Name: Production et test de peptides antimicrobiens et de leurs mimiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:08:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: Découvrez la synthèse et l'évaluation de peptides antimicrobiens et de leurs mimiques comme Mel4 et RK-758. Ce protocole standardisé permet de mesurer l'activité antibactérienne et la cytotoxicité pour accélérer la découverte de nouveaux agents anti-infectieux.

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<ol><li>Naghavi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+bacterial+antimicrobial+resistance+1990%E2%80%932021%3A+a+systematic+analysis+with+forecasts+to+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global burden of bacterial antimicrobial resistance 1990–2021: a systematic analysis with forecasts to 2050.</a> Lancet. 404 (10459), 1199-1226 (2024).</li>
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<li>Keshri, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LL-37%2C+the+master+antimicrobial+peptide%2C+its+multifaceted+role+from+combating+infections+to+cancer+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Antimicrob.+Agents%22%5BJournal%5D)">LL-37, the master antimicrobial peptide, its multifaceted role from combating infections to cancer immunity.</a> Int. J. Antimicrob. Agents. 65 (1), 107398(2025).</li>
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<li>Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptides+chemistry%2C+manufacturing%2C+and+controls%5BTitle%5D)+AND+%22Peptide+Science%3A+Chemical+Ligation%2C+Lead+Generation%2C+and+Therapeutic+Advances%22%5BJournal%5D)">Peptides chemistry, manufacturing, and controls.</a> Peptide Science: Chemical Ligation, Lead Generation, and Therapeutic Advances. , 471-508 (2025).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+purification+of+antimicrobial+peptide+buforin+IIb+in+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Expression and purification of antimicrobial peptide buforin IIb in Escherichia coli.</a> Biotechnol. Lett. 33 (11), 2121-2126 (2011).</li>
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<li>Gentilucci, L., De Marco, R., Cerisoli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modifications+designed+to+improve+peptide+stability%3A+incorporation+of+non-natural+amino+acids%2C+pseudo-peptide+bonds%2C+and+cyclization.%C2%A0Curr.+Pharm+pseudo-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Des%22%5BJournal%5D)">Chemical modifications designed to improve peptide stability: incorporation of non-natural amino acids, pseudo-peptide bonds, and cyclization. Curr. Pharm pseudo-peptide.</a> Des. 16 (28), 3185-3203 (2010).</li>
<li>Kuppusamy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+the+anthranilamide+peptidomimetic+design+to+selectively+target+planktonic+bacteria+and+biofilm%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Tuning the anthranilamide peptidomimetic design to selectively target planktonic bacteria and biofilm.</a> Antibiotics. 12 (3), 585(2023).</li>
<li>Kuppusamy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guanidine+functionalized+anthranilamides+as+effective+antibacterials+with+biofilm+disruption+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Guanidine functionalized anthranilamides as effective antibacterials with biofilm disruption activity.</a> Org. Biomol. Chem. 16 (32), 5871-5888 (2018).</li>
<li>Wiegand, I., Hilpert, K., Hancock, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agar+and+broth+dilution+methods+to+determine+the+minimal+inhibitory+concentration+%28MIC%29+of+antimicrobial+substances%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances.</a> Nat. Protoc. 3 (2), 163-175 (2008).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adsorption+and+morphology+analysis+of+bovine+serum+albumin+on+a+micropillar-enhanced+quartz+crystal+microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Adsorption and morphology analysis of bovine serum albumin on a micropillar-enhanced quartz crystal microbalance.</a> J. Phys. Chem. B. 128 (41), 10247-10257 (2024).</li>
<li>Yasir, M., Dutta, D., Willcox, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+antimicrobial+peptides+and+ciprofloxacin+against+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Activity of antimicrobial peptides and ciprofloxacin against Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Molecules. 25 (17), (2020).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+determination+of+susceptibility+of+bacteria+to+antimicrobial+agents.+terminology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Infect%22%5BJournal%5D)">Methods for the determination of susceptibility of bacteria to antimicrobial agents. terminology.</a> Clin. Microbiol. Infect. 4 (5), 291-296 (1998).</li>
<li>Saetan, T., Sukwattanasinitt, M., Wacharasindhu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mild+photocatalytic+synthesis+of+guanidine+from+thiourea+under+visible+light%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Lett%22%5BJournal%5D)">A mild photocatalytic synthesis of guanidine from thiourea under visible light.</a> Org. Lett. 22 (20), 7864-7869 (2020).</li>
<li>Woodring, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disrupting+the+conserved+salt+bridge+in+the+trimerization+of+influenza+A+nucleoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Disrupting the conserved salt bridge in the trimerization of influenza A nucleoprotein.</a> J. Med. Chem. 63 (1), 205-215 (2019).</li>
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<li>Deni, W. H., Gao, T., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+reconstituting+peptides%2Fpeptidomimetics+from+DMSO+to+aqueous+buffers+for+circular+dichroism+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for reconstituting peptides/peptidomimetics from DMSO to aqueous buffers for circular dichroism analyses.</a> STAR Protoc. 5 (1), 102850(2024).</li>
<li>Lou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+production+systems+and+optimization+strategies+of+antimicrobial+peptides%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Microbiol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microbial production systems and optimization strategies of antimicrobial peptides: a review.</a> World J. Microbiol. Biotechnol. 41 (2), 66(2025).</li>
