;expérience peuvent être collectées. </li></ol> S&#39;il vous plaît visitez <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825" target="_blank">examens annuels de biologie végétale</a> pour plus d&#39;informations sur ce protocole et l&#39;immunité des plantes aux insectes herbivores.

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

vérification de la tolérance à la nicotine chez les pucerons utiliser une alimentation artificielle experiment

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

Les plantes peuvent réguler positivement la production de nombreux métabolites seconday différents en réponse à l&#39;alimentation des insectes. Un de ces métabolites, la nicotine, est bien connu pour avoir des propriétés insecticides. Une réponse de plants de tabac à l&#39;herbivorie, ou d&#39;être rongées par des insectes, est d&#39;augmenter la production de cet alcaloïde neurotoxique. Ici, nous allons montrer comment mettre en place une expérience pour répondre à cette question de savoir si un tabac souche adaptée du puceron vert du pêcher, Myzus persicae, peuvent tolérer des niveaux élevés de nicotine que la souche A de cet insecte qui n&#39;a pas de tabac dans les infestent sur le terrain.

Dans cette vidéo, et le dosage est démontré que les tests de la tolérance de la nicotine à deux types de pucerons qui infestent les plantes de tabac sur le terrain et celui qui n&#39;en a pas.

Vérification de la tolérance à la nicotine chez les pucerons Utiliser une alimentation artificielle Experiment

Les plantes peuvent augmenter la production de nombreux métabolites secondaires différents en réponse à l'alimentation par des insectes. L'un de ces métabolites, la nicotine, est bien...

