Name: Visualisation de l’activation du génome zygotique chez des cellules uniques des embryons précoces (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T13:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: Découvrez une méthode de visualisation directe de l'activation du génome zygotique à résolution unicellulaire chez Xenopus laevis. Ce protocole utilise le marquage métabolique avec 5-EU et la microscopie confocale pour étudier la dynamique spatiale et temporelle de la transcription embryonnaire.

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<ol><li>Kojima, M. L., Hoppe, C., Giraldez, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+maternal-to-zygotic+transition%3A+Reprogramming+of+the+cytoplasm+and+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">The maternal-to-zygotic transition: Reprogramming of the cytoplasm and nucleus.</a> Nat Rev Genet. 26 (4), 245-267 (2025).</li>
<li>Vastenhouw, N. L., Cao, W. X., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+maternal-to-zygotic+transition+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The maternal-to-zygotic transition revisited.</a> Development. 146 (11), dev161471(2019).</li>
<li>Jukam, D., Shariati, S. A. M., Skotheim, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zygotic+genome+activation+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Zygotic genome activation in vertebrates.</a> Dev Cell. 42 (4), 316-332 (2017).</li>
<li>Palfy, M., Joseph, S. R., Vastenhouw, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+timing+of+zygotic+genome+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">The timing of zygotic genome activation.</a> Curr Opin Genet Dev. 43, 53-60 (2017).</li>
<li>Chen, H., Einstein, L. C., Little, S. C., Good, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+patterning+of+zygotic+genome+activation+in+a+model+vertebrate+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal patterning of zygotic genome activation in a model vertebrate embryo.</a> Dev Cell. 49 (6), 852-866.e7 (2019).</li>
<li>Chen, H., Good, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nascent+transcriptome+reveals+orchestration+of+zygotic+genome+activation+in+early+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Nascent transcriptome reveals orchestration of zygotic genome activation in early embryogenesis.</a> Curr Biol. 32 (19), 4314-4324.e7 (2022).</li>
<li>Chen, H., Good, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+nascent+transcription+in+whole-mount+vertebrate+embryos+to+characterize+zygotic+genome+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Imaging nascent transcription in whole-mount vertebrate embryos to characterize zygotic genome activation.</a> Methods Enzymol. 638, 139-165 (2020).</li>
<li>Jao, C. Y., Salic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+RNA+transcription+and+turnover+in+vivo+by+using+click+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Exploring RNA transcription and turnover in vivo by using click chemistry.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (41), 15779-15784 (2008).</li>
<li>Chan, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brd4+and+P300+confer+transcriptional+competency+during+zygotic+genome+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Brd4 and P300 confer transcriptional competency during zygotic genome activation.</a> Dev Cell. 49 (6), 867-881.e8 (2019).</li>
<li>Adar-Levor, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokinetic+abscission+is+part+of+the+midblastula+transition+in+early+zebrafish+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Cytokinetic abscission is part of the midblastula transition in early zebrafish embryogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (15), e2021210118(2021).</li>
<li>Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+nascent+transcription+in+early+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantifying nascent transcription in early embryogenesis.</a> Methods Mol Biol. 2923, 143-162 (2025).</li>
