Name: Flux de travail de la tomographie cryo-électronique pour tissus épais démontré dans l’hippocampe de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-27T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 6 s
Description: Découvrez un flux de travail standardisé de cryo-tomographie électronique pour tissus épais démontré dans l'hippocampe de souris. Cette méthode intègre congélation cryogénique, microscopie FIB et imagerie avancée pour l'analyse structurale in situ.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Young, L. N., Villa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bringing+structure+to+cell+biology+with+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Bringing structure to cell biology with cryo-electron tomography.</a> Annu Rev Biophys. 52 (1), 573-595 (2023).</li>
<li>Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomography%3A+A+long+journey+to+the+inner+space+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomography: A long journey to the inner space of cells.</a> Cell. 185 (15), 2649-2652 (2022).</li>
<li>Hong, Y., Song, Y., Zhang, Z., Li, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomography%3A+The+resolution+revolution+and+a+surge+of+in+situ+virological+discoveries%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomography: The resolution revolution and a surge of in situ virological discoveries.</a> Annu Rev Biophys. 52 (1), 339-360 (2023).</li>
<li>Nogales, E., Mahamid, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+structural+and+cell+biology+with+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Bridging structural and cell biology with cryo-electron microscopy.</a> Nature. 628 (8006), 47-56 (2024).</li>
<li>Schur, F. K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+high-resolution+in+situ+structural+biology+with+cryo-electron+tomography+and+subtomogram+averaging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Toward high-resolution in situ structural biology with cryo-electron tomography and subtomogram averaging.</a> Curr Opin Struct Biol. 58, 1-9 (2019).</li>
<li>Briggs, J. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+biology+in+situ%E2%80%94the+potential+of+subtomogram+averaging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural biology in situ—the potential of subtomogram averaging.</a> Curr Opin Struct Biol. 23 (2), 261-267 (2013).</li>
<li>Berger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomography+on+focused+ion+beam+lamellae+transforms+structural+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomography on focused ion beam lamellae transforms structural cell biology.</a> Nat Methods. 20 (4), 499-511 (2023).</li>
<li>McCafferty, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+cellular+electron+microscopy+with+multimodal+data+to+explore+biology+across+space+and+time%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Integrating cellular electron microscopy with multimodal data to explore biology across space and time.</a> Cell. 187 (3), 563-584 (2024).</li>
<li>Pöge, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+plant+tissue+accessible+for+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Making plant tissue accessible for cryo-electron tomography.</a> Elife. 106455, 1-41 (2025).</li>
<li>Bäuerlein, F. J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomography+of+large+biological+specimens+vitrified+by+plunge+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Preprint.+bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomography of large biological specimens vitrified by plunge freezing.</a> Preprint. bioRxiv. , (2023).</li>
<li>Creekmore, B. C., Kixmoeller, K., Black, B. E., Lee, E. B., Chang, Y. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+of+human+brain+tissue+vitrified+from+autopsy+revealed+by+cryo-ET+with+cryo-plasma+fib+milling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure of human brain tissue vitrified from autopsy revealed by cryo-ET with cryo-plasma fib milling.</a> Nat Commun. 15 (1), 2660(2024).</li>
<li>Chen, Z., Guo, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovations+in+cryo-electron+tomography+for+tissues%3A+Challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Innovations in cryo-electron tomography for tissues: Challenges and future prospects.</a> Curr Opin Struct Biol. 93, 103112(2025).</li>
<li>Dubochet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+microscopy+of+vitrified+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Q+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron microscopy of vitrified specimens.</a> Q Rev Biophys. 21 (2), 129-228 (2009).</li>
<li>Matsui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-electron+tomographic+investigation+of+native+hippocampal+glutamatergic+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Cryo-electron tomographic investigation of native hippocampal glutamatergic synapses.</a> Elife. 13, RP98458(2024).</li>
<li>Ning, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uncovering+synaptic+and+cellular+nanoarchitecture+of+brain+tissue+via+seamless+in+situ+trimming+and+milling+for+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Preprint.+bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Uncovering synaptic and cellular nanoarchitecture of brain tissue via seamless in situ trimming and milling for cryo-electron tomography.</a> Preprint. bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vhut-cryo-fib%2C+a+method+to+fabricate+frozen+hydrated+lamellae+from+tissue+specimens+for+in+situ+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Vhut-cryo-fib, a method to fabricate frozen hydrated lamellae from tissue specimens for in situ cryo-electron tomography.</a> J Struct Biol. 213 (3), 107763(2021).</li>
<li>Glynn, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+generalizable+and+targeted+molecular+biopsy+approach+for+in+situ+cryogenic+electron+tomography+of+vitreous+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">A generalizable and targeted molecular biopsy approach for in situ cryogenic electron tomography of vitreous brain tissue.</a> Cell Rep Methods. 5 (7), 101080(2025).</li>