Les plantes peuvent réguler à la hausse la production de nombreux métabolites secondaires différents en réponse à l’alimentation par les insectes. Une réponse des plantes de tabac à l’herbivorie ne sont pas utilisées par les insectes est d’augmenter la production de l’alcaloïde neurotoxique nicotine, en utilisant la nicotine. À titre d’exemple, je montrerai comment mettre en place une expérience pour évaluer la toxicité des métabolites secondaires des plantes contre les pucerons.Certaines lignées de MiSiS persky, le puceron vert du pêcher se sont adaptées pour se spécialiser sur le tabac cultivé. Ici, nous émettons l’hypothèse que ces lignées adaptées au tabac ont une résistance accrue à la nicotine par rapport aux lignées non adaptatives. Bonjour, je m’appelle John Ramsey.Je suis étudiant diplômé dans le laboratoire de George Jander à l’Institut Bo Thompson de recherche sur les plantes. Aujourd’hui, je vais vous montrer une procédure pour mesurer la toxicité des métabolites des plantes contre les pucerons. Cette procédure consiste à préparer un régime artificiel auquel la plante métabolise d’intérêt.Dans ce cas, la nicotine est ajoutée à des concentrations variables, mettant les pucerons en cage, de sorte qu’ils se nourrissent de ce régime et comptant les pucerons après un certain nombre de jours pour mesurer la survie et la fécondité sur différentes concentrations de nicotine. Alors commençons. Avec l’expérience.Nous pouvons élever des pucerons avec des régimes artificiels, en profitant de leur style d’alimentation dans lequel ils insèrent un style S spécialisé dans le système vasculaire de la plante et consomment un régime de sève d’écoulement. Nous préparons un régime liquide similaire à celui que les A rencontrent en se nourrissant d’une plante composée de saccharose et d’acides aminés à cette solution. Nous ajoutons ensuite des concentrations variables du métabolite de la plante.Nous nous intéressons au dosage de la toxicité, dans ce cas, de la nicotine. Dans cette expérience, quatre pucerons adultes sont enfermés dans un petit gobelet en plastique. Ils se nourrissent à partir d’un régime liquide pipeté entre deux couches de biofilms tendus sur le dessus de la tasse après trois jours.La toxicité alimentaire des régimes contenant différentes concentrations de nicotine est comparée à celle des régimes témoins en comptant les pucerons adultes et larvaires dans chaque tasse. Il est maintenant temps de préparer le régime expérimental. J’ai ici une solution de saccharose et de 20 acides aminés.Les pucerons peuvent survivre et se reproduire normalement avec ce régime pendant au moins une semaine. Maintenant, j’ai aliquote ce régime dans un millilitre, Alec Watts contenant des concentrations variables de nicotine de zéro à 500 micromolaires dans ces tubes de fendor, puis quatre pucerons sont sélectionnés soit rouges, soit verts et mis dans ces gobelets expérimentaux. Un pinceau est utilisé pour retirer délicatement les pucerons de la feuille et les mettre dans la tasse expérimentale.Lors de la sélection des pucerons, il est important de choisir des insectes de la même taille générale et de la même couleur, comme celui-ci, qui peut être plus ancien et ne pas convenir à cette expérience. Ensuite, j’étire la première couche de phim sur le dessus de la tasse pour contenir les pucerons. Ensuite, je vais aliquote 100 microlitres de régime liquide entre les deux couches de paraforme, puis j’étire la deuxième couche de paraforme en la fixant sur les bords de la tasse.J’ai percé ces trous d’aération pour m’assurer qu’il y a une bonne circulation d’air tout au long de l’expérience, et je vais mettre cette tasse dans ce porte-tube et la placer sur une étagère dans la salle des insectes sous une longue période de photo sous les lumières. Nous pouvons donc examiner ici les résultats d’une expérience, que j’ai mise en place il y a trois jours, de la même manière que l’expérience que je viens de démontrer. J’ai une tasse de pucerons verts et rouges sur un régime à la nicotine zéro micromolaire, 10 micromolaires, 100 micromolaires et 1000 micromolaires ou un millimolaire.Et vous pouvez voir que pour le régime témoin zéro nicotine micromolaire, les pucerons rouges et verts survivent et se reproduisent. De même, sur le régime à 10 micromolaires, nous avons un grand nombre de descendants de pucerons rouges. Nous avons encore des adultes verts, mais ils n’ont pas beaucoup de progéniture.Ils peuvent donc ressentir les effets de la nicotine, même à une concentration aussi faible que 10 micromolaires. Ici, il n’y a pas de pucerons verts adultes survivants sur le régime à la nicotine de cent micromolaires, mais les pucerons rouges survivent et se reproduisent au même niveau que le contrôle. Vous pouvez voir sur le régime contenant 1000 micromolaires de nicotine.Ni les pucerons verts ni les pucerons rouges ne sont capables de survivre. Donc, sur cette base, nous pouvons envisager la possibilité que l’une des adaptations qui a permis à la lignée rouge MiSiS d’infester le tabac sur le terrain soit une capacité accrue à détoxifier la nicotine. Nous venons de vous montrer comment mettre en place une expérience d’utilisation de régimes artificiels pour mesurer la toxicité des métabolites secondaires des plantes contre les aphis.Lors de la mise en place de ces expériences, il est important de se rappeler de choisir des insectes qui non seulement ont la même taille et la même couleur, mais proviennent également de plantes à des stades de développement similaires. Donc c’est tout. Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.

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La résistance des plantes aux insectes herbivores mâcher peut être testée à plusieurs égards. Ici, nous montrons comment mettre en place un choix et une expérience non-choix avec la plante modèle Arabidopsis thaliana pour identifier la résistance contre les parasites des espèces Pieris rapae.

Les analyses et les choix non-choix pour tester la résistance de A. thaliana d&#39;insectes broyeurs

Les pucerons sont des transmetteurs efficaces des virus des plantes. Microinjection pucerons du virus, la procédure que nous allons vous montrer aujourd'hui, est une technique qui permet aux chercheurs d'injecter le virus directement dans le hemocoel du puceron, en contournant l'intestin, l'un des deux principaux obstacles à la transmission du virus d'une manière circulante. La même technique est également utilisée pour injecter ARNdb pour l'ARNi.

Test de la barrières physiologiques à la transmission virale chez les pucerons avec microinjection

Cette vidéo décrit le test de préférence gustative, une méthode comportementale utilisée pour mesurer l'attraction ou l'évitement envers les solutions colorées qui ont un goût différent en évaluant la coloration abdominale de la mouche après l'ingestion de la substance préférée. Le protocole présenté illustre la procédure utilisée pour mesurer la préférence des mouches pour les solutions de concentrations variables en saccharose.

