Name: Isolement des cellules satellites du muscle squelettique pour les études de myogenèse in vitro (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Découvrez un protocole optimisé pour isoler les cellules satellites du muscle squelettique de souris adultes et néonatales. Cette méthode combine digestion enzymatique, filtration séquentielle et tri magnétique pour obtenir des myoblastes primaires de haute pureté.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,25 % de trypsine-EDTA&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>100 & micro ; Filtre à cellules m & nbsp ;</td><td>VWR</td><td>732-2759</td><td></td></tr><tr><td>30 & micro ; M Stool&nbsp ;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>40 & micro ; Filtre à cellules m & nbsp ;</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td></td></tr><tr><td>70 & micro ; Filtre à cellules m & nbsp ;</td><td>VWR</td><td>130-095-823</td><td></td></tr><tr><td>Acide acétique &nbsp ;</td><td>POCH</td><td>568760114</td><td>Dissous dans dH2O jusqu’à une concentration finale de 20 mM et stérilisé à 0,2 & micro ; Filtre m</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, anti-lapin pour l’âne</td><td>Invitrogen&nbsp ;</td><td>A21206</td><td>Dissous dans une solution de blocage (voir Section 8.7) à une dilution 1:250</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, anti-souris contre les chèvres & nbsp ;</td><td>Abcam</td><td>ab150113</td><td>Dissous dans une solution de blocage (voir Section 8.7) à une dilution 1:250</td></tr><tr><td>Chlorure d’ammonium (NH4Cl)&nbsp ;</td><td>BioShop</td><td>AMC303.500</td><td>Dissous dans l’eau jusqu’à une concentration finale de 50 mM</td></tr><tr><td>Médias de montage antifade</td><td>Vectashield</td><td>H-2000-10</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-PAX7</td><td>Abcam</td><td>ab187339</td><td>Dissous dans une solution de blocage (voir Section 8.7) à une dilution 1:100</td></tr><tr><td>Facteur de croissance de fibroblaste de base &nbsp ;</td><td>Corning</td><td>354060</td><td>Dissous dans dH2O stérile jusqu’à une concentration de stock de 10 & micro ; g/mL&nbsp ;</td></tr><tr><td>Bétadine, 100 mg/mL</td><td>EGIS Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire, 6 puits, Cell+</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3902.300</td><td></td></tr><tr><td>Extrait d’embryon de poulet & nbsp ;</td><td>MP Biomédicals</td><td>2850145</td><td></td></tr><tr><td>Collagène I, queue de rat</td><td>Gibco</td><td>A10483-01</td><td>Dissous dans 20 mM d’acide acétique &nbsp ;</td></tr><tr><td>Collagénase, type I</td><td>Sigma</td><td>C0130-500MG</td><td>Dissous dans du DMEM et stérilisé par un 0,2 & micro ; Filtre m</td></tr><tr><td>Tube de dissociation (douces tubes C MACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco’s Modified Eagle Medium, glycémie élevée</td><td>Gibco</td><td>31966-021</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>Tubes centrifugeuses coniques Falcon, 15 mL</td><td>Corning</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Tubes centrifugeuses coniques Falcon, 50 mL</td><td>Corning</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>Gibco</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Sérum pour chevaux & nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Réactif de marquage magnétique (Kit d’isolation des cellules satellites)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-268</td><td></td></tr><tr><td>Séparateur magnétique (Séparateur MidiMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>CLS356234</td><td>Dissous dans du DMEM à 10 % de concentration &nbsp ;</td></tr><tr><td>Paraformoldéhyde, 4 % dans PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J61899. AK</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine &nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée phosphate & nbsp ;</td><td>VWR</td><td>392-0334</td><td></td></tr><tr><td>Colonne de séparation (colonnes LS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps de la myosine du muscle squelettique, MHC</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-32732</td><td>Dissous dans une solution bloqueante (voir Section 8.7) à une dilution de 1:50</td></tr><tr><td>Antenne TC, 100 x 20 mm</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Dissociateur tissulaire (Dissociateur GentleMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100 & nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-1L</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement des cellules satellites du muscle squelettique pour les études de myogenèse in vitro

Isolation of Skeletal Muscle Satellite Cells for In Vitro Myogenesis Studies

Isolement des cellules satellites du muscle squelettique pour les études de myogenèse in vitro

Skeletal muscle regeneration and growth depend on satellite cells, the muscle tissue&#39;s resident stem cells. Currently, these cells serve as ...

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Biology

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La technique de micro-disséqués explants est une méthode robuste et fiable pour isoler proliférative des cellules musculaires squelettiques de juvéniles, adultes ou embryonnaires muscles comme source de cellules souches du muscle squelettique. Uniquement, ces cellules ont été tirés par clonage pour produire des lignes squelettiques musculaires cellules souches utilisées pour la transplantation in vivo.

