Name: Une technique pour stabiliser les protéines membranaires dans les nanodisques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-30T13:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Découvrez une méthode de reconstitution du canal potassique humain Task2 dans des nanodisques pour la biologie structurale. Ce protocole améliore la stabilité et l'homogénéité des protéines membranaires pour l'analyse par cryo-microscopie électronique.

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<ol><li>Rask-Andersen, M., Almén, M. S., Schiöth, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+exploitation+of+novel+drug+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Trends in the exploitation of novel drug targets.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 10 (8), 579-590 (2011).</li>
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<li>Nakao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Home+is+where+the+lipids+are%3A+a+comparison+of+MSP+and+DDDG+nanodiscs+for+membrane+protein+research%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Home is where the lipids are: a comparison of MSP and DDDG nanodiscs for membrane protein research.</a> Soft Matter. 21 (33), 6596-6602 (2025).</li>
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<li>Tao, X., Zhao, C., MacKinnon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+protein+isolation+and+structure+determination+in+cell-derived+membrane+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Membrane protein isolation and structure determination in cell-derived membrane vesicles.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 120 (18), e2302325120(2023).</li>
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<li>Ren, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DeFrND%3A+detergent-free+reconstitution+into+native+nanodiscs+with+designer+membrane+scaffold+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">DeFrND: detergent-free reconstitution into native nanodiscs with designer membrane scaffold peptides.</a> Nat. Commun. 16 (1), 7973(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Bio-billes</td><td>Bio-rad</td><td>1523920</td><td></td></tr><tr><td>Cholestéryl hémisuccinato</td><td>Anatrace</td><td>CH210</td><td></td></tr><tr><td>Chloroforme</td><td>Sinoréagent</td><td></td><td>Utilisation dans une hotte à fumée</td></tr><tr><td>GÉNIAL</td><td>Avanti</td><td>850725P</td><td></td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Sinoréagent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>n-Dodécyl-bêta-D-maltoside</td><td>Anatrace</td><td>D310</td><td></td></tr><tr><td>N-pentane</td><td>Adamas</td><td></td><td>Utilisation dans une hotte à fumée</td></tr><tr><td>POPC</td><td>Avanti</td><td>850457P</td><td></td></tr><tr><td>POPS</td><td>Avanti</td><td>840034P</td><td></td></tr><tr><td>SEC</td><td>Bio-rad</td><td></td><td>Suivez le protocole du fabricant pour une utilisation correcte</td></tr><tr><td>Tubulure de dialyse SnakeSkin</td><td>Thermo</td><td>68011</td><td></td></tr><tr><td>Superose&nbsp ; 6 Augmentation 10/300 GL</td><td>Cytiva</td><td>29091596</td><td></td></tr><tr><td>Colonnes de spin d’ultrafiltration Amicon Ultra-15</td><td>Millipore</td><td>UFC905008</td><td></td></tr></tbody></table>

une technique pour stabiliser les protéines membranaires dans les nanodisques

A Technique for Stabilizing Membrane Proteins in Nanodiscs

Une technique pour stabiliser les protéines membranaires dans les nanodisques

Many membrane proteins exhibit poor stability, loss of activity, and sample heterogeneity when extracted in detergent-based environments, posing ...

a-technique-for-stabilizing-membrane-proteins-in-nanodiscs

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Biology

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NANODISQUES sont de petites particules discoïdes qui incorporent des protéines membranaires dans un petit lopin de bicouche phospholipidique. Nous fournir un protocole visuelle montre que l'incorporation étape par étape du transporteur MalFGK2 dans un disque.

Une méthode étape par étape pour la reconstitution d&#39;un transporteur ABC dans des particules lipidiques Nanodisc

β protéines de membrane externe (OMP) remplissent de nombreuses fonctions au sein des membranes externes des bactéries à Gram négatif, des mitochondries et des chloroplastes. Ici, nous espérons pallier un goulot d’étranglement connu dans les études structurales en présentant des protocoles pour la production d’OMP à β-baril en quantités suffisantes pour la détermination de la structure par cristallographie aux rayons X ou spectroscopie RMN.

De Constructs à cristaux - Vers Structure Détermination de β-cylindre externe protéines membranaires

Nous présentons un protocole pour fonctionnaliser verre avec des taches de protéines nanométriques entourées par une bicouche lipidique fluide. Ces substrats sont compatibles avec la microscopie optique de pointe et devraient servir de plate-forme pour les études d'adhésion cellulaire et la migration.

Nano-Ligand Arrays cluster dans un pris en charge Lipid bicouches

De nombreuses protéines remplissent leur fonction lorsqu’elles sont attachées à des surfaces membranaires. La liaison des protéines extrinsèques sur les membranes des nanodisques peut être imagée indirectement par microscopie électronique à transmission. Nous montrons que l’empilement caractéristique (rouleau) des nanodisques induit par la coloration négative phosphotungstate de sodium est empêché par la liaison de protéines extrinsèques.

Méthode pour visualiser et analyser membrane protéines interagissant par microscopie électronique à transmission

Ce protocole montre comment obtenir un modèle basse résolution ab initio et des détails de structure d’une protéine de membrane solubilisée détergent en solution par la diffusion des neutrons de petits angles avec filtrage de contraste du détergent.

Correspondance de contraste de détergent dans les expériences de diffusion de neutrons de petits angles pour l’analyse structurale de protéines membranaires et la modélisation de Ab Initio

Nous présentons une méthode qui combine la purification et la reconstitution de protéine de membrane en peptidiscs en une seule étape chromatographique. Les échafaudages biotinylated sont employés pour l'attachement direct de surface et la mesure des interactions protéine-ligand par l'intermédiaire de l'interférométrie de biocouche.

PeptiQuick, une incorporation en une seule étape des protéines de membrane dans les Peptidiscs biotinylated pour les essais de liaison de protéine rationalisés

Présenté ici est un protocole pour la détermination de l’état oligomérique des protéines membranaires qui utilise un système de nanoparticules de membrane cellulaire indigène en conjonction avec la microscopie électronique.

Système de nanoparticules de membrane cellulaire indigène pour l’analyse d’interaction protéine-protéine de membrane

L’insertion co-translationnelle dans des nanodisques préformés permet d’étudier des protéines membranaires synthétisées acellulaires dans des environnements lipidiques définis sans contact avec des détergents. Ce protocole décrit la préparation des composants essentiels du système et les paramètres critiques pour améliorer l’efficacité de l’expression et la qualité de l’échantillon.

Insertion co-translationnelle de protéines membranaires dans des nanodisques préformés

Ici, un protocole est décrit pour générer des motifs protéiques régulés par la lumière et réversibles avec une grande précision spatio-temporelle au niveau de membranes lipidiques artificielles. La méthode consiste en la photoactivation localisée de la protéine iLID (dimère inductible par la lumière améliorée) immobilisée sur des membranes modèles qui, sous la lumière bleue, se lie à sa protéine partenaire Nano (SspB de type sauvage).

Motifs protéiques dynamiques induits par la lumière au niveau de membranes modèles

Nous présentons un protocole pour reconstituer les protéines membranaires et encapsuler des enzymes et d’autres composants solubles dans l’eau dans des vésicules lipidiques de taille submicrométrique et micrométrique.

Construction de réseaux métaboliques hors équilibre dans des vésicules de taille nanométrique et micrométrique

Découvrez une méthode de reconstitution du canal potassique humain Task2 dans des nanodisques pour la biologie structurale. Ce protocole améliore la stabilité et l'homogénéité des protéines membranaires pour l'analyse par cryo-microscopie électronique.

Une technique pour stabiliser les protéines membranaires dans les nanodisques

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