Name: Isolement et purification des îlots pancréatiques à partir de rats de Lewis grâce à la digestion enzymatique et à la séparation par gradient de densité (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:53:00.000+00:00
Duration: 7 min 44 s
Description: Découvrez un protocole standardisé d'isolement d'îlots pancréatiques chez le rat Lewis par digestion enzymatique et gradient de densité. Cette méthode optimise le rendement, la pureté et la viabilité pour la recherche sur le diabète et la transplantation.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Grattoni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+cellular+therapeutics+for+type+1+diabetes+mellitus%3A+progress%2C+challenges%2C+and+the+road+ahead%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Harnessing cellular therapeutics for type 1 diabetes mellitus: progress, challenges, and the road ahead.</a> Nat Rev Endocrinol. 21 (1), 14-30 (2025).</li>
<li>Páez-Mayorga, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+strategies+for+%CE%B2+cell+transplantation+to+treat+type+1+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Emerging strategies for β cell transplantation to treat type 1 diabetes mellitus.</a> Cell Transplant. 31, 963689721004(2022).</li>
<li>Cabrera, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unique+cytoarchitecture+of+human+pancreatic+islets+and+its+relevance+to+%CE%B2-cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The unique cytoarchitecture of human pancreatic islets and its relevance to β-cell function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (7), 2334-2339 (2006).</li>
<li>Brissova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+islet+microvasculature+and+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Pancreatic islet microvasculature and blood flow.</a> J Clin Invest. 124 (4), 1871-1883 (2014).</li>
<li>Jiang, F. X., Morahan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+islet+architecture+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Pancreatic islet architecture and function.</a> Cell Death Discov. 10, 170(2024).</li>
<li>Sato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+induces+%CE%B2-cell+apoptosis+and+functional+suppression+in+isolated+islets%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoxia induces β-cell apoptosis and functional suppression in isolated islets.</a> PLoS One. 9 (12), e114868(2014).</li>
<li>Tiedge, M., Lortz, S., Drinkgern, J., Lenzen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+between+antioxidant+enzyme+gene+expression+and+antioxidative+defense+status+of+insulin-producing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Relation between antioxidant enzyme gene expression and antioxidative defense status of insulin-producing cells.</a> Diabetes. 46 (11), 1733-1742 (1997).</li>
<li>Ichii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shipment+of+human+islets+for+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Shipment of human islets for transplantation.</a> Am J Transplant. 7 (4), 1010-1020 (2007).</li>
<li>Carobbio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+GSIS+kinetics+in+freshly+isolated+mouse+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Rapid GSIS kinetics in freshly isolated mouse islets.</a> Diabetologia. 47 (9), 1652-1662 (2004).</li>
<li>Zawalich, W. S., Zawalich, K. C., Kelley, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+perifusion+of+fresh+rat+and+mouse+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Immediate perifusion of fresh rat and mouse islets.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294 (2), E444-E450 (2008).</li>
<li>Wassmer, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+use+of+freshly+isolated+islets+transplanted+within+48+h%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Clinical use of freshly isolated islets transplanted within 48 h.</a> Transplant Proc. 53 (6), 1907-1912 (2021).</li>
<li>Tai, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+autotransplantation+of+islets+following+total+pancreatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Surg%22%5BJournal%5D)">Immediate autotransplantation of islets following total pancreatectomy.</a> JAMA Surg. 150 (5), 472-479 (2015).</li>
<li>Carter, J. D., Dula, S. B., Corbin, K. L., Wu, R., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">A practical guide to rodent islet isolation and assessment.</a> Biol Proced Online. 11, 3-31 (2009).</li>
<li>Emamaullee, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lewis+rats+in+transplantation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Lewis rats in transplantation studies.</a> Diabetes. 65 (5), 1350-1359 (2016).</li>
