Name: Imagerie à super-résolution et gestion partagée : un protocole pour la microscopie confocale avec détection multiplex (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Découvrez une méthode d'imagerie à super-résolution accessible utilisant un microscope confocal à détection multiplex. Ce protocole permet d'atteindre ~120 nm pour étudier les structures cellulaires et sous-cellulaires dans des cellules fixes et vivantes.

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<ol><li>Prakash, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+in+super-resolution+microscopy+-+definition%2C+trade-offs+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Resolution in super-resolution microscopy - definition, trade-offs and perspectives.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 25, 677-682 (2024).</li>
<li>Schermelleh, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+microscopy+demystified%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution microscopy demystified.</a> Nat Cell Biol. 21, 72-84 (2019).</li>
<li>Bond, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technological+advances+in+super-resolution+microscopy+to+study+cellular+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Technological advances in super-resolution microscopy to study cellular processes.</a> Mol Cell. 82, 315-332 (2022).</li>
<li>Huff, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+new+2D+super-resolution+mode+for+ZEISS+Airyscan%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">The new 2D super-resolution mode for ZEISS Airyscan.</a> Nat Methods. 14, 1223(2017).</li>
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<li>Yin, W., Liu, S. S., Zhao, Q. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+strategy+for+fast+super-resolution+imaging+parameters+based+on+LSM+900%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimization strategy for fast super-resolution imaging parameters based on LSM 900.</a> Chin J Cell Biol. 47, 1644-1655 (2025).</li>
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<li>Ranjan, R., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+live+cell+imaging+of+subcellular+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Super-resolution live cell imaging of subcellular structures.</a> J Vis Exp. (167), e61563(2021).</li>
<li>Harmer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airyscan+super+resolution+microscopy+to+study+trypanosomatid+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Airyscan super resolution microscopy to study trypanosomatid cell biology.</a> Methods Mol Biol. 2116, 449-461 (2020).</li>
<li>Lin, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+functions+and+management+of+laser+scanning+confocal+microscopy+LSM880+with+Airyscan%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chin+Electron+Microsc+Soc%22%5BJournal%5D)">Advanced functions and management of laser scanning confocal microscopy LSM880 with Airyscan.</a> J Chin Electron Microsc Soc. 38, 271-275 (2019).</li>
<li>Li, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+imaging+characteristics+and+applications+of+LSCM880+with+Airyscan+and+spinning+disk+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Technol+Innov+Appl%22%5BJournal%5D)">Comparative study on imaging characteristics and applications of LSCM880 with Airyscan and spinning disk confocal microscopy.</a> Technol Innov Appl. 32, 4-8 (2020).</li>
<li>Huff, J., Bergter, A., Luebbers, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+mode+for+the+LSM+9+series+with+Airyscan+2%3A+fast+and+gentle+confocal+super-resolution+in+large+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplex mode for the LSM 9 series with Airyscan 2: fast and gentle confocal super-resolution in large volumes.</a> Nat Methods. 16, 1159-1163 (2019).</li>
<li>Chen, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depletion+of+Vasohibin+1+speeds+contraction+and+relaxation+in+failing+human+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Depletion of Vasohibin 1 speeds contraction and relaxation in failing human cardiomyocytes.</a> Circ Res. 127, 14-27 (2020).</li>
<li>Sandin, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+simultaneous+laser+scanning+confocal+and+atomic+force+microscopy+%28conpokal%29+on+live+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Near simultaneous laser scanning confocal and atomic force microscopy (conpokal) on live cells.</a> J Vis Exp. (162), e61433(2020).</li>
