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	<li>Gao H, Gao S, Kan G, Valentovich LN, An Y. Research progress of base editing and prime editing tools based on the CRISPR/Cas system. Mol Ther Nucleic Acids. 2025;36.</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1M Tris-HCl, pH 8.0</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15568025</td><td></td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>R0491&nbsp;</td><td>Agarose UltraPure 16500500 ThermoFisher 500g</td></tr><tr><td>AMPure XP SPRI Beads&nbsp;</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td>B23317&nbsp;</td><td>A63880, AMPure XP Beads for DNA Cleanup, 5 mL, Beckman Coulter</td></tr><tr><td>ATP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CEPT Cocktail&nbsp;</td><td>Bio-Techne / Tocris&nbsp;</td><td>7200&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CleanCap AG Reagent&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-7113&nbsp;</td><td>CleanCap AG 3&prime; OMe CleanScript IVT Kit, 125 x 20 &micro;L rxns,&nbsp;</td></tr><tr><td>CTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Custom DNA Primers&nbsp;</td><td>Integrated DNA Technologies&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DNA Loading Dye&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>B7024&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco&rsquo;s Phosphate Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>14190-144&nbsp;</td><td>D8537-100ML</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>11965-092&nbsp;</td><td>DMEM High Glucose [4,500 mg/L] with [4.0 mM] L-Glutamine and [110 mg/L] Sodium Pyruvate, 500 mL</td></tr><tr><td>Gel Extraction Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28704&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>GTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Illumina Indexing Primers&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>FC-131-2001&nbsp;</td><td>10uM stocks</td></tr><tr><td>Illumina MiSeq Sequencer&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>SY-410-1003&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lithium Chloride RNA Precipitation Solution&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9480&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lonza 4D Nucleofector System&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>AAF-1002X&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ssRNA Ladder NEB</td><td>NEB</td><td>N0362S</td><td>5ul/ reaction</td></tr><tr><td>MiSeq Reagent Kit v3 (300 cycles)&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>MS-102-3002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methyl-Pseudouridine-5&prime;-Triphosphate&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-1081&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NEBNext Ultra II Q5 Master Mix&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0544&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nuclease-Free Water&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9937&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC Slide A8&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>941-0008&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC-3000&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>NC-3000&nbsp;</td><td>10ul of cell solution and 0.4167 &mu;L of DAPI solution&nbsp;</td></tr><tr><td>Solution 15, Hoechst 33342, 1 mL 910-3015 Chemometec</td><td>Chemometec</td><td>910-3013&nbsp;</td><td>500 &mu;g/ml ~ 0.9 mM ~ 0.05%</td></tr><tr><td>Nucleocuvette Strips&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>P3 Primary Cell Nucleofector Solution&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td>1 x 0.675 mL P3 Primary Cell Nucleofector&reg; Solution</td></tr><tr><td>Phusion High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>F530L&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>EO0491&nbsp;</td><td>Quantity: 1mL, >600 U/mL (~20 mg/mL)</td></tr><tr><td>Q5 High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0491&nbsp;</td><td>2,000 units/ml 100 units&nbsp;</td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28104&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA High Sensitivity Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q33230&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit RNA Broad Range Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q10211&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit&trade; Assay Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32856</td><td></td></tr><tr><td>RNA Gel Loading Dye (2x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0641</td><td>5ul/ reaction</td></tr><tr><td>RNA Purification Kit&nbsp;</td><td>Zymo Research&nbsp;</td><td>R1017&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNase Away&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>1236B62&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>SDS, 10% solution</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15553027</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Gold Nucleic Acid Gel Stain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11494</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Safe DNA Gel Stain&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>S33102&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic sgRNA / pegRNA&nbsp;</td><td>Synthego / IDT&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td>2ug&nbsp;</td></tr><tr><td>HiScribe T7 High Yield RNA Synthesis Kit, 250 reactions</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>E2040L</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12604013&nbsp;</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>TE buffer (Tris-EDTA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;AM9849</td><td>TE, pH 8.0, RNase-free Thermo</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>25200056&nbsp;</td><td>1X&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS), Premium, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5670701</td><td></td></tr><tr><td>mTSER PLUS&nbsp;</td><td>STEM cell Technologies</td><td># 100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin Mixture 10,000 ug/mL, 100 mL, 4-pack</td><td>Quality Biological</td><td>120-095-721&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

Édition génomique dans les cellules primaires de mammifères via électroporation de l’arn éditeur

Genome Editing in Primary Mammalian Cells via Electroporation of Editor RNA

Édition génomique dans les cellules primaires de mammifères via électroporation de l’ARN éditeur

CRISPR editors including nucleases, base editors, and prime editors can efficiently correct disease-causing genetic variants or disrupt target genes. ...