<li>Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization%3A+An+improved+whole-mount+method+for+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization: An improved whole-mount method for Xenopus embryos.</a> Methods Cell Biol. 36, 685-695 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>16 % de paraformaldéhyde (PFA)</td><td>EMS</td><td>15710-S</td><td>Pour la création de la solution fixative</td></tr><tr><td>20 et fois ; SSC</td><td>Mediatech</td><td>MT46-020-CM</td><td>Pour fabriquer la solution de blanchiment</td></tr><tr><td>Mélangeur nutant 3D</td><td>VWR</td><td>76595-802</td><td>Pour la nutation des embryons</td></tr><tr><td>Fioles à filetage vissé de 9 mm (2 mL)</td><td>VWR</td><td>46610-722</td><td>Pour le traitement des embryons</td></tr><tr><td>Anticorps anti-histone H3</td><td>Abcam</td><td>déc. 1791</td><td>Pour l’immunocoloration</td></tr><tr><td>Acide ascorbique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7506</td><td>Pour avoir provoqué la réaction de clic</td></tr><tr><td>Alcool benzylique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>305197</td><td>Pour le dégagement des embryons</td></tr><tr><td>Benzoate de benzyle</td><td>ACROS Organics</td><td>105860010</td><td>Pour le dégagement des embryons</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3059</td><td>Pour fabriquer la solution de blocage</td></tr><tr><td>Bouchons pour fioles à filetage de 9 mm (2 mL)</td><td>VWR</td><td>46610-712</td><td>Pour le traitement des embryons</td></tr><tr><td>Verre de couverture (24 mm et multiplié 40 mm)</td><td>VWR</td><td>48393-060</td><td>Pour fabriquer une chambre d’imagerie</td></tr><tr><td>CuSO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>61230</td><td>Pour avoir provoqué la réaction de clic</td></tr><tr><td>Acide éthylénétique (oxyéthylénènitrilo)acide tétraacétique (EGTA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AC409915000</td><td>Pour la création de la solution fixative</td></tr><tr><td>Fiji ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td>Pour le traitement de l’imagerie</td></tr><tr><td>Formamide</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AC181090010</td><td>Pour fabriquer la solution de blanchiment</td></tr><tr><td>Pipettes à pasteur-verre</td><td>VWR</td><td>14673-010</td><td>Pour transférer le BABB</td></tr><tr><td>Anticorps secondaire anti-lapin de chèvre Alex Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A27034</td><td>Pour l’immunocoloration</td></tr><tr><td>Sérum de chèvre</td><td>Abcam</td><td>ab7481</td><td>Pour fabriquer la solution de blocage</td></tr><tr><td>Peroxyde d’hydrogène</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td><td>Pour fabriquer la solution de blanchiment</td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium (MgSO4)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>M65-500</td><td>Pour la création de la solution fixative</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A4524</td><td>Pour déshydrater les embryons</td></tr><tr><td>Méthanol, anhydre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>322415</td><td>Pour déshydrater les embryons</td></tr><tr><td>MOPS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AC172631000</td><td>Pour la création de la solution fixative</td></tr><tr><td>Mélangeur nutant multimode</td><td>VWR</td><td>76595-812</td><td>Pour la nutation des embryons</td></tr><tr><td>Pipette de transfert en plastique</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-711-9AM</td><td>Pour transférer des embryons</td></tr><tr><td>Lame de rasoir</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>18-100-970</td><td>Pour découper des bandes</td></tr><tr><td>Eau sans RNase</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP561-1</td><td>Pour créer des solutions sans Rnase</td></tr><tr><td>Roto-Mini PLUS (rotateur)</td><td>VWR</td><td>470313-912</td><td>Pour la roation des embryons</td></tr><tr><td>Tétraméthylrhodamine (TAMRA)-azide</td><td>Abcam</td><td>ab146486</td><td>Pour avoir provoqué la réaction de clic</td></tr><tr><td>TO-PRO-3</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T3605</td><td>Pour colorer l’ADN</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10789704001</td><td>Pour fabriquer le tampon de lavage</td></tr><tr><td>Base Trizma (Base Tris)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>Pour fabriquer le tampon Tris</td></tr><tr><td>Bandes VHB 3M GPH-110GF (45 mil.)</td><td>VWR</td><td>76524-608</td><td>Pour fabriquer une chambre d’imagerie</td></tr><tr><td>Microscope confocal Zeiss LSM 700</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Pour l’imagerie confocale</td></tr></tbody></table>

