Name: Évaluation colorimétrique de l’activité de la déodinase 1 chez les microsomes hépatiques humains à l’aide de la réaction de Sandell-Kolthoff (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:05:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Apprenez à quantifier l'inhibition de la déiodinase 1 (DIO1) dans les microsomes hépatiques humains grâce à un dosage colorimétrique utilisant la réaction de Sandell-Kolthoff. Cette méthode non radioactive permet le criblage à haut débit en toxicologie mécanistique.

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<ol><li>Kabir, E. R., Rahman, M. S., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+endocrine+disruptors+and+their+possible+impacts+on+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A review on endocrine disruptors and their possible impacts on human health.</a> Environ Toxicol Pharmacol. 40 (1), 241-258 (2015).</li>
<li>Yue, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+a+mixture+of+endocrine+disruptors+and+serum+levels+of+thyroid+hormones%3A+a+cross-sectional+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Sci%22%5BJournal%5D)">Human exposure to a mixture of endocrine disruptors and serum levels of thyroid hormones: a cross-sectional study.</a> J Environ Sci. 125, 641-649 (2023).</li>
<li>Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deiodinase+family%3A+selenoenzymes+regulating+thyroid+hormone+availability+and+action%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The deiodinase family: selenoenzymes regulating thyroid hormone availability and action.</a> Cell Mol Life Sci. 57 (13), 1853-1863 (2000).</li>
<li>Zhang, J., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+action+of+thyroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of action of thyroid hormones.</a> Annu Rev Physiol. 62 (1), 439-466 (2000).</li>
<li>França, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+type+1+iodothyronine+deiodinase+%28DIO1%29+mutations+cause+abnormal+thyroid+hormone+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Human type 1 iodothyronine deiodinase (DIO1) mutations cause abnormal thyroid hormone metabolism.</a> Thyroid. 31 (2), 202-207 (2020).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+predictivity+of+the+DIO1-SK+assay+to+investigate+DIO1+inhibition+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the predictivity of the DIO1-SK assay to investigate DIO1 inhibition in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 9 (2), 44-59 (2023).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+method+to+study+thyroid+hormone+disruption%3A+optimization+and+standardization+of+an+assay+to+assess+the+inhibition+of+DIO1+enzyme+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A new approach method to study thyroid hormone disruption: optimization and standardization of an assay to assess the inhibition of DIO1 enzyme in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 8 (3), 67-82 (2022).</li>
<li>Renko, K., Hoefig, C. S., Hiller, F., Schomburg, L., Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+iopanoic+acid+as+substrate+of+type+1+deiodinase+by+a+novel+nonradioactive+iodide-release+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Identification of iopanoic acid as substrate of type 1 deiodinase by a novel nonradioactive iodide-release assay.</a> Endocrinology. 153 (5), 2506-2513 (2012).</li>
<li>Renko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+nonradioactive+screening+method+identifies+genistein+and+xanthohumol+as+potent+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">An improved nonradioactive screening method identifies genistein and xanthohumol as potent inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Thyroid. 25 (8), 962-968 (2015).</li>
<li>Olker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+the+ToxCast+phase+1%2C+phase+2%2C+and+e1k+chemical+libraries+for+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Screening the ToxCast phase 1, phase 2, and e1k chemical libraries for inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Toxicol Sci. 168 (2), 430-442 (2019).</li>
<li>Sane, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+highly+potent+and+isoenzyme-selective+inhibitors+of+deiodinase+type+I+via+a+nonradioactive+high-throughput+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of highly potent and isoenzyme-selective inhibitors of deiodinase type I via a nonradioactive high-throughput screening method.</a> Thyroid. 35 (5), 576-589 (2025).</li>