<li>de Groot, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+islet+isolation+yield+and+function+are+donor+strain+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Rat islet isolation yield and function are donor strain dependent.</a> Lab Anim. 38 (2), 200-206 (2004).</li>
<li>Moazenchi, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+variability+in+islet+yield+and+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Strain variability in islet yield and isolation.</a> Islets. 2 (5), 283-289 (2010).</li>
<li>Dolenšek, J., Slak Rupnik, M., Stožer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+variability+limits+reproducibility+in+rat+islet+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolation variability limits reproducibility in rat islet studies.</a> PLoS One. 14 (5), e0216136(2019).</li>
<li>Stehno-Bittel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+flaws+and+future+of+islet+volume+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">The flaws and future of islet volume measurements.</a> Cell Transplant. 27 (4), 571-578 (2018).</li>
<li>Kissler, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+methodologies+for+quantifying+isolated+human+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Validation of methodologies for quantifying isolated human islets.</a> Cell Transplant. 18 (6), 611-620 (2009).</li>
<li>Papas, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+assessment+for+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Islet assessment for transplantation.</a> Cell Transplant. 18 (6), 519-528 (2009).</li>
<li>Dono, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+temperature+collagenase+digestion+for+islet+isolation+from+48-hour+cold-preserved+rat+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Low temperature collagenase digestion for islet isolation from 48-hour cold-preserved rat pancreas.</a> Transplantation. 57 (1), 22-26 (1994).</li>
<li>Shapiro, A. M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+yield+of+rodent+islets+with+intraductal+collagenase+distension+and+warm+incubation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">High yield of rodent islets with intraductal collagenase distension and warm incubation.</a> Cell Transplant. 5 (6), 631-638 (1996).</li>
<li>Corbin, K. L., Hughes, J. W., Nunemaker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+rodent+islet+isolation+and+assessment+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">A practical guide to rodent islet isolation and assessment revisited.</a> Biol Proced Online. 23, 10(2021).</li>
<li>de Haan, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+isolation+of+functional+pancreatic+rat+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Factors influencing isolation of functional pancreatic rat islets.</a> Pancreas. 29 (1), e15-e22 (2004).</li>
<li>Kenyon, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival+and+function+of+intrahepatic+islet+allografts+in+baboons+treated+with+humanized+anti-CD154%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Long-term survival and function of intrahepatic islet allografts in baboons treated with humanized anti-CD154.</a> Diabetes. 48 (7), 1473-1481 (1999).</li>
<li>Kenyon, N. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival+and+function+of+intrahepatic+islet+allografts+in+rhesus+monkeys+treated+with+humanized+anti-CD154%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Long-term survival and function of intrahepatic islet allografts in rhesus monkeys treated with humanized anti-CD154.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (14), 8132-8137 (1999).</li>
<li>Liberase T-Flex Research Grade - Method Sheet. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22eLabDoc%22">eLabDoc</a>. , Roche Diagnostics GmbH. (2025).</li>
<li>Miyazaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategy+towards+tailored+donor+tissue-specific+pancreatic+islet+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Strategy towards tailored donor tissue-specific pancreatic islet isolation.</a> PLoS One. 14 (5), e0216136(2019).</li>
<li>Cross, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+matrix+proteins+within+the+pancreatic+islet+basement+membrane+are+differentially+digested+during+human+islet+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Key matrix proteins within the pancreatic islet basement membrane are differentially digested during human islet isolation.</a> Am J Transplant. 17 (2), 451-461 (2017).</li>