<li>Castagnini, D., Palma, K., Jara Wilde, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+Imaging+of+Proteus+mirabilis+biofilm+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Super-resolution Imaging of Proteus mirabilis biofilm by expansion microscopy.</a> J Vis Exp. (221), e67932(2025).</li>
<li>Wolf, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+live-cell+super-resolution+imaging+of+mitochondrial+cristae+and+quantification+of+submitochondrial+membrane+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Method for live-cell super-resolution imaging of mitochondrial cristae and quantification of submitochondrial membrane potentials.</a> Methods Cell Biol. 155, 545-555 (2020).</li>
<li>Wu, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+perylene+carboximide+fluorophores+for+live-cell+super-resolution+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Near-infrared perylene carboximide fluorophores for live-cell super-resolution imaging.</a> J Am Chem Soc. 146, 7135-7139 (2024).</li>
<li>Pfanzelter, J., Mostowy, S., Way, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septins+suppress+the+release+of+vaccinia+virus+from+infected+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Septins suppress the release of vaccinia virus from infected cells.</a> J Cell Biol. 217, 2911-2929 (2018).</li>
<li>Kolossov, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airyscan+super-resolution+microscopy+of+mitochondrial+morphology+and+dynamics+in+living+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Airyscan super-resolution microscopy of mitochondrial morphology and dynamics in living tumor cells.</a> Microsc Res Tech. 81, 115-128 (2018).</li>
<li>He, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+macrophages+monitor+and+remove+particles+from+urine+to+prevent+tubule+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Renal macrophages monitor and remove particles from urine to prevent tubule obstruction.</a> Immunity. 57, 106-123 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&nbsp ; Cellules COS7</td><td>ATCC (ou équivalent)</td><td>CRL-1651</td><td>Lignée cellulaire de fibroblastes rénaux de singe vert africain. Utilisé pour la préparation d’échantillons à cellules fixes pour l’imagerie multicolore super-résolution &nbsp ;</td></tr><tr><td>&nbsp ; IgG anti-souris Donkey, conjugué Alexa Fluor 568</td><td>Invitrogen (ou équivalent)</td><td>A10037</td><td>Anticorps secondaire pour la coloration des microtubules. Utilisé à 1:500 de dilution</td></tr><tr><td>&nbsp ; Dulbecco » s Médium Eagle modifié (DMEM), glycémie élevée</td><td>Gibco (ou similaire)</td><td>11965092</td><td>Milieu de culture standard pour cellules COS7, complété avec un FBS à 10 %.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Sérum fœtal bovin (FBS), inactivé par la chaleur</td><td>Gibco (ou similaire)</td><td>10082147</td><td>Supplément sérique utilisé à 10 % (v/v) dans tous les milieux de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Antenne d’imagerie à fond de verre (35 mm, &micro-Dish, #1,5 Couche polymère de protection, épaisseur 0,17 mm)</td><td>Ibidi (ou similaire)</td><td>81156</td><td>Substrat pour le plaquage cellulaire et l’imagerie. Essentiel pour la compatibilité avec les objectifs d’immersion en huile à haute teneur d’énergie nucléaire.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Traitement d’image & logiciel d’analyse (modules ZEN)</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>ZEN 3.5 (bleu)</td><td>Utilisé pour la reconstruction 3D, le traitement en super-résolution (par exemple, le traitement Airyscan), la mesure de la PSF et l’analyse SNR.</td></tr><tr><td>&nbsp ; ImageJ / Fidji</td><td>Open Source</td><td>N/A</td><td>Utilisé pour la reconstruction 3D supplémentaire, la génération de vues orthogonales et l’analyse générale des images.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Huile d’immersion (Indice de réfraction = 1,518)</td><td>Carl Zeiss (ou similaire)</td><td>444960-0000-000</td><td>Pour une utilisation avec des objectifs d’immersion à l’huile (par exemple, 63x/1,4 NA).</td></tr><tr><td>&nbsp ; Système de microscope confocal à balayage laser avec détecteur à réseau multiplex (par exemple, ZEISS LSM 900 avec Airyscan 2)</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>LSM 900 (Airyscan 2)</td><td>La plateforme d’imagerie principale utilisée pour tous les modes confocaux et super-résolution décrits dans le protocole.