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<table><tbody><tr><td>4&prime;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62248</td><td>dilué 1:2000 pour l'immunomarquage</td></tr><tr><td>50 mL Tube de centrifugation filtre (0,22 &micro;m)</td><td>CellTreat</td><td>229710</td><td>Pour la préparation de solutions stériles</td></tr><tr><td>500 mL Unités de filtration</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>566-0020</td><td>Pour la préparation de milieux stériles</td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma</td><td>A6964</td><td></td></tr><tr><td>Amphotèrecine B</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15290026</td><td></td></tr><tr><td>Extrait de pituitaire bovin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>13028014</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>Sigma</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Toxine cholérique</td><td>Sigma</td><td>C8052</td><td></td></tr><tr><td>Collagène I</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1048301</td><td></td></tr><tr><td>Microscope confocal</td><td>Nikon</td><td></td><td>Microscope inversé W1 Spinning disk Ti2 avec caméra sCMOS Hamamatsu</td></tr><tr><td>Inserts Corning Transwell</td><td>Sigma</td><td>CLS3460</td><td></td></tr><tr><td>Diéthylènetriamine NONOate (DETA-NONOate)</td><td>Cayman Chemical</td><td>82120</td><td></td></tr><tr><td>Média DMEM/F-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>Sérum bovin foetal</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Cocktail inhibiteur de protéase Halt 1X</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1860932</td><td></td></tr><tr><td>Mélange de nutriments Ham's F1-12</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>Solution d'insuline</td><td>Sigma</td><td>I0516</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate d'isoprotérénol</td><td>Sigma</td><td>I6504</td><td></td></tr><tr><td>Média sans sérum pour kératinocytes</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17005042</td><td></td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique murin</td><td>Sigma</td><td>E4127</td><td></td></tr><tr><td>N(G)-Nitro-L-arginine méthyle ester (L-NAME)</td><td>Sigma</td><td>N5751</td><td></td></tr><tr><td>NuSerum</td><td>Corning</td><td>355100</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline-Streptomycine</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Tampon phosphate-saline (PBS)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Kit d'analyse de protéines Pierce BCA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Sigma</td><td>10165921001</td><td></td></tr><tr><td>Acide rétinoïque</td><td>Sigma</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de la Rho kinase (Y-27632 chlorhydrate)</td><td>Cayman Chemical</td><td>TOM-C837Z37</td><td></td></tr><tr><td>Tampon RIPA</td><td>Sigma</td><td>R0278</td><td></td></tr><tr><td>Média RPMI-1640</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Nitrite de sodium&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S2252</td><td></td></tr><tr><td>Transferrine</td><td>Sigma</td><td>T8158</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-tubuline alpha acétylée (souris)</td><td>Sigma</td><td>T6793</td><td>dilué 1:200 pour l'immunomarquage</td></tr><tr><td>Anticorps anti-FoxJ1 alpha (souris)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-9965-80</td><td>dilué 1:200 pour l'immunomarquage</td></tr><tr><td>Anticorps secondaire Cy3 anti-souris</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A10521</td><td>dilué 1:1000 pour l'immunomarquage</td></tr><tr><td>Inhibiteur gamma-sécrétase IX (DAPT)</td><td>Sigma</td><td>D5942</td><td></td></tr></tbody></table>

mesure de la production d’oxyde nitrique dans les cultures cellulaires épithéliales trachéales de la souris différenciées à l’interface air-liquide

Measurement of Nitric Oxide Production in Mouse Tracheal Epithelial Cell Cultures Differentiated at the Air Liquid Interface

Mesure de la production d’oxyde nitrique dans les cultures cellulaires épithéliales trachéales de la souris différenciées à l’interface air-liquide

Airway epithelial cultures differentiated at the air&#8211;liquid interface (ALI) provide a physiologically relevant model to study nitric oxide (NO) ...

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Médecine

Cellules épithéliales pulmonaires peuvent être isolés par les voies respiratoires des souris et cultivés à interface air-liquide comme un modèle de l'épithélium respiratoire différencié. Un protocole est décrit pour l'isolement, la culture et d'exposer ces cellules à la fumée de cigarette dominante, afin d'étudier les réponses moléculaires à cette toxine de l'environnement.

L&#39;isolement de la souris les cellules épithéliales respiratoires et l&#39;exposition à la fumée de cigarette expérimentale chez Air interface liquide

Les souris transgéniques ont été extrêmement utiles en attribuant la fonction physiologique des gènes. En tant que tel, la recherche en général, et les études fonctionnelles des voies respiratoires, en particulier, ont subi un changement remarquable vers des modèles murins. Ici, nous fournir des protocoles...