<li>O'Gorman, D., Kin, T., Pawlick, R., Imes, S., Senior, P. A., Shapiro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+islet+isolation+outcomes+with+a+highly+purified+neutral+protease+for+pancreas+dissociation%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Clinical islet isolation outcomes with a highly purified neutral protease for pancreas dissociation.</a> Islets. 5 (3), 111-115 (2013).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adjustment+of+digestion+enzyme+composition+improves+islet+isolation+outcome+from+marginal+grade+human+donor+pancreata%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Bank%22%5BJournal%5D)">Adjustment of digestion enzyme composition improves islet isolation outcome from marginal grade human donor pancreata.</a> Cell Tissue Bank. 8, 187-194 (2007).</li>
<li>McCall, M. D., Maciver, A. H., Pawlick, R., Edgar, R., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopaque+provides+optimal+mouse+islet+purification+kinetics%3A+comparison+study+with+Ficoll%2C+iodixanol+and+dextran%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Histopaque provides optimal mouse islet purification kinetics: comparison study with Ficoll, iodixanol and dextran.</a> Islets. 3 (4), 144-149 (2011).</li>
<li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Finke, E. H., Olack, B. J., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+method+for+isolation+of+human+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Automated method for isolation of human pancreatic islets.</a> Diabetes. 37 (4), 413-420 (1988).</li>
<li>BenchChem Technical Support Team. An in-depth technical guide to cell separation using iodixanol. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22BenchChem%22">BenchChem</a>. , (2026).</li>
<li>Dellê, H., Saito, M. H., Yoshimoto, P. M., Noronha, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+iodixanol+for+the+purification+of+rat+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">The use of iodixanol for the purification of rat pancreatic islets.</a> Transplant Proc. 39 (2), 467-469 (2007).</li>
<li>Noguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iodixanol-controlled+density+gradient+during+islet+purification+improves+recovery+rate+in+human+islet+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Iodixanol-controlled density gradient during islet purification improves recovery rate in human islet isolation.</a> Transplantation. 87 (11), 1629-1635 (2009).</li>
<li>Min, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superiority+of+Visipaque+%28iodixanol%29-controlled+density+gradient+over+Ficoll-400+in+adult+porcine+islet+purification%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Superiority of Visipaque (iodixanol)-controlled density gradient over Ficoll-400 in adult porcine islet purification.</a> Transplant Proc. 42 (5), 1825-1829 (2010).</li>
<li>Paez-Mayorga, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neovascularized+implantable+cell+homing+encapsulation+platform+with+tunable+local+immunosuppressant+delivery+for+allogeneic+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Neovascularized implantable cell homing encapsulation platform with tunable local immunosuppressant delivery for allogeneic cell transplantation.</a> Biomaterials. 257, 120232(2020).</li>
<li>Paez-Mayorga, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantable+niche+with+local+immunosuppression+for+islet+allotransplantation+achieves+type+1+diabetes+reversal+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Implantable niche with local immunosuppression for islet allotransplantation achieves type 1 diabetes reversal in rats.</a> Nat Commun. 13, 7951(2022).</li>
<li>Piemonti, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Endotext%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation.</a> Endotext. , (2022).</li>
<li>Patel, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+foundation+for+engineering+a+pancreatic+islet+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">The foundation for engineering a pancreatic islet niche.</a> Front Endocrinol. 13, 881525(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>21 G x 2 in. BD PrécisionAiguille glissante</td><td>BD</td><td>305129</td><td></td></tr><tr><td>500 & micro ; m Cadre en laiton et tamis en acier inoxydable 304, 3 » de diamètre x 1 » de profondeur (Numéro de tamis 35)</td><td>McMaster-Carr</td><td>34735K525</td><td></td></tr><tr><td>Seringues stériles Air-Tite, verrou Luer</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-178</td><td></td></tr><tr><td>Biogel PI UltraTouch M</td><td>M&ouml ; Inlycke</td><td>42665</td><td></td></tr><tr><td>Bonn Scissors ; Droit ; Pointes tranchantes ; Longueur de pale de 15 mm ; Longueur totale de 3 1/2"</td><td>Roboz</td><td>RS-5840</td><td></td></tr><tr><td>Braintree Scientific GERMINATOR 500 DRY STERIL</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9956482</td><td></td></tr><tr><td>Série Cell-IQ 5,8 pi³. Incubateur de laboratoire CO2</td><td>PHCBI</td><td>MCO-170AICUVHL-PA</td><td></td></tr><tr><td>Plat de culture Corning 100 mm Non traité à TC</td><td>Corning</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin de Corning, 500 mL, régulier, testé de sécurité USDA (inactivation thermique)</td><td>Corning</td><td>35011CV</td><td></td></tr><tr><td>Gradient de l’îlot de Corning 1,069 (densité 1,069 g/cm3)</td><td>Corning</td><td>99-815-CIS</td><td>Demande spéciale de la part de l’entreprise</td></tr><tr><td>Gradient des îlots de Corning 1,096 (densité 1,096 g/cm3)</td><td>Corning</td><td>99-691-CIS</td><td>Demande spéciale de la part de l’entreprise</td></tr><tr><td>Gradient de l’îlot de Corning 1,108 (densité 1,108 g/cm3)</td><td>Corning</td><td>99-692-CIS</td><td>Demande spéciale de la part de l’entreprise</td></tr><tr><td>Sous-coussinets Covidien Tendersorb</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-225-102</td><td></td></tr><tr><td>DNase I Grade II</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>Falcon&nbsp ; Tubes centrifugeuses coniques de 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>Feuille d’aluminium Fisherbrand, rouleau à écartement standard</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp ; Éponges non tissées en gaze</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-028-559</td><td></td></tr><tr><td>Béchers en verre réutilisables Fisherbrand à faible porte</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB101600</td><td></td></tr><tr><td>Mircoscope de fluorescence &nbsp ; BZ-X810</td><td>Keyence</td><td>BZ-X810</td><td></td></tr><tr><td>Glucose Solution</td><td>Gibco</td><td>A2494001</td><td></td></tr><tr><td>Porte-aiguille micro Halsey</td><td>Outils scientifiques finement</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>HBSS, calcium, magnésium, pas de rouge phénolé</td><td>Gibco</td><td>14025092</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Pinces hémostatiques Classic Crile 5-1/2 pouce de longueur</td><td>McKesson</td><td>1231217</td><td></td></tr><tr><td>Pinces Hudson (Ewald)</td><td>Roboz</td><td>RS-5238</td><td></td></tr><tr><td>Monoject à aiguille hypodermique de 1,5 pouce de longueur, paroi régulière de calibre 16 sans sécurité</td><td>McKesson</td><td>43481</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Liberase T-Flex, qualité de recherche</td><td>Roche</td><td>5989132001</td><td></td></tr><tr><td>Kit de viabilité VIVANT/MORT/Cytotoxicité, pour cellules de mammifères</td><td>Invitrogen</td><td>&nbsp ; L3224</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel MATLAB</td><td>MathWorks</td><td><a href="https://www.mathworks.com/pricing-licensing.html?prodcode=ML">https://www.mathworks.com/pricing-licensing.html?prodcode=ML</a></td><td></td></tr><tr><td>NE-4000 Pompe à seringue programmable à deux canaux</td><td>Pompe à seringue</td><td>NE-4000-US</td><td></td></tr><tr><td>AIGUILLE, HYPO FORCE DISP 27GX1/2" (100/BX) EXLINT</td><td>McKesson</td><td>408877</td><td></td></tr><tr><td>Culture cellulaire/Plaques de Petri Nunc</td><td>Thermo-Sciences</td><td>174926</td><td></td></tr><tr><td>Microscope à contraste de phase inversé Olympus CKX41</td><td>Olympe</td><td>CKX41-B</td><td></td></tr><tr><td>PBS, pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline Streptomycine (10 000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640, pas de glucose</td><td>Gibco</td><td>11879020</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium (stock de 100 mM)</td><td>Gibco</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>Sorval ST 16R</td><td>Thermo-Sciences</td><td>75004381</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille de seringue 304 en acier inoxydable</td><td>Milipore Sigma</td><td>Z117013-1EA</td><td></td></tr><tr><td>DRAPE CHIRURGICAL, JETABLE, 36 IN X 100 YD</td><td>Covetrus</td><td>10408</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux chirurgicaux - ToughCut</td><td>Outils scientifiques finement</td><td>14054-13</td><td></td></tr><tr><td>Pinces de pansement pour pouce de 4,5", délicate de 1,3 mm de largeur de pointe</td><td>Roboz</td><td>RS-8120</td><td></td></tr><tr><td>Tube centrifugeuse Thermo Scientific Nunc 200 mL</td><td>Thermo-Sciences</td><td>14-962-17</td><td></td></tr><tr><td>Adaptateurs et coussins pour bouteilles centrifugeuses Thermo Scientific Nunc</td><td>Thermo-Sciences</td><td>12-565-283B</td><td></td></tr><tr><td>TSDUB15 15L Dubnoff Baigne-Marie Secouante</td><td>Fisher Scientific</td><td>300610298</td><td></td></tr><tr><td>TX-400 Rotor à seau oscillant 4 x 400 mL</td><td>Thermo-Sciences</td><td>75003181</td><td></td></tr><tr><td>Tygon S-50-HL</td><td>Tygon</td><td>AAXoooo3</td><td></td></tr><tr><td>Kit ELISA d’insuline ultra-sensible pour rats</td><td>Chimie en Cristal</td><td>90060</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement et purification des îlots pancréatiques à partir de rats de lewis grâce à la digestion enzymatique et à la séparation par gradient de densité