<li>Kelley, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Waffle+method%3A+A+general+and+flexible+approach+for+improving+throughput+in+fib-milling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Waffle method: A general and flexible approach for improving throughput in fib-milling.</a> Nat Commun. 13 (1), 1857(2022).</li>
<li>Pierson, J., Ziese, U., Sani, M., Peters, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+vitreous+cryo-section-induced+compression+at+the+macromolecular+level+using+electron+cryo-tomography%3B+80s+yeast+ribosomes+appear+unaffected%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Exploring vitreous cryo-section-induced compression at the macromolecular level using electron cryo-tomography; 80s yeast ribosomes appear unaffected.</a> J Struct Biol. 173 (2), 345-349 (2011).</li>
<li>Alamoudi, A., Studer, D., Dubochet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+artefacts+and+cutting+process+in+vitreous+sections+for+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Cutting artefacts and cutting process in vitreous sections for cryo-electron microscopy.</a> J Struct Biol. 150 (1), 109-121 (2005).</li>
<li>Rigort, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused+ion+beam+micromachining+of+eukaryotic+cells+for+cryoelectron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Focused ion beam micromachining of eukaryotic cells for cryoelectron tomography.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (12), 4449-4454 (2012).</li>
<li>Mahamid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+focused+ion+beam+milling+and+lift-out+approach+for+site-specific+preparation+of+frozen-hydrated+lamellas+from+multicellular+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A focused ion beam milling and lift-out approach for site-specific preparation of frozen-hydrated lamellas from multicellular organisms.</a> J Struct Biol. 192 (2), 262-269 (2015).</li>
<li>Marko, M., Hsieh, C., Schalek, R., Frank, J., Mannella, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused-ion-beam+thinning+of+frozen-hydrated+biological+specimens+for+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Focused-ion-beam thinning of frozen-hydrated biological specimens for cryo-electron microscopy.</a> Nat Methods. 4 (3), 215-217 (2007).</li>
<li>Engel, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+architecture+of+the+Chlamydomonas+chloroplast+revealed+by+in+situ+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Native architecture of the Chlamydomonas chloroplast revealed by in situ cryo-electron tomography.</a> Elife. 4, e04889(2015).</li>
<li>Hayles, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+making+of+frozen-hydrated%2C+vitreous+lamellas+from+cells+for+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">The making of frozen-hydrated, vitreous lamellas from cells for cryo-electron microscopy.</a> J Struct Biol. 172 (2), 180-190 (2010).</li>
<li>Rubino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+site-specific+focused-ion-beam+lift-out+method+for+cryo+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A site-specific focused-ion-beam lift-out method for cryo transmission electron microscopy.</a> J Struct Biol. 180 (3), 572-576 (2012).</li>
<li>Schiøtz, O. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+lift-out%3A+Sampling+the+molecular+anatomy+of+whole+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Serial lift-out: Sampling the molecular anatomy of whole organisms.</a> Nat Methods. 21 (9), 1684-1692 (2023).</li>
<li>Nguyen, H. T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serialized+on-grid+lift-in+sectioning+for+tomography+%28solist%29+enables+a+biopsy+at+the+nanoscale%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Serialized on-grid lift-in sectioning for tomography (solist) enables a biopsy at the nanoscale.</a> Nat Methods. 21 (9), 1693-1701 (2024).</li>
<li>Tang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step-by-step+procedure+for+an+optimized+serial+lift-out+cryo-focused+ion+beam+milling+technique+in+tissue+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">Step-by-step procedure for an optimized serial lift-out cryo-focused ion beam milling technique in tissue analysis.</a> Biophys Rep. 11, 1-13 (2025).</li>
<li>Wolff, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mind+the+gap%3A+Micro-expansion+joints+drastically+decrease+the+bending+of+fib-milled+cryo-lamellae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Mind the gap: Micro-expansion joints drastically decrease the bending of fib-milled cryo-lamellae.</a> J Struct Biol. 208 (3), 107389(2019).</li>
<li>Berger, C., Watson, H., Naismith, J. H., Dumoux, M., Grange, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenon+plasma+focused+ion+beam+lamella+fabrication+on+high-pressure+frozen+specimens+for+structural+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Xenon plasma focused ion beam lamella fabrication on high-pressure frozen specimens for structural cell biology.</a> Nat Commun. 16 (1), 2286(2025).</li>
<li>Eisenstein, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+cryo+electron+tomography+on+in+situ+lamellae%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Parallel cryo electron tomography on in situ lamellae.</a> Nat Methods. 20 (1), 131-138 (2022).</li>
<li>Peck, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aretomolive%3A+Automated+reconstruction+of+comprehensively-corrected+and+denoised+cryo-electron+tomograms+in+real-time+and+at+high+throughput%5BTitle%5D)+AND+%22Preprint.+bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Aretomolive: Automated reconstruction of comprehensively-corrected and denoised cryo-electron tomograms in real-time and at high throughput.</a> Preprint. bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Liu, Y. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isotropic+reconstruction+for+electron+tomography+with+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Isotropic reconstruction for electron tomography with deep learning.</a> Nat Commun. 13 (1), 6482(2022).</li>