Les mesures in vitro de constriction trachéale l&#39;aide de souris

La couche de surface endothéliale glycocalyx / endothéliale est idéalement étudiées par microscopie intravitale. Microscopie intravitale est techniquement difficile dans un organe en mouvement, comme le poumon. Nous montrons comment fond clair simultanée et la microscopie à fluorescence peut être utilisée pour estimer endothéliale épaisseur de la couche de surface dans un mouvement...

La mesure in vivo de la surface de la couche de souris pulmonaire endothéliale

Cellules épithéliales nasales, obtenues par grattage superficiel de la biopsie des volontaires humains, sont expansées et transférées sur des inserts de culture tissulaire. Après avoir atteint la confluence, les cellules sont cultivées à l'interface air-liquide, ce qui donne des cultures de cellules ciliées et non ciliées. Cultures de cellules épithéliales nasales différenciées fournissent des modèles expérimentaux viables pour l'étude de la muqueuse respiratoire.

Culture de cellules humaines épithéliales nasales à l&#39;interface Air Liquide

Dans cet article, des cellules endothéliales pulmonaires primaires ont été isolées et cultivées à partir de souris néonatales.

Isolement de cellules endothéliales pulmonaires primaires de souris

Les progrès récents dans les protocoles de différenciation des cellules souches pluripotentes induites par l’homme permettent la dérivation par étapes de types de cellules spécifiques à un organe. Ici, nous fournissons des étapes détaillées pour la maintenance et l’expansion des cellules basales des voies respiratoires dérivées de l’iPSC et leur différenciation en épithélium mucociliaire dans des cultures d’interface air-liquide.

Génération de cultures d’interface air-liquide de cellules épithéliales des voies respiratoires à partir de cellules souches pluripotentes humaines

Présenté ici est une méthode reproductible, abordable et robuste pour l’isolement et l’expansion des cellules épithéliales bronchiques primaires pour la biobanque à long terme et la génération de cellules épithéliales différenciées par culture à l’interface air-liquide.

Isoler les cellules épithéliales bronchiques du tissu pulmonaire réséqué pour les biobanques et établir des cultures d’interface air-liquide bien différenciées

Ici, nous décrivons un modèle in vitro pour isoler et différencier les cellules épithéliales des voies respiratoires murines, en nous concentrant sur leur acclimatation à l’extrait chronique de fumée de cigarette (ECS). Le modèle pourrait être utilisé pour caractériser de manière exhaustive l’impact multi-omique de l’ECS, ce qui pourrait donner un aperçu des réponses cellulaires en cas d’exposition chronique à la fumée.

Modèle in vitro pour l’étude de la différenciation et des modifications de la multi-omique sur des cellules épithéliales des voies respiratoires murines stimulées par un extrait de fumée de cigarette

La culture d’interface air-liquide est couramment utilisée pour développer un épithélium des voies respiratoires pseudostratifié en différenciant les cellules épithéliales bronchiques humaines normales primaires qui imitent la face apicale des voies respiratoires pulmonaires. Nous décrivons ici un protocole simple pour déterminer sa qualité en surveillant ses propriétés biophysiques, telles que la fonction ciliaire et l’intégrité de la membrane.

Détermination de la fonction ciliaire et de l’imperméabilité membranaire de l’épithélium des voies respiratoires pulmonaires pseudostratifié

La production endogène d'oxyde nitrique (NO) réglemente une grande variété de fonctions biologiques. Il est de plus en plus clair que la perturbation ou une dysrégulation de la signalisation du NO base est impliqué dans de nombreuses maladies humaines. Méthodes de quantification pertinente NO métabolites peuvent fournir de nouveaux biomarqueurs de diagnostic ou de pronostic de la maladie humaine.

Techniques d&#39;analyse permettant de doser la bioactivité d&#39;oxyde nitrique

University of Maryland School of Medicine.  Ce protocole décrit une méthode pour quantifier la production d’oxyde nitrique (NO) dans les cultures épithéliales des voies respiratoires différenciées à l’interface air–liquide (ALI) en mesurant le nitrite dans les sécrétions apicales à l’aide d’un test chimiluminescence à base de triiodures.

Mesure de la production d’oxyde nitrique dans les cultures cellulaires épithéliales trachéales de la souris différenciées à l’interface air-liquide

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