Pancreatic Islet Isolation and Purification from Lewis Rats Using Enzymatic Digestion and Density-Gradient Separation

Les résultats suivants représentent une isolation typique d’îlots réalisée selon la méthode décrite, avec douze pancréas de rat Lewis traités en parallèle.
Répartition des rendements et des tailles
Comptage manuel des aliquotes et conversion IEQ
Deux aliquotes indépendantes de 100 μL ont été obtenues à partir de la suspension mixte des îlots, comme décrit dans la section « Comptage des îlots », étape 6.1, et comptées par compartiments de diamètre (50-100 μm, 100-150 μm, 150-200 μm, 200-250 μm, 250-300 μm, 250-300 μm). Les comptages ont été convertis en équivalents d’îlots (IEQ ; référence de 150 μm) à l’aide de tables d’équivalence standard et extrapolés au volume total de suspension (voir Figure 4A). Sur l’isolation de l’essai (n = 12), le rendement était de 3330 IEQ/pancréas avec un diamètre médian de l’îlot dans la boîte de 50-100 μm. Répétez les aliquotes concordées par 18,8 % par bin (coefficient de variation), indiquant une variation modérée mais attendue grâce à l’utilisation de méthodes de comptage manuelles. Au cours des 14 précédentes isolations d’îlots, cette méthode a produit en moyenne 1353 IEQ/pancréas (SD 607).
Quantification automatisée de la plaque entière
Pour évaluer l’IEQ manuel, des images en champ clair ont été obtenues en D1 à l’aide d’un microscope et assemblées pour générer des composites à plat entier (objectif 4× ; exposition 1/100 s). Le dimensionnement automatisé et la quantification des objets ont été réalisés en utilisant Fiji et un codage avec un seuil de taille prédéfini de 50 à 600 μm. Les images ont d’abord été prétraitées pour réduire la variation de fond et améliorer l’uniformité du contraste. Les structures des îlots ont été identifiées en fonction des différences d’intensité par rapport aux tissus environnants, générant des masques d’objets binaires. Les îlots adjacents ou partiellement en contact étaient séparés pour éviter la sous-estimation du nombre d’objets. Les objets hors de la plage de taille spécifiée ont été exclus pour éliminer les débris et les tissus non islots. Pour chaque objet retenu, des paramètres morphométriques, y compris la surface et les diamètres des axes x et y, ont été extraits. Les îlots étaient ensuite regroupés par diamètre, et l’IEQ était calculé en multipliant le nombre d’îlots dans chaque boîte de taille par le facteur de conversion correspondant. Le dimensionnement automatisé a donné 98 832 objets au total, avec des diamètres moyens des axes x et y de 117 μm et 116 μm respectivement, et un total estimé à 16 350 QI, ce qui est fortement corrélé avec une QI manuelle mesurée à D0 (Spearman r = 0,937, p = 0,0048 ; voir Figure 4A-C).
Perte de cellules des îlots
Des images de la plaque entière ont été prises 2 heures après la purification puis à nouveau au jour 1 (D1), en utilisant la même méthodologie dans la « quantification automatisée de la plaque entière » pour évaluer la stabilisation précoce des îlots (« shedding »). Le nombre d’objets a changé de 0,9 % et l’IEQ de -6,11 % entre 2 h et D1 ( voir Figure 4D). La comparaison par paires des diamètres des îlots entre D0 et D1 a montré une diminution médiane statistiquement significative de 2 μm (test de Wilcoxon signed-rank, p = 0,0136, n = 2820). Cependant, l’ampleur de ce changement est peu susceptible d’avoir une signification biologique ou clinique.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70414/70414fig4.jpg" data-altupdatedat="1777957239000" data-alt="Figure 4"> 
Figure 4 : Évaluation quantitative de la répartition de la taille des îlots, de la corrélation et de la chute précoce des îlots. Résumé graphique des mesures des îlots obtenues par analyses manuelles et automatisées. (A) Distribution de la taille des îlots du jour 0 (D0) basée sur la quantification manuelle à travers des compartiments IEQ équivalents aux îlots standardisés. (B) Jour 1 (D1) Distribution de la taille des îlots déterminée par des mesures automatisées basées sur des images dans les mêmes compartiments standardisés de taille IEQ. (C) Corrélation des comptages entre la quantification manuelle de D0 et la quantification automatisée de D1 à travers les compartiments de taille IEQ. (D) Diagramme en boîte de la répartition des diamètres des îlots entre D0 et D1 pour des mesures automatisées de la même plaque. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70414/70414fig4large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.</a>
Pureté (contenu endocrinien vs. exocrine)
Coloration à la dithizone (DTZ)
Sur D1, une aliquote d’îlots (n = 451) a été colorée avec DTZ pendant 30 s à température ambiante et immédiatement imagée à l’aide de microscopie en champ clair (objectif 4× ; exposition 1/20 s). Aux Fidji, les pixels de fond ont été supprimés de sorte que la surface restante corresponde à la surface totale des îlots. Les régions tissulaires exocrines DTZ négatives, identifiées par un contraste de couleur plus foncé, étaient sélectionnées manuellement à l’aide d’un outil lasso, et la zone de chaque région d’intérêt était automatiquement enregistrée en pixels. La pureté endocrinienne a été calculée comme le pourcentage de pixels DTZ positifs par rapport au total des pixels des îlots, donnant une pureté de 98,56 ± 0,38 % (Figure 5A).
Viabilité et performance fonctionnelle
Sécrétion d’insuline stimulée par le glucose (GSIS)