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Biology

Biologie

nucléases de créateurs tels que nucléases à doigts de zinc (ZFN) et transcription nucléases effectrices activateur comme (Talens) peuvent être utilisés pour modifier le génome d'embryons de pré-implantation de souris en déclenchant à la fois la fin non homologue rejoindre (NHEJ) et la recombinaison homologue (RH) des voies. Ces progrès permettent la génération rapide de la souris avec des modifications génétiques précises.

Souris ingénierie des génomes Utilisation nucléases de créateurs

Utilisant un Cas9 préassemblé complexe ribonucléoprotéique (RNP) est une méthode puissante pour l’édition de génome précis et efficace. Ici, nous mettons en évidence son utilité dans un large éventail de cellules et des organismes, y compris des cellules humaines primaires et les deux classiques et de nouveaux organismes modèles.

Génome améliorée d’édition avec Cas9 ribonucléoprotéique dans diverses cellules et des organismes

SAE-CRISPR est une technologie puissante à l’ingénieur les génomes complexes de plantes et d’animaux. Ici, nous détaillons un protocole pour modifier efficacement le génome humain endonucléases de Cas différents. Nous mettons en évidence les considérations importantes et des paramètres de conception pour optimiser l’efficacité édition.

Modification du génome dans des lignées de cellules mammifères à l’aide de CRISPR-Cas

Présenté ici est un protocole pour l'édition efficace de gène de ribonucleoprotein-mediated de CRISPR/Cas9 dans les cellules mammifères utilisant l'électroporation de tube.

CRISPR/Cas9 Ribonucleoprotein-mediated Precise Gene Editing by Tube Electroporation

Ce protocole décrit des techniques pour isoler les hépatocytes primaires de souris du foie et électroporer CRISPR-Cas9 sous forme de ribonucléoprotéines et d’ARNm afin de perturber un gène cible thérapeutique associé à une maladie métabolique héréditaire du foie. Les méthodes décrites se traduisent par une viabilité élevée et des niveaux élevés de modification des gènes après électroporation.

Administration médiée par électroporation de ribonucléoprotéines cas9 et d’ARNm dans des hépatocytes primaires de souris fraîchement isolés

Ici, nous décrivons une technique simple destinée à la génération efficace de souris génétiquement modifiées appelée CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). Cette méthode délivre des réactifs d’édition par électroporation dans des embryons avec une efficacité proche de 100%. Ce protocole est efficace pour les mutations ponctuelles, les petites insertions génomiques et les délétions dans les embryons de mammifères.

Édition efficace du génome de souris par électroporation CRISPR de zygotes

Ce protocole décrit la procédure d’édition du génome dans les macrophages dérivés de la moelle osseuse de souris à l’aide de complexes ribonucléoprotéiques Cas9-sgRNA assemblés in vitro et délivrés par électroporation.

Perturbation génique à haute efficacité dans les macrophages primaires dérivés de la moelle osseuse à l’aide de complexes d’ARNsg Cas9-sgRNA électroporés

Ce protocole présente une approche optimisée pour la production de modèles de rats génétiquement modifiés. Le virus adéno-associé (AAV) est utilisé pour fournir une matrice de réparation de l’ADN, et l’électroporation est utilisée pour délivrer des réactifs CRISPR-Cas9 afin de compléter le processus d’édition du génome dans un embryon à 2 cellules.

Édition du génome CRISPR-Cas9 d’embryons de rats à l’aide d’un virus adéno-associé (AAV) et d’une électroporation d’embryons à 2 cellules

Le protocole décrit les méthodes d’édition de l’épigénome basée sur CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) dans des lignées cellulaires humaines à l’aide de la transfection de l’ADN plasmidique et de la nucléofection de l’ARNm.

Édition de l’épigénome CRISPR dans des cellules humaines à l’aide de la transfection de l’ADN plasmidique et de la nucléofection de l’ARNm

L’efficacité de la méthode I-GONAD (Improved Genome Editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery) est comparable à celle de la micro-injection traditionnelle, qui nécessite la collecte de zygotes sur les femelles donneuses et le transfert à des femelles pseudo-enceintes. Ce protocole démontre son efficacité en introduisant des mutations induites par CRISPR/Cas9 dans le locus ROSA26 sur le chromosome 6.

Amélioration de l’édition du génome via une technique d’électroporation in vivo basée sur l’administration d’acides nucléiques oviductaux pour la génération de souris knock-out

Johns Hopkins University School of Medicine.  La délivrance des éditeurs génomiques sous forme d’ARN est un moyen particulièrement puissant de modifier les génomes des cellules et lignées cellulaires primaires de mammifères. L’objectif de ce protocole est de délivrer des éditeurs de génome sous forme d’ARNm dans les cellules et lignées cellulaires primaires de mammifères, suivis d’un séquençage ciblé Illumina et d’une analyse afin de quantifier les résultats...

Édition génomique dans les cellules primaires de mammifères via électroporation de l’ARN éditeur

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