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</ol>

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>90000-786</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Alcohol burner flame</td><td>Wards</td><td>470346-104</td><td>Pour stériliser la boucle d'inoculation</td></tr><tr><td>Ammonium iron sulfate hexahydrate</td><td>Supelco</td><td>FX0245-1</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Ammonium nitrate (NH4NO3)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT134170-250G</td><td>Pour les milieux minimaux</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>VWR International</td><td>76683-456</td><td>Pour stériliser la verrerie et les milieux</td></tr><tr><td>Biological Safety Cabinet</td><td>ThermoFischer Scientific&nbsp;</td><td>1323TS</td><td>Pour réduire la contamination des plaques et du laboratoire.</td></tr><tr><td>Biotin</td><td>VWR</td><td>97061-444</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique</td></tr><tr><td>Boric acid (H3BO3)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>100503-696</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Calcium chloride (CaCl2)</td><td>AVANTOR PERFORMANCE MATERIAL LLC</td><td>JT1311-1</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique</td></tr><tr><td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2&middot;2H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506-25G</td><td>Pour les milieux minimaux</td></tr><tr><td>Citric acid monohydrate (C6H8O7&middot;H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1002440500</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Copper sulfate pentahydrate (CuSO4&middot;5H2O H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT121245-1KG</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>71001-754</td><td>Utilisé pour retirer les conidies de la surface de la plaque et stériliser la boucle d'inoculation</td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ</td><td>National Institutes of Health (NIH)</td><td>N/A</td><td>Pour analyser les images/comptage</td></tr><tr><td>Gloves</td><td>SW Safety Solutions</td><td>76382-944</td><td>Pour la sécurité</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Pour effectuer des tests statistiques et créer des figures</td></tr><tr><td>Growth Chamber</td><td>Caron Products &amp; Services</td><td>6320 &amp; 6340 Series</td><td>Programmable pour les cycles de photopériode</td></tr><tr><td>HOBO Data Logger</td><td>Onset Computer Corporation</td><td>MX2202</td><td>Pour la journalisation de l'intensité lumineuse et de la température</td></tr><tr><td>Inoculation loop</td><td>VWR International</td><td>10806-354</td><td>Pour transférer le matériel fongique dans les boîtes de Petri</td></tr><tr><td>Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4&middot;7H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT145380-1KG</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Manganese sulfate monohydrate (MnSO4&middot;H2O H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1059410250</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Microscope (Leica S6 D Greenough Stereo Microscope)</td><td>Leica Microsystems</td><td>10446297</td><td>Pour l'imagerie</td></tr><tr><td>Neurospora crassa FGSC 2489</td><td>Fungal Genetics Stock Center</td><td>74-OR23-1VA, JCM19069</td><td>Souche fongique</td></tr><tr><td>Paper Towels</td><td>Kimberly-Clark Professional, Scott and Kleenex</td><td>6666114</td><td>Pour verser les milieux</td></tr><tr><td>Permanent Marker</td><td>Sharpie</td><td>30072</td><td>Pour étiqueter les plaques</td></tr><tr><td>Petri Dishes</td><td>VWR International</td><td>25384-164</td><td>Pour le placage des milieux de croisement synthétique</td></tr><tr><td>Pipettes</td><td>VWR International</td><td>75816-090</td><td>Pour verser les milieux</td></tr><tr><td>Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT225070-500G</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Potassium nitrate (KNO3)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221295-100G</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique</td></tr><tr><td>Small Disposable Glass Test Tubes</td><td>VWR International</td><td>470211-698</td><td>Pour la croissance initiale de la souche fongique</td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>VWR International</td><td>BDH9286-500G</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique</td></tr><tr><td>Sodium citrate dihydrate (Na3C6H5O7&middot;2H2O)</td><td>VWR</td><td>97061-008</td><td>Pour les milieux minimaux</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (NaOH)</td><td>AVANTOR PERFORMANCE MATERIAL LLC</td><td>JT5635-2</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique</td></tr><tr><td>Sodium molybdate dihydrate (Na2MoO4&middot;2H2O)</td><td>Supelco</td><td>1.06524.1000</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>VWR International</td><td>BDH9308-500G</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr><tr><td>Zinc sulfate heptahydrate (ZnSO4&middot;7H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT122545-500G</td><td>Pour les milieux de croisement synthétique/milieu minimal</td></tr></tbody></table>

essai d’imagerie sur plaques pour quantifier les réponses photopériodiques chez neurospora crassa en utilisant le développement des protopérithèques

Plate-Based Imaging Assay for Quantifying Photoperiodic Responses in Neurospora crassa Using Protoperithecia Development

Après inoculation avec la souche sauvage, les conidies ont couvert la surface du SC en 36 à 48 heures. Après 7 jours d’exposition à la photopériode, une épaisse couche conidiale s’est formée et a été retirée avec un essuie-tout humidifié saturé à 70 % d’éthanol (Figure 1). Cette étape a exposé les protopérithèques sous-jacents sans perturber leur structure. À la microscopie, les protopérithèques apparaissaient sous forme de structures circulaires sombres réparties sur la surface de la plaque...

Essai d’imagerie sur plaques pour quantifier les réponses photopériodiques chez Neurospora crassa en utilisant le développement des protopérithèques

Neurospora crassa is a well-established model organism for studying biological timing and light-regulated development. The Protoperithecia Assay (PPA) is ...

plate-based-imaging-assay-for-quantifying-photoperiodic-responses

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Nous présentons ici un roman Ca 2+ -Imagerie approche utilisant un journaliste bioluminescente. Cette approche utilise une construction GFP-aequorine condensé qui se lie au Ca 2+ et émet de la lumière, éliminant le besoin d'une lumière d'excitation. Significativement cette méthode permet à long imagerie continue, l'accès à des structures profondes du cerveau et une haute résolution temporelle.

