Name: Caractérisation fonctionnelle des partenaires pré- et postsynaptiques individuels dans le système nerveux central larvaire de Drosophila à l’aide de CaMPARI (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-16T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Découvrez la validation fonctionnelle des connexions synaptiques dans le système nerveux larvaire de Drosophila en combinant optogénétique et imagerie calcique CaMPARI. Cette méthode permet d'étudier la signalisation synaptique dépendante de l'activité entre neurones sensoriels et interneurones identifiés chez des larves intactes non disséquées.

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<table><tbody><tr><td>0.1 M Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td>Produit chimique utilisé dans la solution pour hydrater et monter les larves</td></tr><tr><td>All-trans-rétinal (ATR)&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R2500-500mg</td><td>Chimique ajouté à la nourriture pour activer les outils optogénétiques</td></tr><tr><td>Microscope confocal</td><td>ZEISS&nbsp;</td><td>LSM900 Confocal</td><td>Microscope confocal, Objectif (40&times;/1.2 NA), Source lumière/laser (405, 488, 561 nm)</td></tr><tr><td>Lamelles de couverture (18x18mm)</td><td>VWR</td><td>48366-205</td><td>Utilisées pour monter les animaux pour l'imagerie</td></tr><tr><td>Éthanol (95%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E7023</td><td>Utilisé comme solvant pour la poudre ATR</td></tr><tr><td>Fiji (ImageJ)</td><td>Source ouverte</td><td>RRID:SCR_002285&nbsp;</td><td>Utilisé pour l'analyse d'image</td></tr><tr><td>Prism version 10.4.1</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>RRID:SCR_002798</td><td>Utilisé pour l'analyse statistique</td></tr><tr><td>Lamelles de microscope</td><td>VWR</td><td>&nbsp;48300-041</td><td>Utilisées pour monter les animaux pour l'imagerie</td></tr><tr><td>Pâte à modeler</td><td>Flinn scientific</td><td>FB0600</td><td>Utilisée pour maintenir la lamelle de couverture sur la lamelle de microscope avec les larves entre les deux</td></tr><tr><td>Pinceau&nbsp;</td><td>Genesee scientific</td><td>59-204</td><td>Utilisé pour transférer les larves entre différents endroits</td></tr><tr><td>Milieu standard de gélose au farine de maïs</td><td>Genesee scientific</td><td>66-123</td><td>La nourriture peut également être préparée en utilisant des recettes et des ingrédients standard similaires</td></tr><tr><td>Vials plastiques standards Drosophila (flacons étroits Drosophila de 25 mm x 95 mm)</td><td>Genesee scientific</td><td>32-109</td><td>Des flacons ou des bouteilles plus grands peuvent également être utilisés</td></tr><tr><td>Plaque micro spot à trois puits</td><td>Electron Microscopy Sciences&nbsp;</td><td>71561-01</td><td>Plaque utilisée pour séparer et nettoyer chaque larve individuellement</td></tr><tr><td>Souche Drosophila (génotype : w; Basin4-LexA/CyO-TwGFP; ppk-GAL4/ppk-GAL4)&nbsp;</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center</td><td>RRID:BDSC_54899 &amp; RRID:BDSC_32079</td><td>Obtenue en recombinant RRID:BDSC_54899 et RRID:BDSC_32079</td></tr><tr><td>Souche Drosophila (génotype : w, UAS-IVS-CsChrimson.mVenus, LexAOp-CaMPARI2; Sp/CyO)</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center</td><td>RRID:BDSC_81085</td><td>Obtenue en recombinant RRID:BDSC_81085 avec des marqueurs du deuxième chromosome</td></tr></tbody></table>

caractérisation fonctionnelle des partenaires pré- et postsynaptiques individuels dans le système nerveux central larvaire de drosophila à l’aide de campari

Functional Characterization of Individual Pre- and Postsynaptic Partners In the Drosophila Larval Central Nervous System Using CaMPARI

Caractérisation fonctionnelle des partenaires pré- et postsynaptiques individuels dans le système nerveux central larvaire de Drosophila à l’aide de CaMPARI

Connectome studies have greatly expanded understanding of synaptic connectivity in the nervous systems of various species. While characterization of ...

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Ce protocole montre comment Proximité Ligation Assay peut être utilisé pour détecter des interactions protéine-protéine in situ à la jonction des larves de Drosophila neuromusculaire. Avec cette technique, disques grande et Hu-li shao de tai sont présentés pour former un complexe dans la région post-synaptique, une association préalablement identifiés par co-immunoprécipitation.

Détection de In Situ complexes protéine-protéine à la Drosophila Larvaire jonction neuromusculaire Utilisation Proximité ligature Assay

Ici , nous montrons comment quantifier le nombre et la répartition spatiale des zones actives synaptiques dans Drosophila melanogaster photorécepteurs, mis en évidence avec un marqueur moléculaire codé génétiquement, et leur modulation après une exposition prolongée à la lumière.

Analyse Synaptic Modulation de<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Photorécepteurs après exposition à la lumière prolongée

Ici, nous présentons un protocole pour une technique de marquage mosaïque qui permet la visualisation des neurones dérivées d'une cellule progénitrice commune en deux couleurs distinctes. Ceci facilite l'analyse de la lignée neuronale avec la capacité des neurones individuels naissance à jour et de la fonction du gène à étudier dans les mêmes neurones de différents individus.

Analyses Cell Lineage et des études de fonction de gènes à l&#39;aide Twin-tache marcm

Courants synaptiques sont enregistrables circonscrits de visualisé boutons synaptiques à la jonction neuromusculaire Drosophila troisième stade larvaire des larves. Cette technique permet la surveillance de l’activité d’un seul bouton synaptique.

Focal Macropatch enregistrements de courants synaptiques de la jonction neuromusculaire larves de drosophile

Ici nous présentons un protocole avec lequel le calcium pré- et/ou postsynaptic peut être visualisé dans le contexte de l'apprentissage et de la mémoire de Drosophila. L'imagerie in vivo de calcium utilisant des capteurs de calcium synaptically localisés est combinée avec un paradigme olfactif classique de telle sorte que la plasticité synaptique sous-jacente à ce type d'apprentissage associatif peut être déterminée.

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster In Vivo

Nous décrivons une méthode pour le traçage rétrograde des neurones moteurs embryonnaires de Drosophila utilisant des colorants fluorescents lipophiles.

Traçage rétrograde des neurones moteurs embryonnaires drosophila à l'aide de colorants fluorescents lipophiles

Nous décrivons un protocole de mesure des contacts entre les cellules des couches épithéliales adjacentes dans les disques imaginaux vivants des ailes de drosophile en utilisant une approche basée sur la reconstitution de la GFP.

Système d’expression double basé sur la complémentation GFP pour évaluer le contact cellule-cellule médié par les cytonèmes dans des disques imaginaux vivants d’aile de drosophile

Découvrez la validation fonctionnelle des connexions synaptiques dans le système nerveux larvaire de Drosophila en combinant optogénétique et imagerie calcique CaMPARI. Cette méthode permet d'étudier la signalisation synaptique dépendante de l'activité entre neurones sensoriels et interneurones identifiés chez des larves intactes non disséquées.

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Caractérisation fonctionnelle des partenaires pré- et postsynaptiques individuels dans le système nerveux central larvaire de Drosophila à l’aide de CaMPARI

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