À chaque moment (D1, D3, D7), 15 îlots de taille correspondante étaient choisis à la main et placés dans des puits individuels d’une plaque à 24 puits, préparés en quadruplicate. Les îlots ont été incubés à 37 °C 5 % deCO2 dans un tampon de Krebs selon un protocole de stimulation de glucose faible-élevé-bas : d’abord en glucose bas (2,8 mM, 60 min), suivis d’un taux élevé de glucose (16,7 mM, 60 min, voir Tableau 1). Les fractions d’effluent ont été collectées à la fin de chaque période d’incubation, et les concentrations d’insuline ont été quantifiées à l’aide d’un test ELISA sur l’insuline de rat. Les indices de stimulation ont été calculés comme le ratio de sécrétion d’insuline lors de conditions de glucose élevé à basse. Les indices de stimulation étaient de 9,37, 8,34 et 6,7, respectivement aux jours 1, 3 et 7, sans différences significatives (Figure 5B).
Taches vivantes/mortes
Aux D1, D3 et D7, 15 îlots ont été soigneusement sélectionnés et teintés avec le kit de viabilité Live/Dead selon les instructions du fabricant. En résumé, des îlots ont été incubés dans la solution de coloration Live/Dead pendant 30 minutes à 25 °C, puis imagés sous des réglages de microscope cohérents pour garantir la comparabilité entre les temps (objectif 4X ; exposition 1/30 s, filtres Texas Red et GFP). La viabilité a été quantifiée à l’aide d’un script Python utilisant scikit-image pour la segmentation des îlots et la mesure de fluorescence. Les îlots ont été identifiés en combinant les canaux de fluorescence vert et rouge, en appliquant la méthode de seuil de Li pour générer un masque binaire, et en utilisant la segmentation des bassins versants pour séparer les îlots en contact. Les objets ont été filtrés par surface pour exclure les débris et les artefacts. Pour chaque îlot, la viabilité était calculée comme le pourcentage de densité intégrée vivante (pixels verts) par rapport à la densité intégrée totale (pixels verts plus rouges). Les résultats ont montré une viabilité de 68 ± 9 % à D1, 98,2 ± 0,6 % à D3 et 100 % à D7. Un échantillon témoin positif traité à 70 % d’éthanol pendant 10 minutes a montré une viabilité de 2,7 ± 7,2 % (voir Figure 5C-F).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/70414/70414fig5.jpg" data-altupdatedat="1777957239000" data-alt="Figure 5"> 
Figure 5 : Évaluation de la pureté, de la viabilité et de la réactivité fonctionnelle des îlots. Images représentatives et résumés quantitatifs des caractéristiques des îlots isolés au fil du temps. (A) Image représentative en champ lumineux de 10× des îlots colorés à la dithizone (DTZ), montrant des îlots endocriniens teintés de rouge et des tissus exocrines non colorés. (B) Valeurs de sécrétion d’insuline stimulée par le glucose (GSIS) de l’indice de stimulation à glucose élevé/faible glucose (HG/LG) pour les jours 1, 3 et 7. (C-E) Images fluorescentes vivantes/mortes des îlots au jour 1 (C), jour 3 (D) et jour 7 (E). (F) Image fluorescente vivante/morte d’îlots témoins positifs traités à l’éthanol. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/70414/70414fig5large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.</a>
<table border="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>(A) Supports de lavage</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Concentration finale</td>
			<td>Montant (mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>-</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sérum fœtal bovin</td>
			<td>10%</td>
			<td>50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptococcique de la pénétocoque (10 000 U/mL)</td>
			<td>1%</td>
			<td>5,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>25 mM</td>
			<td>12,5 mL provenant d’un stock 1M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>2 mM</td>
			<td>5 mL provenant d’une crosse de 200 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(B) Médias de la culture des îlots</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Concentration finale</td>
			<td>Quantité (mL ou g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640, pas de glucose</td>
			<td>-</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sérum fœtal bovin</td>
			<td>10%</td>
			<td>50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptococcique de la pénétocoque (10 000 U/mL)</td>
			<td>1%</td>
			<td>5,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>20 mM</td>
			<td>11 mL provenant d’un stock 1M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate</td>
			<td>1 mM</td>
			<td>5,5 mL à partir de 100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>5,5 mM</td>
			<td>2,75 mL à partir de 200 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(C) Solution de rinçage de pénicilline-streptomycine</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Concentration finale</td>
			<td>Quantité (mL ou g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solution saline, 0,9 %</td>
			<td>-</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycine pénicilline (10 000 U/mL)</td>
			<td>2%</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(D) Tampon d’extinction</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Concentration finale</td>
			<td>Quantité (mL ou g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>-</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sérum fœtal bovin</td>
			<td>20%</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 M)</td>
			<td>2.50%</td>
			<td>2,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(E) Tampon de Krebs</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Composant</td>
			<td>Concentration finale</td>
			<td>Quantité (mL ou g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dH2O</td>
			<td>-</td>