<li>Hancock, R. E., Sahl, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+and+host-defense+peptides+as+new+anti-infective+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial and host-defense peptides as new anti-infective therapeutic strategies.</a> Nat. Biotechnol. 24 (12), 1551-1557 (2006).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-éthanedithiol</td><td>Oakwood&nbsp ;</td><td>M03555</td><td></td></tr><tr><td>100X Antibiotiques</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955-20ML</td><td></td></tr><tr><td>1-Hydrhydrate d’éthyle-3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide</td><td>Blocs combinés</td><td>SS-7536</td><td>Désormais désigné sous le nom de EDC</td></tr><tr><td>2-Naphthoylchlorure</td><td>Blocs combinés</td><td>OR-0173</td><td></td></tr><tr><td>Acide acétique &nbsp ;</td><td>Ajax Finechem</td><td>R18401O</td><td></td></tr><tr><td>Acétonitrile</td><td>VWR&nbsp ;</td><td>20060.35</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatase alcaline</td><td>New England Biolabs</td><td>M0525S</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine (BSA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A1933</td><td></td></tr><tr><td>Bouillon Mueller-Hinton ajusté par cations (CAMHB)</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>212322</td><td></td></tr><tr><td>Cbz-L-Trp</td><td>Blocs combinés</td><td>QB-6691</td><td></td></tr><tr><td>Colistine & nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C4461</td><td></td></tr><tr><td>Dey-Engley (D/E) Bouillon neutralisant</td><td>Oxoïde</td><td>R453042</td><td></td></tr><tr><td>Terre de diatomée (Célite 545)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>102693</td><td>Taille de particule de 0,02 à 0,1 mm</td></tr><tr><td>Dichlorométhane (DCM)</td><td>VWR&nbsp ;</td><td>23366.327</td><td></td></tr><tr><td>Éther diéthylique</td><td>Approvisionnement en chimie</td><td>EA036</td><td></td></tr><tr><td>Diméthyl Sulfoxyde (DMSO)</td><td>Chem-Supply Pty Ltd&nbsp ;</td><td>LCS-CHEM-0098</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothréitol (TDT)</td><td>Thermo Scientific</td><td>J15397.03</td><td></td></tr><tr><td>Milieu de culture DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific & nbsp ;</td><td>UCS-BIO-0058</td><td></td></tr><tr><td>Hôte de E. coli BL21(DE3)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>70235-M</td><td></td></tr><tr><td>Électroporateur</td><td>Thermo Scientific</td><td>NEON1SK</td><td></td></tr><tr><td>Acétate d’éthyle</td><td>Approvisionnement en chimie</td><td>EA011-2.5L-P</td><td></td></tr><tr><td>Acide éthylédiamine tétraacétique (EDTA)</td><td>Thermo Scientific</td><td>118432500</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>12003C-500ML</td><td></td></tr><tr><td>TEV Protease&nbsp (His-étiqueté) ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4455</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxybenzotriazole Hydrate</td><td>Chem-Implèx</td><td>24755</td><td></td></tr><tr><td>Imidazole</td><td>Thermo Scientific</td><td>288-32-4</td><td></td></tr><tr><td>Isopropyle &bêta ;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I6758</td><td></td></tr><tr><td>Bouillon Luria-Bertani (LB), &nbsp ;</td><td>Thermo Scientific</td><td>12795027</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse &nbsp ;</td><td>Thermo Scientific</td><td>89822</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de mercure (II)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>215465</td><td></td></tr><tr><td>Méthanol (Grage HPLC)</td><td>VWR</td><td>A452-4K</td><td></td></tr><tr><td>Réactif MTT</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M2128-100MG</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diisopropyléthhylamine (DIPEA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3440</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diméthyl formamide (DMF)</td><td>Approvisionnement en chimie</td><td>RP1051</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop</td><td>Thermo Scientific</td><td>ND-ONE</td><td></td></tr><tr><td>N-Boc-éthylénediamine</td><td>Blocs combi</td><td>AM-1613</td><td></td></tr><tr><td>Colonne de résine d’affinité NTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>70666</td><td></td></tr><tr><td>Palladium sur le carbone</td><td>Sigma Aldrich</td><td>205699</td><td>10 % en fonction publique par semaine</td></tr><tr><td>Kit de purification des plasmides</td><td>QIAGEN</td><td>27104</td><td></td></tr><tr><td>Tubes micro-titrés en polypropylène & nbsp ;</td><td>SARSTEDT&nbsp ;</td><td>72.690.008</td><td></td></tr><tr><td>Gel de silice pour la chromatographie en colonne flash</td><td>Silicycle</td><td>R12030B</td><td>Silica Gel 60, 230-400 mesh &nbsp ;</td></tr><tr><td>Gel de silice Plaque chromatographie en couche fine</td><td>Merk</td><td>1055540001</td><td>Épaisseur de couche de 0,2 mm sur support en aluminium avec indicateur fluorescent de 254 nm</td></tr><tr><td>Phosphate de sodium, 0,2M tampon</td><td>Thermo Scientific</td><td>J63816. AP</td><td></td></tr><tr><td>Plaque micro-titer en polypropylène à fond plat stérile de 96 puits avec couvercle</td><td>Corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA Ligase</td><td>New England Biolabs</td><td>M0202S</td><td></td></tr><tr><td>Triéthylamine (Et3N)</td><td>Approvisionnement en chimie</td><td>TR02151000</td><td></td></tr><tr><td>Acide trifluoroacétique (TFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCL</td><td>Thermo Scientific</td><td>J62848. AK</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Thermo Scientific</td><td>A16046.AE</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de trypan</td><td>MP BIOMÉDICALS AUSTRALIE PTY LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA (0,25 %)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4049-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase soja agar & nbsp ;</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>211043</td><td></td></tr><tr><td>Urée & nbsp ;</td><td>Thermo Scientific</td><td>29700</td><td></td></tr><tr><td>Vecteur (promoteur T7)</td><td>-</td><td></td><td>plasmide de nombre élevé de copies choisi</td></tr></tbody></table>