<li>Chen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+data+processing+workflow+for+cryo-ET+and+subtomogram+averaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A complete data processing workflow for cryo-ET and subtomogram averaging.</a> Nat Methods. 16 (11), 1161-1168 (2019).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reduction+of+fib+damage+on+cryo-lamella+by+lowering+energy+of+ion+beam+revealed+by+a+quantitative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">The reduction of fib damage on cryo-lamella by lowering energy of ion beam revealed by a quantitative analysis.</a> Structure. 31 (10), 1275-1281.e4 (2023).</li>
<li>Tacke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+streamlined+workflow+for+automated+cryo+focused+ion+beam+milling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">A streamlined workflow for automated cryo focused ion beam milling.</a> J Struct Biol. 213 (3), 107743(2021).</li>
<li>Boltje, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryogenic%2C+coincident+fluorescence%2C+electron%2C+and+ion+beam+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">A cryogenic, coincident fluorescence, electron, and ion beam microscope.</a> Elife. 11, e82891(2022).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+fluorescence+microscopy+%28IFLM%29+for+cryo-fib-milling+and+in-situ+cryo-ET%5BTitle%5D)+AND+%22Preprint.+bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Integrated fluorescence microscopy (IFLM) for cryo-fib-milling and in-situ cryo-ET.</a> Preprint. bioRxiv. , (2023).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eli+trifocal+microscope%3A+A+precise+system+to+prepare+target+cryo-lamellae+for+in+situ+cryo-ET+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Eli trifocal microscope: A precise system to prepare target cryo-lamellae for in situ cryo-ET study.</a> Nat Methods. 20 (2), 276-283 (2023).</li>
<li>Medeiros, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+workflow+and+instrumentation+for+cryo-focused+ion+beam+milling+of+samples+for+electron+cryotomography%5BTitle%5D)+AND+%22Ultramicroscopy%22%5BJournal%5D)">Robust workflow and instrumentation for cryo-focused ion beam milling of samples for electron cryotomography.</a> Ultramicroscopy. 190, 1-11 (2018).</li>
<li>Goetz, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+platform+for+automated+cryo-fib+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">A modular platform for automated cryo-fib workflows.</a> Elife. 10, e70506(2021).</li>
<li>Eisenstein, F., Fukuda, Y., Danev, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+parallel+automated+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Smart parallel automated cryo-electron tomography.</a> Nat Methods. 21 (9), 1612-1615 (2024).</li>
<li>Swulius, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+learning-based+segmentation+of+cryo-electron+tomograms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Deep learning-based segmentation of cryo-electron tomograms.</a> J Vis Exp. (189), e64435(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Hexadécène</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H2131</td><td>Produits chimiques & Réactifs</td></tr><tr><td>2-méthylpentane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M65807</td><td>Produits chimiques & Réactifs</td></tr><tr><td>Anneau à clips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1131750; 1188953</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Feuille de cuivre</td><td>Matériaux métalliques Fengcheng</td><td>1 & micro ; Épaisseur m</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Grilles TEM de support en cuivre (100 maillages)</td><td>Beijing Zhongjingkeyi Technology Co., Ltd</td><td>BZ10021b</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Cryo-EM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Krios G4</td><td>Équipement&nbsp ;</td></tr><tr><td>Cryo-FIB</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Aquilos 2</td><td>Équipement&nbsp ;</td></tr><tr><td>Autogrille cryo-FIB</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1205101</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Grilles (UltrAufoil R 1.2/1.3 maillage 300)</td><td>Quantifoil</td><td>AltrAufoil</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Congélateur haute pression</td><td>Leica Microsystems</td><td>EM ICE</td><td>Équipement&nbsp ;</td></tr><tr><td>Porteur HPF, cuivre</td><td>Leica Microsystems</td><td>Type B (6 mm)</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Coater à Ion-Sputter</td><td>Quorum</td><td>Q150RS plus</td><td>Équipement&nbsp ;</td></tr><tr><td>Pâte de polissage métallographique</td><td>Lab-testec</td><td>W0.5</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Polissage du tissu</td><td>GORAL</td><td>B00809</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Papier de verre</td><td>Papier de verre de marque Eagle</td><td>8000 grains, 12000 grains</td><td>Consommables</td></tr><tr><td>Stéréomicroscope</td><td>Leica Microsystems</td><td>S9i</td><td><a name="RANGE ! D17">Équipement&nbsp ; </a ></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>200-334-9</td><td>Produits chimiques & Réactifs</td></tr><tr><td>Logiciels d’acquisition de la série Tilt</td><td>https://bio3d.colorado.edu/SerialEM/</td><td>SerialEM 4.0.9</td><td>Logiciels</td></tr><tr><td>Alignement et alignement de la série Tilt Logiciels de reconstruction</td><td>https://github.com/czimaginginstitute/AreTomo3&nbsp ;</td><td>AreTomo 3</td><td>Logiciels</td></tr><tr><td>Logiciels d’acquisition de la série Tilt</td><td>https://github.com/eisfabian/PACEtomo</td><td>PaceTomo</td><td>Logiciels</td></tr><tr><td>Alignement et alignement de la série Tilt Logiciels de reconstruction</td><td>https://github.com/IsoNet-cryoET/IsoNet</td><td>IsoNet</td><td>Logiciels</td></tr><tr><td>Alignement et alignement de la série Tilt Logiciels de reconstruction</td><td>https://github.com/cryoem/eman2</td><td>EMAN2</td><td>Logiciels</td></tr><tr><td>Alignement et alignement de la série Tilt Logiciels de reconstruction</td><td>https://relion.readthedocs.io/en/release-4.0/index.html</td><td>Relion 4</td><td>Logiciels</td></tr></tbody></table>