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Médium Essentiel Minimum (MEM) avec Earle' s Salts</td><td>Gibco (ou similaire)</td><td>11095080</td><td>Milieu de culture standard pour les cellules Hep3B, complété par 10 % de FBS.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Anticorps monoclonal anti-alpha--tubuline de souris (Clone DM1A)</td><td>Sigma-Aldrich (ou similaire)</td><td>T6199</td><td>Anticorps primaire pour le marquage des microtubules. Utilisé à 1:500 de dilution</td></tr><tr><td>&nbsp ; Paraformodéhyde (PFA), 4 % dans PBS</td><td>&nbsp ; Jinpan&nbsp ; (ou similaire)</td><td>TBS5083</td><td>Fixateur pour les cellules. À utiliser à température ambiante pendant 15 minutes. Manipulez cela avec les précautions appropriées.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Médium d’imagerie sans rouge de phénol</td><td>Gibco (ou similaire)</td><td>21063029</td><td>Milieu à faible autofluorescence utilisé pour l’imagerie de cellules vivantes. Pré-équilibré avec 5 % de CO2 à 37 °C ; C avant utilisation.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Solution saline tamponnée phosphate (PBS), 1X, pH 7,4</td><td>CellWorld (ou équivalent)</td><td>C0162-311</td><td>Utilisé comme tampon de lavage et de dilution tout au long du protocole.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Fixation antifade en or ProLong</td><td>Invitrogen (ou équivalent)</td><td>P36930</td><td>Milieu de montage durci pour préserver la fluorescence dans des échantillons fixes.</td></tr><tr><td>&nbsp ; Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich (ou similaire)</td><td>T8787</td><td>Utilisé à 0,1 % (v/v) pour la perméabilisation cellulaire</td></tr><tr><td>&nbsp ; Préadolescent-20</td><td>Sigma-Aldrich (ou similaire)</td><td>P9416</td><td>Utilisé à 0,05 % (v/v) dans le PBS (PBST) pour les étapes de lavage après l’incubation des anticorps.</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine (BSA), fraction V</td><td>Sigma-Aldrich (ou similaire)</td><td>A7906</td><td>Utilisé à 1 % (p/v) dans le PBS pour le blocage et comme composant du tampon de dilution d’anticorps.</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-phénylindole)</td><td>Sigma-Aldrich (ou similaire)</td><td>D9542</td><td>Contre-stain nucléaire. Utilisé à une concentration finale de 1 & micro ; g/mL.</td></tr><tr><td>Anti-IgG de l’âne, conjugué Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen (ou équivalent)</td><td>A21206</td><td>Anticorps secondaire contre la coloration mitochondriale. Utilisé à 1:500 de dilution</td></tr><tr><td>Microsphères fluorescentes (billes), diamètre de 100 nm</td><td>Invitrogen (par exemple, TetraSpeck&trade ;) ou similaires</td><td>T7279</td><td>Utilisé pour la mesure empirique du système fonction de dispersion de points (PSF) et résolution.</td></tr><tr><td>Cellules Hep3B exprimant de manière stable les mitochondries d’EGFP</td><td>IMMOCELL</td><td>IM-H367</td><td>Lignée cellulaire d’hépatomes humains, conçue pour exprimer de manière stable l’EGFP ciblant la matrice mitochondriale. Utilisé pour l’imagerie en accéléré de cellules vivantes.</td></tr><tr><td>Solution tampon HEPES, 1 M</td><td>Gibco (ou similaire)</td><td>15630080</td><td>Utilisé à une concentration finale de 25 mM dans un milieu d’imagerie pour la stabilisation du pH lors d’images en direct, à l’extérieur d’un incubateur CO2.</td></tr><tr><td>Verre de couverture haute précision (#1,5, 0,17 mm d’épaisseur)</td><td>Marienfeld (ou équivalent)</td><td>107052</td><td>Utilisé pour monter des échantillons fixes.</td></tr><tr><td>Logiciel d’exploitation pour microscope (par exemple, édition ZEN blue)</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>ZEN 3.5 (bleu)</td><td>Utilisé pour le contrôle système, l’acquisition d’images et le traitement de base.</td></tr><tr><td>Objectif : Plan-apochromat 63x/1.40 NA Oil DIC</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>421462-9900-000</td><td>Objectif principal utilisé pour l’imagerie haute résolution.</td></tr><tr><td>Anticorps polyclonal anti-TOMM20 de Rabbit</td><td>Abcam (ou équivalent)</td><td>ab186735</td><td>Anticorps primaire pour le marquage des mitochondries. Utilisé à dilution 1:1000 &nbsp ;</td></tr></tbody></table>

imagerie à super-résolution et gestion partagée : un protocole pour la microscopie confocale avec détection multiplex

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