<li>Visser, T. J., Van Overmeeren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+of+radioiodinated+propylthiouracil+to+rat+liver+microsomal+fractions%3A+stimulation+by+substrates+for+iodothyronine+5%E2%80%B2-deiodinase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Binding of radioiodinated propylthiouracil to rat liver microsomal fractions: stimulation by substrates for iodothyronine 5′-deiodinase.</a> Biochem J. 183 (1), 167-169 (1979).</li>
<li>Hindrichs, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+fast+online+SPE-LC-MS%2FMS+method+to+quantify+thyroid+hormone+metabolites+in+rat+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Res+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A novel and fast online SPE-LC-MS/MS method to quantify thyroid hormone metabolites in rat plasma.</a> Chem Res Toxicol. 37 (1), 33-41 (2024).</li>
<li>Kolthoff, I. M., Sandell, E. B., Lingane, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+persulfate-arsenite+method+for+manganese%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A modified persulfate-arsenite method for manganese.</a> Anal Chem. 8 (1), 73-73 (1936).</li>
<li>Stefanidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+robustness+and+accuracy+of+the+deiodinase+1+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the robustness and accuracy of the deiodinase 1 Sandell–Kolthoff assay: a comparative analysis.</a> Appl Vitro Toxicol. 10 (4), 80-90 (2024).</li>
<li>Satya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+document+on+standardised+test+guidelines+for+evaluating+chemicals+for+endocrine+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22OECD+Environ+Health+Saf+Publ%22%5BJournal%5D)">Guidance document on standardised test guidelines for evaluating chemicals for endocrine disruption.</a> OECD Environ Health Saf Publ. 150, (2012).</li>
<li>Joseph, O., Eberle, M., Lieberman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+in+urine+that+interfere+with+the+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay+for+urinary+iodine%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolites in urine that interfere with the Sandell–Kolthoff assay for urinary iodine.</a> Biol Trace Elem Res. 202 (2), 466-472 (2024).</li>
<li>May, W., Wu, D., Eastman, C., Bourdoux, P., Maberly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+automated+urinary+iodine+methods%3A+problems+of+interfering+substances+identified%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of automated urinary iodine methods: problems of interfering substances identified.</a> Clin Chem. 36 (6), 865-869 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Thio-&bêta ;-D-glucose sel sodique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6375-1G</td><td>CAS 10593-29-0</td></tr><tr><td>3,3',5'-triiodothyronine (rT3)&nbsp ;</td><td>Santa Cruz Biotechnologie</td><td>SC-209692</td><td>CAS 5817-39-0</td></tr><tr><td>6-Propyl-2-thiouracil (6PTU)</td><td>Supelco</td><td>P3755-10G</td><td>CAS 51-52-5</td></tr><tr><td>Acide acétique</td><td>Thermo Fisher</td><td>9526-33</td><td>CAS 64-19-7</td></tr><tr><td>Bilan analytique</td><td>NA</td><td>NA</td><td>capable de peser avec précision jusqu’à 30 g avec une lisibilité de 0,1 mg</td></tr><tr><td>Oxyde de sodium d’arsenic (NaAsO2)</td><td>Thermo Fisher</td><td>041533.AP</td><td>CAS 7784-46-5</td></tr><tr><td>Plaques d’essai (format à 96 puits)</td><td>Merck</td><td>Z707902-108EA</td><td>par exemple, plaques de culture tissulaire, plaque à 96 puits, fond plat, polystyrène, 0,34 cm2, stérile, 108/cs, TPP</td></tr><tr><td>Aurothioglucose (ATG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0606-5MG</td><td>CAS 12192-57-3</td></tr><tr><td>Tubes centrifugeuses 15 et 50&nbsp ; mL</td><td>Merck</td><td>Z707724-800EA, Z707716-320EA</td><td>par exemple, tubes centrifugeuses TPP, volumes 15 et 50 mL, polypropylène, &nbsp ;</td></tr><tr><td>Centrifugeuse avec rotor basculant pour plaques de micro-titrage</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Elles devraient être assez hautes pour accueillir une plaque de puits de 96 puits de profondeur avec une feuille filtrante de 96 puits au-dessus (au moins 6 cm de haut).