flux de travail de la tomographie cryo-électronique pour tissus épais démontré dans l’hippocampe de souris

Cryo-Electron Tomography Workflow for Thick Tissues Demonstrated in Mouse Hippocampus

Flux de travail de la tomographie cryo-électronique pour tissus épais démontré dans l’hippocampe de souris

Cryo&#8209;electron tomography (cryo&#8209;ET) enables 3D visualization of native cellular ultrastructure, but its application to thick tissues is limited ...

cryo-electron-tomography-workflow-for-thick-tissues-demonstrated

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Démonstration dans cette vidéo sont les techniques pour flash de congélation et de sectionnement des tissus cérébraux embryonnaires à partir de la souris. Conseils utiles pour l'utilisation du cryostat sont donnés, y compris les méthodes de dépannage qui peut être utilisé pendant la coupe pour s'assurer que les sections résultante tissus sont exempts de fissures et d'autres distorsions.

Flash de congélation et Cryosectioning E12.5 cerveau de souris

Nous décrivons ici une méthode rapide et simple à l'image des cellules marquées par fluorescence dans les tranches de cerveau semi-épais. En fixant, le tranchage, et optiquement compensation du tissu cérébral, nous décrivons comment la norme d'imagerie à épifluorescence ou confocale peut être utilisé pour visualiser les cellules individuelles et des réseaux neuronaux dans les tissus nerveux intact.