visualisation de l’activation du génome zygotique chez des cellules uniques des embryons précoces

Visualizing Zygotic Genome Activation In Single Cells of Early Embryos

Visualisation de l’activation du génome zygotique chez des cellules uniques des embryons précoces

Early embryogenesis requires the maternal-to-zygotic transition (MZT) that necessitates the zygotic genome activation (ZGA). During ZGA, hundreds to ...

visualizing-zygotic-genome-activation-in-single-cells-of-early-embryos

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Developmental Biology

Biologie du développement

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode permettant d'analyser le cerveau des vertébrés en développement dans embryons de poissons zèbres vivent à la résolution seule cellule par microscopie confocale. Cela inclut la méthode par laquelle nous injectons de l'embryon de poisson zèbre à cellule unique, puis monter et l'image du cerveau en développement.

En direct l&#39;imagerie du cerveau de poisson zèbre embryonnaires par microscopie confocale

Ce protocole décrit l'imagerie des neurones individuels ou des cellules de la crête neurale dans la vie des embryons de poisson zèbre. Cette méthode est utilisée pour examiner les comportements cellulaires actine et la localisation utilisant la fluorescence confocale time-lapse microscopie.

Imagerie en temps réel de la motilité cellulaire et cytosquelette d&#39;actine des neurones individuels et de la crête neurale dans les embryons de poissons zèbres

La vidéo montre le présent une méthode qui prend avantage de la combinaison de l'électroporation et la microscopie confocale pour l'imagerie en direct sur chaque cellules progénitrices neurales dans le cerveau antérieur poisson zèbre en développement.

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Cet article décrit une technique pour la visualisation des événements précoces de l'embryogenèse chez le...

Time-lapse de microscopie du début de l&#39;embryogenèse dans les Caenorhabditis elegans

Suivi en direct des progéniteurs rétiniens WT individuels dans des contextes génétiques distincts permet l'évaluation de la contribution de la signalisation non-autonome cellule pendant la neurogenèse. Ici, une combinaison de knock - down de gènes, la génération par la transplantation d' embryons chimères et in vivo d' imagerie confocale time-lapse a été utilisé à cette fin.

Imagerie in vivo de Transgenic Gene Expression en Retinal individuelle progéniteurs dans chimériques Zebrafish Embryons à étudier cellulaires Influences non autonomes

Ce manuscrit décrit une in vitro ovule méthode de culture qui permet l’imagerie de cellules vivantes des Arabidopsis zygotes et des embryons. Cette méthode est utilisée pour visualiser la dynamique intracellulaire au cours de la polarisation du zygote et la spécification des cellules sort dans le développement des embryons.

In Vitro Culture de l’ovule pour vivre-cellule d’imagerie du Zygote polarisation et structuration d’embryon chez Arabidopsis thaliana

Une combinaison des techniques optiques avancées de lecture avec excitation de fluorescence multi-photons longue longueur d’onde de laser a été mis en œuvre pour capturer l’imagerie haute résolution, en trois dimensions, en temps réel de la migration de la crête neurale en Tg (sox10:EGFP) et les embryons de poissons zèbres Tg (foxd3:GFP).

Multiphotonique Time Lapse imagerie de visualiser le développement en temps réel : visualisation de la migration des cellules neurales de crête dans des embryons de poisson-zèbre

Ce travail décrit un protocole semi-haut débit qui permet l'imagerie simultanée en time-lapse 3D de l'embryogenèse dans 80-100 embryons d'élegans de C. dans une seule course de nuit. En outre, des outils de traitement d'image et de visualisation sont inclus pour rationaliser l'analyse des données. La combinaison de ces méthodes avec des souches de reporter personnalisées permet une surveillance détaillée de l'embryogenèse.

Une méthode d'imagerie semi-haut débit et une boîte à outils de visualisation de données pour analyser C. elegans Embryonic Development

Une stratégie de préparation d’échantillons pour l’imagerie d’embryons précoces de poisson-zèbre dans un chorion intact à l’aide d’un microscope à feuillet de lumière est décrite. Il analyse les différentes orientations que les embryons acquièrent à l’intérieur du chorion aux stades épibolique et bourgeonnaire à 70 % et détaille les stratégies d’imagerie pour obtenir une résolution à l’échelle cellulaire dans tout l’embryon à l’aide du système de feuillet lumineux.

Stratégies d’imagerie et de montage par microscopie à feuillet de lumière pour les embryons précoces de poisson-zèbre

Cet article établit un pipeline pour des suspensions de cellules uniques et de noyaux de haute qualité d’embryons de souris gaztrulants pour le séquençage de cellules uniques et de noyaux.

Séquençage de l’ARN unicellulaire d’embryons entiers de souris mutantes : de l’épiblaste à la fin de la gastrulation

Nous fournissons des méthodes détaillées pour marquer et purifier métaboliquement les transcrits naissants pour l’analyse du transcriptome chez les embryons précoces de Xénopus en utilisant la 5-éthynyl-uridine (5-EU).

Marquage métabolique du transcriptome naissant chez Xenopus : embryogenèse précoce

Découvrez une méthode de visualisation directe de l'activation du génome zygotique à résolution unicellulaire chez Xenopus laevis. Ce protocole utilise le marquage métabolique avec 5-EU et la microscopie confocale pour étudier la dynamique spatiale et temporelle de la transcription embryonnaire.

Visualisation de l’activation du génome zygotique chez des cellules uniques des embryons précoces

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