			<td>975 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>115 mM</td>
			<td>6,72 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>24 mM</td>
			<td>2,02 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>5 mM</td>
			<td>0,3728 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 M)</td>
			<td>25 mM</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>1 mM</td>
			<td>0,0952 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>0.10%</td>
			<td>1 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2,5 mM</td>
			<td>0,2775 g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 1 : Liste des solutions. Détails de composition et de préparation pour toutes les solutions utilisées tout au long du protocole d’isolation et de purification des îlots. Chaque sous-section liste les composants, les concentrations finales, les volumes de préparation et les numéros de catalogue. (A) Substrat de lavage, utilisé pour rincer et laver les tissus pendant la digestion et la purification. (B) Milieux de culture d’îlots, utilisés pour l’entretien et la viabilité après l’isolement des îlots. (C)Solution de rinçage pénicilline-streptycine, utilisée pour stériliser et rincer les crécréas récoltés. (D) Tampon de tremption, utilisé pour interrompre la digestion enzymatique et préserver la viabilité cellulaire. (E) Tampon de Krebs, utilisé lors des tests de sécrétion d’insuline stimulée par le glucose (GSIS).
<table border="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Nombre de pancréas</td>
			<td>Collagénase (15,38 mg/mL)</td>
			<td>Thermolysine (1 mg/mL)</td>
			<td>ADNase (100 mg/mL)</td>
			<td>Tampon de fonctionnement</td>
			<td>600 mL de béchers à utiliser</td>
			<td>Volume/Beaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30</td>
			<td>4,5 mL</td>
			<td>2,25 mL</td>
			<td>450 μL</td>
			<td>450 mL</td>
			<td>5</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24</td>
			<td>3,6 mL</td>
			<td>1,8 mL</td>
			<td>360 μL</td>
			<td>360 mL</td>
			<td>4</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20</td>
			<td>3 mL</td>
			<td>1,5 mL</td>
			<td>300 μL</td>
			<td>300 mL</td>
			<td>3</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16</td>
			<td>2,4 mL</td>
			<td>1,2 mL</td>
			<td>240 μL</td>
			<td>240 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12</td>
			<td>1,8 mL</td>
			<td>0,9 mL</td>
			<td>180 μL</td>
			<td>180 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10</td>
			<td>1,5 mL</td>
			<td>0,75 mL</td>
			<td>150 μL</td>
			<td>150 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Concentration finale.</td>
			<td>0,15 mg/mL</td>
			<td>5 mg/mL</td>
			<td>0,1 mg/mL</td>
			<td colspan="3"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 2 : Solution enzymatique digestive par quantité de pancréas. Des volumes de collagénase, de thermolysine et de DNase ont été nécessaires pour préparer le Milieu de Dissociation Working (WDM) pour différents nombres de pancréas de rats. Les concentrations finales de chaque enzyme sont listées en bas du tableau.
<table border="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Nombre de pancréas</td>
			<td>Tubes numéros 50 mL</td>
			<td>Volume/ seringue</td>
			<td>Nombre de 1,096 seringues</td>
			<td>Nombre de 1,068 seringues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30</td>
			<td>10 tubes</td>
			<td>50 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24</td>
			<td>8 tubes</td>
			<td>40 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20</td>
			<td>6 tubes</td>
			<td>30 mL</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16</td>
			<td>4 tubes</td>
			<td>40 mL</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12</td>
			<td>4 tubes</td>
			<td>40 mL</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10</td>
			<td>2 tubes</td>
			<td>20 mL</td>
			<td>1</td>
			<td>1</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 3 : Charge en gradient par quantité pancréastique. Nombre de tubes coniques de 50 mL et de volumes de gradient correspondants nécessaires à la purification des îlots en fonction du nombre de pancréas traités.
<table border="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Plage de diamètre des îlots (μm)</td>
			<td>Nombre de particules d’îlots (IA)</td>
			<td>Facteur de conversion IEQ</td>
			<td>IEQ par plage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-100</td>
			<td>a</td>
			<td>* 0.167</td>
			<td>a * 0,167</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>101-150</td>
			<td>b</td>
			<td>* 0.648</td>
			<td>b * 0,648</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>151-200</td>
			<td>c</td>
			<td>* 1.685</td>
			<td>c * 1,685</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>201-250</td>
			<td>d</td>
			<td>* 3.500</td>
			<td>d * 3.500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>251-300</td>
			<td>e</td>
			<td>* 6.315</td>
			<td>e * 6.315</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>301-350</td>
			<td>f</td>
			<td>* 10.352</td>
			<td>f * 10.352</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&gt; 350</td>
			<td>g</td>
			<td>* 15.833</td>
			<td>g * 15.833</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 4 : Conversion d’équivalence des îlots. La conversion des diamètres des îlots varie en équivalents standardisés des îlots (IEQ). Le tableau liste les compartiments de diamètre d’îlots observés, le nombre de particules d’îlots par plage, le facteur de conversion IEQ correspondant pour chaque plage de taille, et la contribution IEQ résultante par plage.