Une approche rapide à l&#39;imagerie de fluorescence à haute résolution dans les tranches de cerveau semi-épais

Dans cette vidéo, nous montrons la section d’un tissu tumoral cérébral de souris congelé à l’aide d’un cryostat. Les coupes de tissu cérébral congelé ainsi obtenues sont stockées à basse température jusqu’à une analyse plus approfondie.

Coupe de tissu cérébral de souris congelée : une procédure pour obtenir de fines sections de tissu congelé à partir de tissu cérébral murin congelé

Afin de préserver les processus neuronaux pour l'analyse ultrastructurale, nous décrivons un protocole pour le placage de neurones primaires sur des grilles de microscopie électronique suivies par la congélation instantanée, ce qui donne des échantillons en suspension dans une couche de glace vitreuse. Ces échantillons peuvent être examinés avec un microscope cryo-électronique pour visualiser les structures à l'échelle nanométrique.

Préparation de neurones primaires pour visualiser Neurites à l&#39;état congelé-hydraté utilisant microscopie cryo-électronique

Ici, un protocole décrivant les étapes de préparation des échantillons et de collecte de données requises en cryomodensitométrie à rayons X mous (SXT) pour imager l’ultrastructure de cellules entières cryo-préservées à une résolution de 25 nm demi-pas, est présenté.

Une description cartographique 3D de la cellule par cryo tomographie par rayons X mous

Utilisation du broyage par faisceau d’ions focalisés pour produire des lamelles vitreuses sur grille à partir d’échantillons biologiques congelés pour la cryotomographie électronique.

Préparation de lamelles à partir d’échantillons biologiques vitreux à l’aide d’un microscope électronique à balayage à double faisceau pour la cryotomographie électronique

Nous présentons un protocole pour la préparation de lamelles d’échantillons biologiques congelés par micro-usinage par faisceau d’ions cryo-focalisé pour des études structurelles à haute résolution de macromolécules in situ avec cryo-tomographie électronique. Le protocole présenté fournit des lignes directrices pour la préparation de lamelles de haute qualité avec une reproductibilité élevée pour la caractérisation structurelle des macromolécules à l’intérieur des Saccharomyces cerevisiae.

Préparation et micro-usinage Cryo-FIB de Saccharomyces cerevisiae pour la cryo-tomographie électronique

La demande croissante de collecte de données à grande échelle en tomographie électronique cryogénique nécessite des routines d’acquisition d’images à haut débit. Décrit ici est un protocole qui met en œuvre les développements récents de stratégies d’acquisition avancées visant à maximiser l’efficacité du temps et le débit de la collecte de données tomographiques.

Stratégies d’optimisation de l’acquisition de données de tomographie électronique cryogénique

La tomographie cryo-STEM permet de visualiser les organites de cellules intactes sans enrobage, sectionnement ou autres préparations invasives. La résolution 3D obtenue est actuellement de l’ordre de quelques nanomètres, avec un champ de vision de plusieurs micromètres et une épaisseur accessible de l’ordre de 1 μm.

Visualisation d’organites in situ par tomographie cryo-STEM

Ce flux de travail permet la production de lamelles ciblant des structures biologiques marquées par fluorescence qui sont petites (&lt;1 μm d’étendue axiale) et rares (1 copie par cellule) à l’aide d’une plateforme d’imagerie cryogénique tri-coïncidente. Cette plate-forme intègre la microscopie à fluorescence, le broyage par faisceau d’ions focalisés et la microscopie électronique à balayage à une seule position focale et permet la microscopie à fluorescence simultanée pendant le broyage.

Flux de travail à l’aide d’un microscope cryogénique à fluorescence coïncidente, à faisceau d’électrons et d’ions pour le broyage ciblé de cellules

Découvrez un flux de travail standardisé de cryo-tomographie électronique pour tissus épais démontré dans l'hippocampe de souris. Cette méthode intègre congélation cryogénique, microscopie FIB et imagerie avancée pour l'analyse structurale in situ.

Flux de travail de la tomographie cryo-électronique pour tissus épais démontré dans l’hippocampe de souris

Explorer plus de vidéos