Name: Isolation à noyau unique à partir du tissu endartériectomique coronarien des patients atteints de pontage coronarien (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T13:08:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Apprenez l'isolation de noyaux uniques à partir de tissu endartériectomique coronarien humain. Cette méthode préserve l'intégrité nucléaire pour le séquençage RNA-seq et l'étude de l'hétérogénéité cellulaire dans les plaques athérosclérotiques à haut risque.

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<li>Slyper, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+and+single-nucleus+RNA-seq+toolbox+for+fresh+and+frozen+human+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">A single-cell and single-nucleus RNA-seq toolbox for fresh and frozen human tumors.</a> Nat. Med. 26 (5), 792-802 (2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>100 & mu ; Filtre M</td><td>Miltenyi Biotech&nbsp ;</td><td>130-098-463</td><td></td></tr><tr><td>30 & mu ; Filtre M</td><td>Miltenyi Biotech&nbsp ;</td><td>130-098-458</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine</td><td>HiMedia</td><td>TC546-25G</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>MPW</td><td>NA</td><td>https://mpw.pl/en/offer/mpw-352r</td></tr><tr><td>Microscope à composés</td><td>Nikon</td><td>NA&nbsp ;</td><td>Microscope inversé Nikon Eclipse Ts2 (https://www.microscope.healthcare.nikon.com/en_AOM/products/inverted-microscopes/eclipse-ts2)</td></tr><tr><td>Microscope confocal & nbsp ;</td><td>Nikon</td><td>NA</td><td>Microscope confocal inversé Nikon Ti2-E (https://www.microscope.healthcare.nikon.com/en_AOM/products/inverted-microscopes/eclipse-ti2-series)</td></tr><tr><td>Couvertures</td><td>HiMedia</td><td>BG011C</td><td></td></tr><tr><td>Fiole de spécimen à large bouche CRYOCHIL</td><td>Tarsons</td><td>883191</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>D9542-5MG</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco (thermofischer)</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Tube centrifugeuse (15 mL)</td><td>Tarsons</td><td>546021</td><td></td></tr><tr><td>Cytomètre en débit &nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>663029</td><td>BD FACSLyric (3L12C Instrument CEIVD)</td></tr><tr><td>Hémocytomètre</td><td>Axibio</td><td>CCB 100</td><td></td></tr><tr><td>Tube microcentrifuge (1,5 mL)</td><td>Tarsons</td><td>500010C</td><td></td></tr><tr><td>Tube à microcentrifuge (5 mL)</td><td>Tarsons</td><td>500050</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma</td><td>M1028-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Micro pilon</td><td>Tarsons</td><td>160020</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9888-500G</td><td></td></tr><tr><td>NP-40</td><td>HiMedia</td><td>MB143-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Eau sans nucléase</td><td>Gibco (thermofischer)</td><td>W4502-1L</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de RNase</td><td>Sigma</td><td>333540201</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco (thermofischer)</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Diapositive&nbsp ;</td><td>Riviera</td><td>72910135</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma</td><td>T2194-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Bleu de Trypan&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>302643-25G</td><td></td></tr></tbody></table>

isolation à noyau unique à partir du tissu endartériectomique coronarien des patients atteints de pontage coronarien

Single Nuclei Isolation from Coronary Endarterectomy Tissue of Coronary Artery Bypass Graft Patients

Le tissu endarterectomique coronarien humain a été prélevé sur des patients subissant une chirurgie de CABG. Le tissu a été pesé et traité pour l’isolement des noyaux, et d’autres noyaux isolés ont été confirmés par cytométrie en flux et microscopie confocale (Figure 1).
Évaluation bleu de trypan de la qualité de l’isolation des noyaux Le tissu maintenu dans un moyen RPMI a été pesé, et il mesurait 247,8 mg. Le tissu a été haché, puis homogénéi...

Isolation à noyau unique à partir du tissu endartériectomique coronarien des patients atteints de pontage coronarien

Atherosclerosis is a chronic, progressive inflammatory condition characterized by the accumulation of plaque in the walls of arteries. During the ...

single-nuclei-isolation-from-coronary-endarterectomy-tissue-coronary

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Noyaux cardiaque sont isolés par sédimentation de densité et immunomarquées avec des anticorps contre matériel péricentriolaire 1 (PCM-1) d'identifier et de trier les noyaux des cardiomyocytes par cytométrie de flux.

Isolement des noyaux de cardiomyocytes post-mortem des tissus

Les connaissances actuelles sur la base cellulaire de maladies cardiaques repose principalement sur des études sur des modèles animaux. Nous décrivons ici et valider une nouvelle méthode pour obtenir des cardiomyocytes viables simples de petits échantillons chirurgicaux de myocarde ventriculaire humaine. Myocytes ventriculaires humains peuvent être utilisés pour des études électrophysiologiques et le dépistage des drogues.

