Name: Production et purification recombinante de l’hydrophobine SC16 à partir d’Escherichia coli et surveillance de son auto-assemblage à l’aide de tests de fluorescence (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: Découvrez la production recombinante et la purification de l'hydrophobine SC16 à partir d'Escherichia coli. Ce protocole permet d'obtenir ≥5 mg de protéine purifiée et de surveiller son auto-assemblage par fluorescence au thioflavine T.

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<table><tbody><tr><td>2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>145224-94-8</td><td>Composant de tampon pour les tests d'auto-assemblage</td></tr><tr><td>Tube en polystyrène rond de fond de 5 mL</td><td>Falcon</td><td>352054</td><td>Utilisé pour les tests d'auto-assemblage à faible débit</td></tr><tr><td>Microplaque en polystyrène noir de 96 puits</td><td>Grenier</td><td>655076</td><td>Utilisé pour les mesures de fluorescence dans un lecteur de microplaques</td></tr><tr><td>Solution d'acrylamide/Bis-acrylamide (29:1) (40%)</td><td>BioShop</td><td>ACR004.500</td><td>Utilisé pour préparer les gels SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BioShop</td><td>AGR002.1</td><td>Agar utilisé pour fabriquer des plaques LB résistantes à l'ampicilline</td></tr><tr><td>Ampicilline</td><td>IBI Scientific</td><td>IB02040</td><td>Antibiotique utilisé dans les plaques LB-agar</td></tr><tr><td>Fioles Fernbach 2,8 L à remous</td><td>Fisher Scientific</td><td>955239</td><td>Utilisé pour la croissance de cultures bactériennes en grand volume</td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoéthanol</td><td>TCI Chemicals</td><td>60-24-2</td><td>Agent réducteur utilisé dans la préparation des échantillons SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Colonne (colonne de gravité de 1,5 cm de diamètre)</td><td>Bio-Rad</td><td>7371522</td><td>Utilisé pour la purification par affinité au nickel</td></tr><tr><td>Tube de dialyse (MWCO de 3500 kDa)</td><td>BioDesign</td><td>D302</td><td>Utilisé pour l'échange de tampons pendant la purification</td></tr><tr><td>Filtre d'émission</td><td>Edmund Optics</td><td>84080</td><td>Utilisé pour les tests ThT (494 nm, bande passante de 20 nm)</td></tr><tr><td>Filtre d'excitation</td><td>Edmund Optics</td><td>67012</td><td>Utilisé pour les tests ThT (438 nm, bande passante de 24 nm)</td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques à fluorescence</td><td>Tecan</td><td>Infinite F200 Pro</td><td>Utilisé pour mesurer l'intensité de fluorescence ThT</td></tr><tr><td>Plaque chauffante</td><td>Lab Fish</td><td>HS5C</td><td>Utilisé pour la configuration d'un bain-marie avec surveillance de la température</td></tr><tr><td>Acide chlorhydrique (HCl)</td><td>Fisher Chemical</td><td>A144-212</td><td>Utilisé pour l'ajustement du pH des tampons</td></tr><tr><td>Imidazole</td><td>TCI Chemicals</td><td>288-32-4</td><td>Utilisé dans la purification IMAC (tampon de lavage et de élution)</td></tr><tr><td>Isopropyl &beta;-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>367-93-1</td><td>Induisant l'expression des protéines dans E. coli</td></tr><tr><td>Bouillon LB (Lennox)</td><td>BioShop</td><td>LBL405.5</td><td>Milieu de croissance pour la culture bactérienne</td></tr><tr><td>Centrifugeuse réfrigérée à basse vitesse</td><td>Beckman Coulter</td><td>360291</td><td>Utilisé pour peler les cellules avant le stockage</td></tr><tr><td>Perles d'agarose NTA au nickel</td><td>GoldBio</td><td>H-350-50</td><td>Résine utilisée pour la purification par affinité des protéines marquées His</td></tr><tr><td>Plasmidie SC16</td><td>BioBasic</td><td>N/A</td><td>Construction d'ADN personnalisée codant pour la protéine de fusion H-GB1-SC16</td></tr><tr><td>E. coli SHuffle T7 Express compétent</td><td>New England Biolabs</td><td>C3029J</td><td>Souche hôte utilisée pour l'expression de protéines recombinantes</td></tr><tr><td>Chlorure de sodium (NaCl)</td><td>BioShop</td><td>SOD001.5</td><td>Composant de tampon et régulateur de force ionique</td></tr><tr><td>Hydroxyde de sodium (NaOH)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS255-1</td><td>Utilisé pour l'ajustement du pH des tampons</td></tr><tr><td>Phosphate de sodium</td><td>BioShop</td><td>SPD579.1</td><td>Composant de tampon pour maintenir le pH</td></tr><tr><td>Spectrophotomètre</td><td>Pharmacia Biotech</td><td>5096</td><td>Utilisé pour la quantification de SC16</td></tr><tr><td>Thioflavine T (ThT)</td><td>Acros Organics</td><td>2390-54-7</td><td>Colorant fluorescent utilisé pour surveiller l'auto-assemblage des protéines</td></tr><tr><td>Protéase thrombine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>04-04-9002</td><td>Utilisé pour la clivage de la protéine de fusion H-GB1-SC16</td></tr><tr><td>Tris(hydroxyméthyl)aminométhane (Tris)</td><td>BioShop</td><td>TRS001.5</td><td>Tampon utilisé dans les solutions de purification et d'essai</td></tr><tr><td>Centrifugeuse réfrigérée à grande vitesse</td><td>Sorvall</td><td>46915</td><td>Utilisé pour clarifier le lysat après la lyse cellulaire</td></tr><tr><td>Configuration SDS-PAGE</td><td>Bio-Rad</td><td>1658000EDU</td><td>Utilisé pour préparer et faire fonctionner les gels SDS-PAGE</td></tr></tbody></table>

production et purification recombinante de l’hydrophobine sc16 à partir d’escherichia coli et surveillance de son auto-assemblage à l’aide de tests de fluorescence

Recombinant Production And Purification of Hydrophobin SC16 From Escherichia coli And Monitoring of Its Self-Assembly Using Fluorescence Assays

Production et purification recombinante de l’hydrophobine SC16 à partir d’Escherichia coli et surveillance de son auto-assemblage à l’aide de tests de fluorescence

Hydrophobins are small amphipathic proteins that self-assemble at hydrophobic&#8211;hydrophilic interfaces to form stable waterproof coatings over fungal ...

recombinant-production-purification-hydrophobin-sc16-from-escherichia

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Production rapide de ribonucléase humaine recombinante SLFN14 et analyse stœchiométrique par photométrie de masse

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