Adultes et embryonnaires Culture squelettique Microexplant musculaire et isolement de cellules souches du muscle squelettique

Cette vidéo démontre l’isolement des cellules satellites des tissus musculaires branchiomériques de la tête de rat par dissection tissulaire, digestion enzymatique et purification mécanique et centrifuge ultérieure. Les cellules sont ensuite ensemencées sur des puits recouverts de matrice extracellulaire pour se différencier en myoblastes, puis en myotubes et en fibres musculaires matures.

Technique permettant d’isoler des cellules satellites du tissu musculaire de la tête de rat

Isolement et culture des fibres musculaires est...

Isolement et culture des fibres musculaires individuelles et de leurs cellules satellites du muscle squelettique adulte

L'isolement et la culture d'une population pure de cellules satellites quiescentes, une population de cellules souches musculaires, est essentielle à la compréhension de muscle tige de la biologie cellulaire et la régénération, ainsi que la transplantation de cellules souches pour des thérapies dans la dystrophie musculaire et d'autres maladies dégénératives.

L&#39;isolement, la culture, et la transplantation de cellules satellites du muscle

La culture in vitro systèmes ont prouvé indispensable à notre compréhension de la myogenèse des vertébrés. Cependant, il reste beaucoup à apprendre sur le développement du muscle squelettique non-mammifère et la croissance, en particulier dans les taxons de base. Un protocole efficace et robuste pour isoler les cellules souches adultes de ce tissu, les cellules précurseurs myogéniques (PPM), et de maintenir leur auto-renouvellement, la prolifération et la différenciation dans un contexte de...

Préparation du primaire Myogenic précurseurs cellulaires / cultures de myoblastes de basales vertébrés lignées

Les principaux types de cellules adhérentes dérivées du muscle humain sont les cellules myogéniques et les fibroblastes. Ici, les populations cellulaires sont enrichies à l’aide d’un tri cellulaire activé par magnétisme basé sur l’antigène CD56. L’immunomarquage ultérieur avec des anticorps spécifiques et l’utilisation de techniques d’analyse d’images permettent de quantifier les caractéristiques cytoplasmiques et nucléaires dans les cellules individuelles.

Isolement et quantitative immunocytochimique caractérisation des cellules myogéniques primaires et fibroblastes de muscle squelettique humain

Ce protocole décrit l'isolement de cellules satellites de muscles de la tête branchiomeric d'un rat âgé de 9 semaines. Les muscles proviennent de différents arcs branchiaux. Par la suite, les cellules satellites sont cultivées sur une couche de tache de taille millimétrique pour étudier leur différenciation. Cette approche permet d'éviter l'expansion des passages et des cellules satellites.

L&#39;isolement et la caractérisation des cellules satellites de Muscles Rat chef Branchiomeric

L’identification précise des cellules satellites est essentielle pour l’étude de leurs fonctions dans des conditions physiologiques et pathologiques différents. Cet article présente un protocole pour identifier les cellules satellites sur des coupes de muscle squelettique adulte par axée sur l’immunofluorescence souillant.

Identification des cellules satellites musculaires squelettiques par Immunofluorescence avec des anticorps de laminine et Pax7

Ce protocole illustre 1) l’isolement et la culture de fibroblastes primaires à partir du muscle gastrocnémien de souris adulte ainsi que 2) la purification et la caractérisation des exosomes à l’aide d’une méthode d’ultracentrifugation différentielle combinée à des gradients de densité de saccharose suivis d’analyses par western blot.

Isolement et caractérisation d’exosomes à partir de fibroblastes musculaires squelettiques

Ici, nous proposons une méthode pour obtenir efficacement des fibres musculaires simples aux premiers stades post-natals du développement de l’homozygote mutant Lamin Δ8-11 modèle de souris, un modèle très sévère pour Emery-Dreifuss dystrophie musculaire (EDMD).

Isolement et culture myofiber uniques à partir d’un modèle murin de la dystrophie musculaire Emery-Dreifuss dans le développement post-natal précoce

Le muscle squelettique comprend plusieurs types de cellules, y compris les cellules souches résidentes, chacune ayant une contribution particulière à l’homéostasie et à la régénération musculaires. Ici, la culture 2D de cellules souches musculaires et la niche des cellules musculaires dans un environnement ex vivo qui préserve de nombreuses caractéristiques physiologiques, in vivo et environnementales sont décrites.

Culture en vrac non fractionnée de muscles squelettiques de souris pour récapituler la niche et la quiescence des cellules souches

Découvrez un protocole optimisé pour isoler les cellules satellites du muscle squelettique de souris adultes et néonatales. Cette méthode combine digestion enzymatique, filtration séquentielle et tri magnétique pour obtenir des myoblastes primaires de haute pureté.

Isolement des cellules satellites du muscle squelettique pour les études de myogenèse in vitro

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