Name: Production rapide de ribonucléase humaine recombinante SLFN14 et analyse stœchiométrique par photométrie de masse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Découvrez une méthode rapide de production de la ribonucléase SLFN14 recombinante dans des cellules HEK293 et son analyse stœchiométrique par photométrie de masse. Ce protocole facilite les études biochimiques.

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<ol><li>Pisareva, V. P., Muslimov, I. A., Tcherepanov, A., Pisarev, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+novel+ribosome-associated+endoribonuclease+slfn14+from+rabbit+reticulocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of novel ribosome-associated endoribonuclease slfn14 from rabbit reticulocytes.</a> Biochemistry. 54 (21), 3286-3301 (2015).</li>
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<li>Jo, U., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural%2C+molecular%2C+and+functional+insights+into+schlafen+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Structural, molecular, and functional insights into schlafen proteins.</a> Exp Mol Med. 54 (6), 730-738 (2022).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Velcrin-induced+selective+cleavage+of+trna%28leu%29%28taa%29+by+slfn12+causes+cancer+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Velcrin-induced selective cleavage of trna(leu)(taa) by slfn12 causes cancer cell death.</a> Nat Chem Biol. 19 (3), 301-310 (2023).</li>
<li>Murai, J., Thomas, A., Miettinen, M., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+%28slfn11%29%2C+a+restriction+factor+for+replicative+stress+induced+by+DNA-targeting+anti-cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 (slfn11), a restriction factor for replicative stress induced by DNA-targeting anti-cancer therapies.</a> Pharmacol Ther. 201, 94-102 (2019).</li>
<li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+triggers+innate+immune+responses+through+its+ribonuclease+activity+upon+detection+of+single-stranded+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 triggers innate immune responses through its ribonuclease activity upon detection of single-stranded DNA.</a> Sci Immunol. 9 (96), eadj5465(2024).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Codon-usage-based+inhibition+of+hiv+protein+synthesis+by+human+schlafen+11%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Codon-usage-based inhibition of hiv protein synthesis by human schlafen 11.</a> Nature. 491 (7422), 125-128 (2012).</li>
<li>Valenzuela, C., Saucedo, S., Llano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen14+impairs+hiv-1+expression+in+a+codon+usage-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Schlafen14 impairs hiv-1 expression in a codon usage-dependent manner.</a> Viruses. 16 (4), (2024).</li>
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<li>Liao, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rbpworld+for+exploring+functions+and+disease+associations+of+rna-binding+proteins+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rbpworld for exploring functions and disease associations of rna-binding proteins across species.</a> Nucleic Acids Res. 53 (D1), D220-D232 (2025).</li>
<li>Gebauer, F., Schwarzl, T., Valcarcel, J., Hentze, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rna-binding+proteins+in+human+genetic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Rna-binding proteins in human genetic disease.</a> Nat Rev Genet. 22 (3), 185-198 (2021).</li>
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<li>Mckenzie, E. A., Abbott, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+recombinant+proteins+in+insect+and+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Expression of recombinant proteins in insect and mammalian cells.</a> Methods. 147, 40-49 (2018).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>2-mercaptoéthanol (b-Me)</td><td>Sigma</td><td>M3148-500ML</td><td>14,3 M solutions tock</td></tr><tr><td>AcquireMP 2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>Logiciels d’acquisition de données</td></tr><tr><td>Adénosine-5'-triphosphate sel disodique trihydrate (ATP)</td><td>Chem-Impex International</td><td>00015-100G</td><td>ajuster la solution à pH 7,0</td></tr><tr><td>Gel d’affinité anti-drapeau M2</td><td>Millipore</td><td>A2220</td><td>Résine d’affinité anti-drapeau</td></tr><tr><td>Hydrate d’hydrochlorure de benzamidine</td><td>Sigma</td><td>B6506-25G</td><td>Inhibiteur de la protéase</td></tr><tr><td>Normes protéiques à large plage (10-250 kDa)</td><td>Bio-Rad</td><td>P7719S</td><td>Étalons de protéines prêtes</td></tr><tr><td>Comtesse 3</td><td>Invitrogen</td><td>A49862</td><td>compteur de cellules automatisé</td></tr><tr><td>DiscoverMP v2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>Logiciel d’analyse de données</td></tr><tr><td>Le sérum tamponné phosphate de Dulbecco</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td>Crosse solution 1x</td></tr><tr><td>Peptide DYKDDDDK</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A36805</td><td>Peptide 3xFlag</td></tr><tr><td>Cellules FreeStyle 293-F</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R79007</td><td>Cellules en suspension de mammifères</td></tr><tr><td>Nucléase Geniust M DMF déposée</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-391121B</td><td>Nucléase universelle</td></tr><tr><td>HyClone CDM4HEK293 médias</td><td>Cytiva</td><td>SH3085802</td><td>Milieu de croissance sans sérum</td></tr><tr><td>Médias HyClone SFM4Transfx-293</td><td>Cytiva</td><td>SH3086002</td><td>Milieu de transfection transitoire</td></tr><tr><td>Immersol 518F</td><td>Zeiss</td><td>4Y00-R0DY-1007-3BF3</td><td>Huile d’immersion</td></tr><tr><td>Alcool isopropylique</td><td>Macron Fine Chemicals</td><td>3032-02</td><td></td></tr><tr><td>Tampon d’échantillons de Laemmli</td><td>Bio-Rad</td><td>1610737</td><td>Crosse de solution 2x</td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>VWR</td><td>J580-25MG</td><td>Inhibiteur de la protéase</td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium hexahydraté (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>MassFerence P1&nbsp ;</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-41033</td><td>Crosse calibrant 500x</td></tr><tr><td>Kit de préparation d’échantillons UC MassGlass</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21022</td><td>Culasse et joint</td></tr><tr><td>Colonne micro-bio-spin</td><td>Bio-Rad</td><td>7326204</td><td>Colonne de spin en polypropylène vide</td></tr><tr><td>Système Milli-Q IQ 7000</td><td>Millipore</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Eau ultrapure de type I</td></tr><tr><td>Mini-Protean TGX gélifiés sans coloration</td><td>Bio-Rad</td><td>4568086</td><td>4-15 % SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Minitron avec humidité, refroidissement et CO2</td><td>Infors</td><td>72175</td><td>Vibrateur à incubateur</td></tr><tr><td>Kit d’alignement MP</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21019</td><td>outil d’alignement, pince à pince à pointe souple, aimant</td></tr><tr><td>Nanophotomètre</td><td>Implément</td><td>NP80</td><td>Spectrophotomètre UV-vis</td></tr><tr><td>Nutator</td><td>Marque Clay Adams</td><td>421105</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatine A</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-45036B</td><td>Inhibiteur de la protéase</td></tr><tr><td>Fluorure de phénylméthylsulfonyle (PMSF)</td><td>Produits de recherche International</td><td>P20270-25.0</td><td>Inhibiteur de la protéase</td></tr><tr><td>Flasque de shake en polycarbonate &nbsp ;</td><td>Duran Wheaton Kimble</td><td>WPFBC1000S</td><td>Flasque de base ventilée et déflectrice</td></tr><tr><td>Polyéthyléniine (PEI) MW 40 000</td><td>Polysciences</td><td>24765</td><td>Réactif de transfection</td></tr><tr><td>Fluoromètre Qubit 4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q33226</td><td></td></tr><tr><td>Kit de test à haute sensibilité à ARN de qubits</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32852</td><td>quantification à l’aide d’un colorant spécifique à l’ARN</td></tr><tr><td>SimplyBlue SafeStain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>LC6065</td><td>Coomassie G-250</td></tr><tr><td>ADN plasmidique d’expression de SLFN14</td><td>Origene</td><td>RC226257</td><td>clone ORF marqué par humain</td></tr><tr><td>Chlorure de sodium (NaCl)</td><td>Millipore</td><td>1.37017</td><td></td></tr><tr><td>Tris, pH 7,4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J60202. K2</td><td>Stock de solution tampon 1 M</td></tr><tr><td>Tris (2-carboxyéthyle) chlorhydrate de phosphine (TCEP)</td><td>Biotechnologie de l’or</td><td>TCEP10</td><td>TCEP</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>M143-1L</td><td>Détergent</td></tr><tr><td>Teinture bleue de Trypan</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T10282</td><td>0,4 % d’actions de solutions</td></tr><tr><td>Préadolescent 20</td><td>VWR</td><td>0777-1L</td><td>Détergent</td></tr><tr><td>TwoMP</td><td>Refeyn</td><td>MP-PRO-00001</td><td>Photomètre de masse</td></tr><tr><td>Colonne Zeba 40K Desaltin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A57759</td><td>Chromatographie d’exclusion de taille</td></tr></tbody></table>