L&#39;isolement et la caractérisation fonctionnelle de Human ventriculaire cardiomyocytes à partir des échantillons chirurgicaux frais

La capacité d’isoler les cellules endothéliales valvulaires cardiaques (VEC) est essentielle pour comprendre les mécanismes de développement, de maintenance et de maladie des valves.  Nous décrivons ici l’isolement des VEC à partir de souris Tie2-GFP embryonnaires et adultes à l’aide de FACS qui permettra de réaliser des études déterminant la contribution des VEC dans les processus de développement et de maladie.

Isolement des cellules endothéliales murines Valve

Le but de ce protocole est de démontrer les techniques d'isolement et de culture de cellules murines primaires musculaires lisses vasculaires (CMLV) de la circulation coronaire. Une fois que les CMLV ont été isolés, ils peuvent être utilisés pour de nombreuses techniques de culture standard.

Isolement de murin coronaire vasculaires cellules de muscle lisse

Ce protocole est préparé pour partager notre méthode d’isolement des cellules endothéliales coronaires de souris à des fins d’imagerie ou pour mener des expériences de biologie moléculaire.

Isolement de cellules de souris coronaire endothéliales

du tissu cardiaque humain héberge des populations de cellules précurseurs pluripotentes périvasculaires qui peuvent être appropriés pour la régénération du myocarde. La technique décrite ici permet l'isolement et la purification simultanée de deux populations de cellules stromales pluripotentes associées aux vaisseaux sanguins d' origine, c. -à- CD146 + CD34 - péricytes et les cellules CD34 + CD146 - cellules de l' adventice, du myocarde humain.

Isolement de périvasculaire Multipotentes Précurseurs cellulaires Populations de Cardiac Human Tissue

Cellules endothéliales tumorales sont des déterminants importants du microenvironnement tumoral et l’évolution de la maladie. Ici, un protocole pour l’isolement des cellules endothéliales pures et viables de carcinome colorectal humain et côlon normal pour être utilisé dans la recherche de tests et la pathogenèse est décrite.

Isolement des cellules endothéliales humaines du côlon Normal et carcinome Colorectal - un protocole amélioré

Le but de ce travail est de développer une méthode pour isoler de façon reproductiblement les cardiomyocytes du cœur adulte et mesurer la teneur en ADN et la nucléation.

Isolement des cardiomyocytes des coeurs fixes pour l’immunocytochimie et l’analyse de ploy

Nous présentons un protocole pour l’isolement des cellules endocardiques et coronaires endothéliales endothéliales des coeurs de rat par la digestion séquentielle de tissu dans un tampon de digestion, la collection de cellules des cycles récurrents de centrifugeuses, et la purification de cellules utilisant des microbilles de CD31 anti-rat.

Isolement des cellules endocardiques et coronaires endothéliales du mur libre ventriculaire du cœur de rat

Nous présentons ici un protocole décrivant la préparation des noyaux cellulaires. Après la microdissection et la dissociation enzymatique du tissu cardiaque en cellules individuelles, les cellules progénitrices ont été congelées, suivies de l’isolement de cellules viables pures, qui ont été utilisées pour le séquençage de l’ARN mononucléaire et le test mononucléique pour la chromatine accessible à la transposase avec des analyses de séquençage à haut débit.

Isolement de noyaux à partir de cellules progénitrices cardiaques de souris pour le profilage de l’épigénome et de l’expression génique à une résolution unicellulaire

Cette étude présente un modèle chirurgical porcin d’ischémie myocardique chronique due à une sténose progressive de l’artère coronaire, entraînant une altération de la fonction cardiaque sans infarctus. Après l’ischémie, les animaux subissent un pontage aortocoronarien sans pompe avec mise en place épicardique d’un patch de collagène chargé d’exosomes dérivés de cellules souches. Ce traitement d’appoint améliore la fonction myocardique et la récupération.

Modèle chirurgical porcin d’ischémie myocardique chronique traité par un patch de collagène chargé d’exosomes et un pontage aortocoronarien sans pompe

Apprenez l'isolation de noyaux uniques à partir de tissu endartériectomique coronarien humain. Cette méthode préserve l'intégrité nucléaire pour le séquençage RNA-seq et l'étude de l'hétérogénéité cellulaire dans les plaques athérosclérotiques à haut risque.

Isolation à noyau unique à partir du tissu endartériectomique coronarien des patients atteints de pontage coronarien

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