Name: Profilage lysosomal avec LysoTracker pour une évaluation quantitative de la sénescence cellulaire chez les fibroblastes humains (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-17T12:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: Découvrez le profilage lysosomal avec LysoTracker Deep Red pour évaluer quantitativement la sénescence cellulaire chez les fibroblastes IMR-90 humains. Cette méthode d'imagerie en cellules vivantes offre une mesure indirecte du remodelage lysosomal.

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<table><tbody><tr><td>24-well tissue culture plate (fond plat, TC-traitées)</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229124</td><td>Toute plaque de culture multi-puits à fond transparent compatible avec l'imagerie de fluorescence en cellules vivantes (par exemple, des plaques en polystyrène TC-traitées à 6, 12 ou 24 puits ; des plaques d'imagerie à fond en verre peuvent être préférées pour une imagerie à plus haute résolution).</td></tr><tr><td>Kit de coloration pour la bêta-galactosidase (test de sénescence)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>9860</td><td>Tout kit commercial de SA-β-galactosidase avec tampon de coloration vérifié à pH 6,0. Pour référence, la solution de fixation contient 2% de formaldéhyde et 0,2% de glutaraldéhyde dans PBS, et la solution de coloration contient 1 mg/mL de X-gal dans DMF, 40 mM de citrate/phosphate pH 6,0, 5 mM de ferrocyanure de potassium, 5 mM de ferricyanure de potassium, 150 mM de NaCl, 2 mM de MgCl2.</td></tr><tr><td>BioRender (logiciel d'illustration scientifique)</td><td>BioRender</td><td>N/A &mdash; application web</td><td>Utilisé pour créer des figures schématiques (Figures 1&ndash;3). https://www.biorender.com</td></tr><tr><td>Gaz de dioxyde de carbone (CO2), bouteille comprimée</td><td>Airgas (ou fournisseur similaire)</td><td>N/A</td><td>CO2 de qualité médicale utilisé pour maintenir une atmosphère de 5% dans l'incubateur de culture cellulaire et la chambre d'imagerie sur scène.</td></tr><tr><td>Sérum bovin foetal (FBS), inactivé par la chaleur</td><td>Thermo Fisher Scientific (Gibco)</td><td>10082147</td><td>Tout FBS de qualité pour culture cellulaire, inactivé par la chaleur à 56 &deg;C ; utilisé à 10% v/v dans le milieu de culture complet.</td></tr><tr><td>Microscope à fluorescence avec capacité en cellules vivantes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMF7000</td><td>Tout microscope à fluorescence à champ large ou confocal avec contrôle de la température et du CO2 pour les cellules vivantes, des jeux de filtres pour les canaux lointains rouges (excitation ~647 nm / émission ~670 nm) et DAPI/Hoechst (excitation ~405 nm / émission ~460 nm), et un objectif 20&times;-40&times; avec un NA suffisant pour résoudre les caractéristiques lysosomales. Le système d'imagerie EVOS M7000 a été utilisé dans cette étude.</td></tr><tr><td>Colorant nucléaire Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>Colorant d'ADN perméable aux cellules pour la coloration nucléaire des cellules vivantes (fluorescence bleue, excitation ~405 nm). Ne peut pas être utilisé de manière interchangeable avec le DAPI, qui n'est pas perméable aux cellules dans des conditions physiologiques.</td></tr><tr><td>Logiciel d'analyse d'image</td><td>Python Software Foundation</td><td>N/A</td><td>Tout environnement de calcul scientifique supportant la segmentation du noyau, l'expansion de la région noyau-cellule, le seuillage d'intensité et les statistiques d'image de base (par exemple, Python avec scikit-image, MATLAB, ImageJ/Fiji, CellProfiler). Le pipeline SenTrack (voir fichier supplémentaire S1) a été développé pour cette étude.</td></tr><tr><td>Fibroblastes pulmonaires humains IMR-90 (lignée cellulaire)</td><td>ATCC</td><td>CCL-186</td><td>Lignée cellulaire de fibroblastes diploïdes pulmonaires foetaux humains normaux utilisée pour modéliser la sénescence réplicative ; toute lignée de fibroblastes humains de même type peut être substituée.</td></tr><tr><td>LysoTracker Deep Red</td><td>Thermo Fisher Scientific (Invitrogen)</td><td>L12492</td><td>Colorant fluorescent acidophile pour la coloration des organites acides en cellules vivantes ; fourni sous forme de stock 1 mM dans DMSO. La concentration de travail est de 75nM dans le milieu de culture cellulaire préparé.  L'émission lointain rouge (ex 647 nm / em 668 nm) minimise le chevauchement avec l'autofluorescence de la lipofuscine mais ne l'élimine pas.</td></tr><tr><td>Milieu essentiel minimum (MEM)</td><td>Thermo Fisher Scientific (Gibco)</td><td>11-095-080</td><td>Milieu de culture de base pour les fibroblastes IMR-90 ; complété avec 10% de FBS et 1% de pénicilline-streptomycine. Toute formulation standard du milieu essentiel minimum d'Eagle avec sels d'Earle et L-glutamine peut être substituée.</td></tr><tr><td>Solution de pénicilline-streptomycine (100&times;)</td><td>Thermo Fisher Scientific (Gibco)</td><td>15140122</td><td>Supplément antibiotique pour le milieu de culture complet ; utilisé à 1% v/v (concentration finale 100 U/mL de pénicilline, 100 &mu;g/mL de streptomycine). Toute solution pen-strep standard peut être substituée.</td></tr><tr><td>Milieu d'imagerie sans rouge phénol</td><td>Thermo Fisher Scientific (Gibco)</td><td>A1896701</td><td>DMEM ou HBSS sans rouge phénol utilisé pour l'imagerie de cellules vivantes afin de réduire la fluorescence de fond pendant l'acquisition. Le DMEM FluoroBrite est une option couramment utilisée ; tout tampon d'imagerie sans rouge phénol complété avec 10% de FBS peut être substitué.</td></tr><tr><td>Tampon phosphate-tamponné (PBS), pH 7,4 (1&times;)</td><td>Thermo Fisher Scientific (Gibco)</td><td>10010023</td><td>Tampon isotonique pour le lavage cellulaire et la dilution des réactifs ; tout PBS 1&times; stérile à pH 7,4 peut être substitué.</td></tr><tr><td>SenTrackLite v0.5.0 (logiciel)</td><td>Open-Source (Estrada / Melendez Lab)</td><td>v0.5.0</td><td>Application Python / Tkinter open-source à fichier unique pour l'analyse d'images de sénescence lysosomale. Distribué comme fichier supplémentaire S1. Archivé sur Zenodo, doi:10.5281/zenodo.19701255. Licence MIT. Source: https://github.com/goldbader-hub/Sentrack</td></tr><tr><td>Chambre environnementale sur la scène</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMC2000</td><td>Chambre environnementale pour l'imagerie de cellules vivantes sur microscope avec contrôle de la température (37 &deg;C) et du CO2 (5%). L'incubateur EVOS Onstage a été utilisé dans cette étude ; tout incubateur équivalent sur la scène peut être substitué.</td></tr></tbody></table>