production et test de peptides antimicrobiens et de leurs mimiques

Production and Testing of Antimicrobial Peptides and Their Mimics

Production et test de peptides antimicrobiens et de leurs mimiques

Antimicrobial peptides (AMPs) and their synthetic mimics are emerging as promising alternatives to conventional antibiotics, particularly in response to ...

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Peptides amides tertiaires (APE) sont une superfamille de peptidomimétiques qui incluent, mais ne sont pas limités à des peptides, des peptoïdes et les peptides N-méthylés. Nous décrivons ici une méthode synthétique qui combine à la fois divisée et-piscine et stratégies sous-monomères pour synthétiser un une bille bibliothèque d'un composé de PTA.

Split-et-piscine Synthèse et caractérisation de peptides tertiaire Amide Bibliothèque

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Développement d&#39;un Backbone peptide cyclique Bibliothèque en tant que potentiel Antiparasitaires Therapeutics Utilisation irradiation micro-ondes

Ici, nous présentons des protocoles pour cribler et caractériser rapidement l’activité antimicrobienne des enzymes. Le test de diffusion sur microlames et le test de libération de colorant utilisent des substrats bactériens cibles pour l’évaluation qualitative et quantitative de l’activité enzymatique.

Les analyses qualitatives et quantitatives pour la détection et la caractérisation des antimicrobiens en protéines

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Une méthode de microdilution bouillon simple et adaptable pour le dépistage des substances antifongiques et extraits.

Bouillon Microdilution In Vitro Screening : une méthode simple et rapide pour détecter les nouveaux composés antifongiques

Le protocole présente l' Escherichia coli-basée d’incorporation de la pression sélective des acides aminés non canoniques (ANAC) dans la nisine de peptide antimicrobien lactocoques. Ses propriétés peuvent être modifiées au cours de l’expression recombinants par substitution avec désiré ANAC dans les milieux de culture définis. Les changements qui en résultent dans la bioactivité sont mappés par tests d’inhibition de la croissance et la microscopie de fluorescence.

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Nous présentons ici un protocole pour produire des Gram négatif Escherichia coli (e.coli) sphéroplastes et Gram positif Bacillus megaterium (b. megaterium) protoplastes pour visualiser clairement et rapidement caractériser interactions peptide-bactéries. Cela fournit une méthode systématique pour définir la membrane localisation et translocation des peptides.

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Production d’anticorps monoclonaux ciblant l’aminopeptidase N dans l’épithélium de la muqueuse intestinale porcine

Ce protocole décrit une méthode permettant d’obtenir des données quantitatives sur l’activité antifongique de peptides et d’autres composés, tels que des agents antifongiques à petites molécules, contre Candida albicans. Son utilisation de la densité optique plutôt que de compter les unités formant colonie pour quantifier l’inhibition de la croissance permet d’économiser du temps et des ressources.

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Test activité Protozoacidal du ligand-lytique peptides contre Gut Termite protozoaires In vitro (Culture protozoaires) et In vivo (Microinjection dans Termite Intestin postérieur)

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