production rapide de ribonucléase humaine recombinante slfn14 et analyse stœchiométrique par photométrie de masse

Rapid Production of Recombinant Human SLFN14 Ribonuclease and Stoichiometric Analysis by Mass Photometry

Production rapide de ribonucléase humaine recombinante SLFN14 et analyse stœchiométrique par photométrie de masse

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Ici, nous décrivons un protocole détaillé pour une méthode de séquençage basée sur la LC-MS qui peut être utilisée comme méthode directe pour séquencer l’ARN court (&lt;35 nt par exécution) sans intermédiaire d’ADNc, et comme méthode générale pour séquencer différentes modifications nucléotidiques dans une seule étude avec une précision de base unique.

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Un protocole détaillé pour la synthèse de nanoparticules lipidiques (LNP) à l’aide de technologies de mélangeur à jet d’impact confiné (CIJ), y compris un CIJ à deux jets et un mélangeur vortex multi-entrées à quatre jets (μMIVM), est présenté. Les mélangeurs CIJ génèrent des environnements de micro-mélange reproductibles et turbulents, ce qui permet de produire des LNP monodispersés.

Synthèse de nanoparticules lipidiques par écoulement turbulent dans des mélangeurs à jet d’impact confinés

Nous présentons un protocole mis à jour pour la production du système OnePot « Protein synthesis Using Recombinant Elements » (PURE) et des ribosomes bruts pour la synthèse des protéines acellulaires, en mettant l’accent sur le contrôle de la croissance cellulaire afin de minimiser les variations d’un lot à l’autre.

Perfectionnement de OnePot PURE et production brute de ribosomes pour une synthèse acellulaire reproductible des protéines

Ce protocole décrit la production et la purification recombinante de l’hydrophobine SC16 à partir d’Escherichia coli et fournit des analyses à base de fluorescence pour surveiller son auto-assemblage.

Production et purification recombinante de l’hydrophobine SC16 à partir d’Escherichia coli et surveillance de son auto-assemblage à l’aide de tests de fluorescence

Découvrez une méthode rapide de production de la ribonucléase SLFN14 recombinante dans des cellules HEK293 et son analyse stœchiométrique par photométrie de masse. Ce protocole facilite les études biochimiques.

Production rapide de ribonucléase humaine recombinante SLFN14 et analyse stœchiométrique par photométrie de masse

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