profilage lysosomal avec lysotracker pour une évaluation quantitative de la sénescence cellulaire chez les fibroblastes humains

Lysosomal Profiling With LysoTracker For Quantitative Assessment of Cellular Senescence In Human Fibroblasts

Profilage lysosomal avec LysoTracker pour une évaluation quantitative de la sénescence cellulaire chez les fibroblastes humains

Cellular senescence is a stable cell-cycle arrest state associated with characteristic phenotypes, including enlarged cell morphology, altered secretory ...

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Quantification par cytométrie en flux de cellules cancéreuses sénescentes induites par la thérapie

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La sénescence cellulaire est le facteur clé dans le développement de pathologies chroniques liées à l'âge. L'identification des thérapies qui ciblent les cellules sénescentes s'avère prometteuse pour prolonger le vieillissement sain. Ici, nous présentons un essai nouveau pour l'identification des sénotherapeutics basés sur la mesure de l'activité associée de sénescence de 'Galactosidase dans les cellules simples.

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Mesure des taux de renouvellement des protéines dans les cellules cultivées sénescentes et non divisées avec marquage métabolique et spectrométrie de masse

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Détection de la sénescence à l’aide de la lumière réfléchie dans la fraction vasculaire stromale adipeuse

Découvrez le profilage lysosomal avec LysoTracker Deep Red pour évaluer quantitativement la sénescence cellulaire chez les fibroblastes IMR-90 humains. Cette méthode d'imagerie en cellules vivantes offre une mesure indirecte du remodelage lysosomal.

Profilage lysosomal avec LysoTracker pour une évaluation quantitative de la sénescence cellulaire chez les fibroblastes humains

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