Isolement et purification des îlots pancréatiques à partir de rats de Lewis grâce à la digestion enzymatique et à la séparation par gradient de densité

Pancreatic islets are essential for both clinical islet transplantation and preclinical studies aimed at understanding the mechanisms and progression of ...

pancreatic-islet-isolation-purification-from-lewis-rats-using

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Atteindre de haute qualité et la quantité appropriée d'îlots humains est l'une des conditions préalables importantes pour la transplantation d'îlots de succès. Dans cette vidéo, nous décrire étape par étape les procédures pour l'isolement des îlots pancréatiques humains (partie I: la digestion et la collecte des tissus pancréatiques) en utilisant une méthode modifiée automatisés.

Isolement îlots pancréatiques humaines: Partie I: La digestion et la perception des tissus pancréatiques

Atteindre de haute qualité et la quantité appropriée d'îlots humains est l'une des conditions préalables importantes pour la transplantation d'îlots de succès. Dans cette vidéo, nous décrire étape par étape les procédures pour l'isolement des îlots pancréatiques humains (partie II: la purification et la culture d'îlots humains) en utilisant une méthode modifiée automatisés.

Isolement îlots pancréatiques humaines: Partie II: Purification et culture d&#39;îlots humains

La transplantation d'îlots isolés a été proposé pour être un traitement potentiel pour les diabétiques de type 1. Nous décrivons ici une méthode pour isoler les îlots de souris pancréas et de les transplanter à l'espace sous-capsulaire du rein.

Une méthode pour isoler l&#39;îlot murin et transplantation rénale sous-capsulaires

L'alimentation de type 2 diabétiques îlots pour la recherche est insuffisant. Ici, nous partageons notre protocole pour isoler les îlots de patients subissant une pancréatectomie partielle. Cette approche représente un lieu unique pour obtenir des îlots de diabétiques de type 2 et cliniquement correspondance des sujets non diabétiques, en nombre suffisant pour les études fondamentales et cliniques.

L&#39;isolement des îlots humains à partir des patients partiellement pancréatectomisés

Les îlots pancréatiques, également appelés îlots de Langerhans, sont un amas de cellules endocrines qui produisent des hormones pour la régulation du glucose et d’autres fonctions biologiques importantes. Ce protocole explique une méthode pour isoler les îlots pancréatiques en perfusant d’abord la collagénase via l’ampoule de Vater pour digérer le tissu pancréatique exocrine et une centrifugation simplifiée par gradient de densité pour purifier les îlots des souris.

Isolement des îlots pancréatiques par perfusion de collagénase : une méthode enzymatique pour isoler les cellules des îlots pancréatiques

défis critiques pour le domaine de la recherche sur le diabète sont de comprendre les mécanismes moléculaires qui régulent la réplication β-cellules d'îlots et de développer des méthodes pour stimuler la régénération β-cellulaire. Ici une méthode de criblage à haut contenu pour identifier et évaluer l'activité de réplication favorisant β-cellulaire de petites molécules est présenté.

Un haut contenu<em&gt; In vitro</em&gt; Pancreatic Islet β-cellulaire Plateforme de découverte de la réplication

Nous décrivons ici un protocole pour isoler les îlots intacts de souris néonatales. Pancreata ont été partiellement digéré avec de la collagénase, suivi d'un lavage et cueillette à la main. 20 - 80 amas d'îlots peuvent être obtenus par le pancréas de souris nouveau-nés, qui sont appropriés pour de nombreuses études d'îlots.

Isolation efficace des îlots fonctionnels de néonatales Pancréas souris

Ce protocole d'isolement d'îlots a décrit une nouvelle voie d'injection de collagène pour digérer le tissu d'exocrine et une procédure simplifiée de gradient pour purifier les îlots des souris. Il s'agit de la digestion enzymatique, de la séparation/purification des gradients et de la cueillette manuelle des islets. L'isolement réussi peut donner 250-350 îlots de haute qualité et entièrement fonctionnels par souris.

Un protocole simple à haut rendement pour l'isolement des îlettes pancréatiques des souris

Ce protocole fournit un guide étape par étape pour l’obtention d’un pancréas porcin pour l’isolement et la purification des îlots de Langerhans.

Perfusion chirurgicale et isolement du pancréas porcin pour l’isolement des îlots

Cette étude a développé une méthode simplifiée pour extraire efficacement les îlots primaires fonctionnels et les cellules acinaires du pancréas de la souris, offrant un outil précieux pour étudier la communication intercellulaire dans la pathogenèse du diabète induit par la pancréatite aiguë.

Une méthode simple et rapide pour l’isolement simultané des îlots primaires et des cellules acinares pancréatiques primaires à partir de souris

Découvrez un protocole standardisé d'isolement d'îlots pancréatiques chez le rat Lewis par digestion enzymatique et gradient de densité. Cette méthode optimise le rendement, la pureté et la viabilité pour la recherche sur le diabète et la transplantation.

Isolement et purification des îlots pancréatiques à partir de rats de Lewis grâce à la digestion enzymatique et à la séparation par gradient de densité (Vidéo) | JoVE Journal

Isolement et purification des îlots pancréatiques à partir de rats de Lewis grâce à la digestion enzymatique et à la séparation par gradient de densité

Explorer plus de vidéos