</td></tr><tr><td>Cérium (IV) sulfate d’ammonium (Ce(NH4)4(SO4)4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22269-100G-F</td><td>CAS 10378-47-9</td></tr><tr><td>Incubateur à CO2</td><td>NA</td><td>NA</td><td>capable de maintenir des températures de 37°C ; C, 5 % de CO2 et &ge ; 90 % d’humidité</td></tr><tr><td>Plaques de puits profonds (format 96 puits)</td><td>Supelco</td><td>575653-U</td><td>par exemple SPE 96 - Plaque de collecte carrée carrée profonde, volume de puits 2 mL, polypropylène</td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO)</td><td>AppliChem</td><td>A3672,0250</td><td>CAS 67-68-5</td></tr><tr><td>Dithiothréitol (TDT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779-1G</td><td>CAS 3483-12-3</td></tr><tr><td>Acide éthylénédiaminetétraacétique (EDTA) & nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>APO456787707-500G</td><td>CAS 6381-92-6</td></tr><tr><td>Plaques filtrantes (format 96 puits)</td><td>Merck</td><td>WHA77002810</td><td>par exemple Micro-Plates, 96-puits, polystyrène clair, 800 & micro ; L, liaison ADN, Whatman</td></tr><tr><td>Scellants de plaques étanches au gaz</td><td>Thermo Fisher</td><td>232698</td><td>par exemple ruban d’étanchéité, polyester, stérile, ruban d’étanchéité, polyester, stérile, Nunc</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Pan Biotech</td><td>P05-01100</td><td>CAS 7365-45-9</td></tr><tr><td>Microsomes hépatiques humains</td><td>Biovit</td><td>X008070</td><td>par exemple, INVITROCYP 150 - Microsomes hépatiques humains regroupés par donneurs</td></tr><tr><td>Iodure (norme CI)</td><td>Supelco</td><td>41271-100ML</td><td>par exemple, norme d’iodure pour CI, 1000 mg/L dans l’eau, Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Résine à échange ionique comme la Dowex 50WX2</td><td>Roth</td><td>334.4</td><td>CAS 12612-37-2 ; Mesh 100-200</td></tr><tr><td>Tubes microcentrifuge 1,5&nbsp ; mL</td><td>Merck</td><td>EP0030120086-1PAK</td><td>par exemple Eppendorf & reg ; Tubes de microcentrifuge Safe-Lock, volume 1,5 mL, naturels</td></tr><tr><td>Distributeur multicanal capable de délivrer 50 à 300 & nbsp ; & micro ; L par étape</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipette multicanal capable de délivrer de 10 à 100 & nbsp ; & micro ; L par étape</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Un pH-mètre avec électrode et tampons d’étalonnage</td><td>NA</td><td>NA</td><td>capable de lire +/- 0,1 unités de pH</td></tr><tr><td>Photomètre pour la mesure de l’absorbance</td><td>Tecan Trading AG</td><td>NA</td><td>par exemple Sunrise Absorbance Reader, INSTSUN-3</td></tr><tr><td>Pipettes capables de délivrer de 1 à 10 & nbsp ; & micro ; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Des pipettes capables de délivrer de 10 à 100 &nbsp ; & micro ; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipettes capables de délivrer de 100 à 1000 & nbsp ; & micro ; L&nbsp ;</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipettes pour des volumes plus élevés</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Pipettes sérologiques, par exemple 10, 25, 50 mL</td></tr><tr><td>Vibrateur de plaque</td><td>Thermo Fisher</td><td>NA</td><td>par exemple, plaque micro-titer Thermo Scientific H+P monoshake vortexer, directement contrôlée</td></tr><tr><td>Pipette à répéteur</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Chlorure de sodium (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888-25G</td><td>CAS : 7647-14-5, par exemple chlorure de sodium, réactif ACS, etc. 99.0 %</td></tr><tr><td>Logiciels de statistiques</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Capable d’effectuer une analyse de régression reflétant les caractéristiques du test et capable de calculer les concentrations inhibitrices, par exemple GraphPad Prims 8, GraphPad</td></tr><tr><td>Acide sulfurique (H2SO4)&nbsp ;</td><td>Supelco</td><td>1007311000</td><td>CAS 7664-93-9</td></tr><tr><td>Flasque volumétrique</td><td>NA</td><td>NA</td><td>certifié avec un volume défini</td></tr></tbody></table>

Évaluation colorimétrique de l’activité de la déodinase 1 chez les microsomes hépatiques humains à l’aide de la réaction de sandell-kolthoff

Colorimetric Assessment of Deiodinase 1 Activity in Human Liver Microsomes Using the Sandell-Kolthoff Reaction

Évaluation colorimétrique de l’activité de la déodinase 1 chez les microsomes hépatiques humains à l’aide de la réaction de Sandell-Kolthoff

This method enables the identification of test substances that inhibit DIO1 activity and may thus interfere with thyroid hormone homeostasis. The protocol ...

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