Dosage de la préférence gustative : une méthode pour mesurer le comportement alimentaire chez la drosophile

Un nouveau test comportemental est décrit pour étudier les réponses gustatives à court terme des pièces buccales de bourdons (Bombus terrestris) en mouvement libre envers les nutriments et les toxines en solution.

A Novel Behavioral Assay d&#39;enquêter sur les réponses gustatifs de l&#39;individu, Librement-mobiles Bumble Bees (<em&gt; Bombus terrestris</em&gt;)

Le goût est un processus sensoriel important qui facilite l’attraction vers les substances bénéfiques et l’évitement des substances toxiques.  Ce protocole décrit un essai d’ingestion simple permettant de déterminer la préférence gustative de la drosophile pour un composé chimique donné.

Goût préférence Essai pour adultes<em&gt; Drosophila</em

Le puceron Aphis nerii colonise fortement défendues de plantes de la famille (Apocyanaceae) et offre de nombreuses possibilités pour étudier les interactions plantes-insectes. Nous présentons ici une série de protocoles pour l’entretien des plantes et des pucerons, cultures et la génération et l’analyse de moléculaire et données - omic pour a. nerii.

Maintien des Cultures biologiques et mesurer l’Expression des gènes dans l’Aphis nerii: un système Non-modèle pour les Interactions plantes-insectes

Nous décrivons ici la construction et l’utilisation d’un tunnel de vent pour odeur véhiculée par des tests comportements avec des insectes. La conception du tunnel de vent facilite la libération des sources d’odeurs par plusieurs méthodes, avec ou sans stimuli visuels. Des expériences de soufflerie sont des moyens importants pour identifier les substances chimiques volatiles actives sur le plan comportemental.

Une soufflerie pour odeur véhiculée par des tests comportements insectes

Le présent protocole fournit des informations pédagogiques sur l’utilisation du ver du tabac Manduca sexta dans la recherche sur les cannabinoïdes.  La méthode décrite ici comprend toutes les fournitures et protocoles nécessaires pour surveiller les changements physiologiques et comportementaux du modèle d’insecte en réponse au traitement au cannabidiol (CBD).

Le ver du tabac comme système modèle d’insecte pour les études précliniques sur les cannabinoïdes

Ce protocole décrit l’essai d’alimentation obligatoire pour évaluer l’effet potentiellement toxique d’un phytochimique sur les larves d’insectes lépidoptères. Il s’agit d’un essai biologique sur les insectes hautement évolutif, facile à optimiser la dose sublétale et létale, l’activité dissuasive et l’effet physiologique. Cela pourrait être utilisé pour le criblage d’insecticides respectueux de l’environnement.

Mise au point d’un système d’analyse de l’alimentation pour évaluer l’effet insecticide des composés phytochimiques sur Helicoverpa armigera

Ce protocole présente un système optimisé d’essais biologiques sur feuilles détachées pour évaluer l’efficacité des champignons entomopathogènes (FPE) contre le puceron de la moutarde (Lipaphis erysimi (Kalt.)), un insecte parthénogénétique. La méthode décrit le processus de collecte de données au cours des expériences sur les boîtes de Pétri, ce qui permet aux chercheurs de mesurer de manière cohérente la virulence de l’EPF contre les pucerons de la moutarde et d’autres insectes...

Évaluation de l’effet aphidicide des champignons entomopathogènes contre l’insecte parthénogénétique, le puceron de la moutarde, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Cet article présente un protocole détaillé pour l’élevage du papillon blanc du chou dans des conditions de laboratoire contrôlées avec un régime artificiel, ce qui permet des manipulations précises de la nutrition précoce et de l’exposition aux toxines. Les résultats représentatifs montrent comment la toxicité des métaux lourds peut être dosée avec ce protocole.

Élever le papillon blanc du chou (Pieris rapae) dans des conditions contrôlées : une étude de cas avec tolérance aux métaux lourds

Découvrez comment évaluer la tolérance des pucerons à la nicotine par alimentation artificielle. Cette méthode compare les lignées adaptées et non adaptées au tabac pour comprendre les mécanismes d'adaptation écologique.

Vérification de la tolérance à la nicotine chez les pucerons Utiliser une alimentation artificielle Experiment

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