In Vivo cérébrale fonctionnelle approche d&#39;imagerie à base de calcium Bioluminescent Indicateur GFP-aequorine

L'horloge circadienne régule environ un tiers du transcriptome Arabidopsis, mais le pourcentage de gènes qui se nourrissent de nouveau dans timekeeping reste inconnue. Ici, nous visualisons une méthode pour évaluer rapidement les phénotypes circadiens dans toute lignée mutante d'Arabidopsis en utilisant l'imagerie luminescente d'un journaliste circadien transitoirement exprimé en protoplastes.

Analyse rapide des phénotypes circadiens dans Arabidopsis protoplastes transfectées avec un Luminescent Clock Reporter

L’utilisation d’une « puce olfactive » adaptée pour l’imagerie calcique efficace de c. elegans mâles est décrite ici. Études sur l’exposition de glycérol et d’une phéromone mâle sont également indiqués.

En utilisant une puce olfactif microfluidique adapté pour l’imagerie de l’activité neuronale en réponse aux phéromones dans les neurones de tête mâle C. Elegans

Ici, nous présentons une approche combinatoire utilisant la microscopie à haute résolution, les outils de calcul, et l’étiquetage à une seule cellule dans les embryons vivants de C. elegans pour comprendre la dynamique de cellule unique pendant le neurodéveloppement.

Microscopie isotrope en feuilles légères et analyse automatisée de la lignée cellulaire au catalogue Caenorhabditis elegans embryogenèse avec résolution subcellulaire

Les colorants fluorescents vitaux sont des outils essentiels pour les analyses d'imagerie des cellules vivantes dans la biologie des cellules fongiques modernes. Cet article détaille l'application de colorants fluorescents établis et moins connus pour suivre la dynamique de la membrane plasmatique, l'endo-/exocytose et la morphogénèse de la paroi cellulaire dans les champignons filamenteux.

Application de colorants fluorescents sélectifs de membrane et de mur cellulaire pour l'imagerie de cellules vivantes des champignons filamenteux

Ici, nous introduisons et décrivons une méthode non radioactive et non invasive pour évaluer la synthèse de la protéine de novo in vivo, en utilisant le nématode Caenorhabditis elegans et la récupération de fluorescence après photobleaching (FRAP). Cette méthode peut être combinée avec des écrans génétiques et/ou pharmacologiques pour identifier de nouveaux modulateurs de synthèse protéique.

Évaluation des taux de synthèse des protéines de novo à Caenorhabditis elegans

Un protocole d’imagerie des microtubules dynamiques in vivo à l’aide d’une protéine de liaison à l’extrémité sous marquage fluorescent a été présenté. Nous avons décrit les méthodes pour étiqueter, imager et analyser les microtubules dynamiques dans le neurone du microtubule latéral postérieur (PLM) de C. elegans.

In vivo Évaluation de la dynamique et de l’orientation des microtubules dans les neurones de Caenorhabditis elegans

Nous présentons un protocole d’imagerie en direct sans étiquette utilisant des techniques de microscopie optique transmise pour capturer des images, analyser et quantifier la cinétique de croissance du champignon filamenteux A. nidulans dans les cultures submergées et les milieux solides. Ce protocole peut être utilisé en conjonction avec la microscopie à fluorescence.

Analyse quantitative du taux de croissance d’Aspergillus nidulans à l’aide de la microscopie en direct et d’un logiciel open source

Nous présentons un protocole pour caractériser électrophysiologiquement les photopigments bi-stables : (i) exploiter les déplacements de charge au sein des molécules de photopigment suite à l’absorption des photons et leur énorme quantité dans les photorécepteurs, et (ii) exploiter les différences de spectres d’absorption des états photopigment rhodopsine et métarhodopsine. Ces protocoles sont utiles pour dépister les mutations affectant les systèmes de photopigments stables.

Méthodes électrophysiologiques pour mesurer les niveaux de photopigment dans les photorécepteurs de la drosophile

La plupart des organismes photoautotrophes nageant présentent des changements de comportement photo-induits (photocomportement). Le présent protocole observe ledit photocomportement chez l’organisme modèle Chlamydomonas reinhardtii.

Observation du photocomportement chez Chlamydomonas reinhardtii

Nous décrivons ici un outil avancé conçu pour le suivi de la biosynthèse de la chlorophylle au cours des premiers stades de la désétiolement des plantules d’Arabidopsis . La nouvelle méthodologie fournit une imagerie non invasive de fluorescence de la chlorophylle en temps réel à haute résolution spatiale et temporelle.

Test non invasif pour la détermination de la cinétique de biosynthèse de la chlorophylle au cours des premiers stades de la désétiolement d’Arabidopsis

The State University of New Jersey.  Le test des protopérithèques quantifie les réponses photopériodiques chez Neurospora crassa en mesurant la formation des protopérithèques sous des cycles clair-obscurité définis. Cette méthode basée sur les plaques offre une approche simple et évolutive pour comparer les réponses développementales dépendantes des photopériodes à travers des conditions expérimentales.

Essai d’imagerie sur plaques pour quantifier les réponses photopériodiques chez Neurospora crassa en utilisant le développement des protopérithèques

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