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</ol>

<table><tbody><tr><td>&minus;80 &deg;C congélateur</td><td>Eppendorf New Brunswick</td><td>U700</td><td>Stockage des échantillons biologiques avant préparation.</td></tr><tr><td>Support vertical de 6" pour planches à pain, trous de 1/4"-20 (2 pièces)</td><td>Millipore Sigma</td><td>VB01A</td><td>Support mécanique et stabilisation de l'assemblage personnalisé de support de pulvérisateur</td></tr><tr><td>Acétonitrile</td><td>Fisher Chemical</td><td>240744</td><td>Solvant organique pour la préparation et l'optimisation de solvants compatibles avec DESI</td></tr><tr><td>Formiate d'ammonium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>401152500</td><td>Préparation du tampon de lavage en formiate d'ammonium isotonique pour le lavage cellulaire avant DESI&ndash;MSI</td></tr><tr><td>Microscope à champ clair</td><td>Fisher Scientific</td><td>12575252</td><td>Imagerie optique et visualisation des cellules adhérentes avant acquisition DESI&ndash;MSI</td></tr><tr><td>Colonne C18</td><td>Waters</td><td>186009259</td><td>Génération de contre-pression en ligne pour une formation stable de pulvérisation DESI en nano-débit</td></tr><tr><td>Fil de cuivre</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Connexion électrique et mise à la terre lors de la fabrication du support de pulvérisateur</td></tr><tr><td>Pulvérisateur DESI XS</td><td>Waters</td><td>700014033</td><td>Source d'ionisation DESI ambiante pour des expériences DESI&ndash;MSI sur cellule unique</td></tr><tr><td>Résine époxy</td><td>Devcon</td><td>20945</td><td>Stabilisation mécanique et fixation des composants personnalisés du support de pulvérisateur</td></tr><tr><td>Adaptateur de boîtier de source d'ions d'électrode FAIMS Pro</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>98100-20046</td><td>Modification et fabrication de l'interface DESI compatible Orbitrap personnalisée</td></tr><tr><td>Acide formique</td><td>Ward&rsquo;s Science</td><td>470301-120</td><td>Modificateur acide pour la préparation du solvant de pulvérisation DESI</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Fisher Chemical</td><td>A456-4 Optima</td><td>Solvant organique pour la préparation du solvant de pulvérisation DESI</td></tr><tr><td>Régulateur de gaz</td><td>Millipore Sigma</td><td>23831-U</td><td>Régulation de la pression du gaz de gaine en azote pendant le fonctionnement DESI</td></tr><tr><td>Lame de verre quadrillée</td><td>Ibidi</td><td>10817</td><td>Substrat de culture cellulaire et référence positionnelle pour l'enregistrement d'image optique à MS</td></tr><tr><td>Fil de mise à la terre</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Connexion de mise à la terre électrique pour le pulvérisateur DESI et l'assemblage d'interface</td></tr><tr><td>Incubateur</td><td>HeraCell</td><td>51026282</td><td>Maintien des cultures de cellules mammifères dans des conditions de température et de CO2 contrôlées</td></tr><tr><td>Eau de qualité LC/MS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>W6500</td><td>Préparation du tampon de lavage en formiate d'ammonium et du solvant de pulvérisation DESI</td></tr><tr><td>Plateforme METASPACE</td><td>METASPACE</td><td>https://metaspace2020.eu</td><td>Visualisation d'images MS basée sur le cloud et analyse de données de métabolomique spatiale</td></tr><tr><td>Interface FAIMS modifiée</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>98100-20046</td><td>Interface personnalisée pour le couplage du pulvérisateur DESI avec les spectromètres de masse Orbitrap</td></tr><tr><td>Plateforme XYZ motorisée</td><td>Newport Corporation</td><td>CONEX-MFACC</td><td>Mouvement contrôlé de la plateforme raster pendant l'acquisition DESI&ndash;MSI</td></tr><tr><td>Kit de détection de mycoplasmes MycoAlert PLUS</td><td>Lonza</td><td>LT07-703</td><td>Surveillance de routine de la contamination par les mycoplasmes dans les cellules cultivées</td></tr><tr><td>Système de nano-chromatographie liquide</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>5200.0355</td><td>Système de distribution de solvant en nano-débit pour la génération de pulvérisation DESI</td></tr><tr><td>Planche optique</td><td>Thorlabs</td><td>MB1012</td><td>Plateforme de support mécanique pour le pulvérisateur DESI et l'assemblage d'interface modifié</td></tr><tr><td>Spectromètre de masse Orbitrap Fusion Lumos</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>UVPD</td><td>Spectromètre de masse Orbitrap haute résolution pour l'acquisition de données DESI&ndash;MSI</td></tr><tr><td>Tuyaux PEEK</td><td>IDEX</td><td>1535</td><td>Connexion de la ligne de solvant entre le système nano-LC et le pulvérisateur DESI</td></tr><tr><td>Penicilline-streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Supplément d'antibiotiques pour le milieu de culture cellulaire mammifère</td></tr><tr><td>Tampon de phosphate (PBS)</td><td>VWR</td><td>0780-50L</td><td>Solution de lavage pour les cellules cultivées pendant le passage</td></tr><tr><td>Milieu RPMI-1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>Milieu de culture cellulaire mammifère pour le maintien des cellules OVCAR-8</td></tr><tr><td>Logiciel de contrôle de la plateforme</td><td>Lasken Group</td><td>Version 6</td><td>Contrôle logiciel du balayage raster, du mouvement de la plateforme et des paramètres d'acquisition d'images</td></tr><tr><td>Tuyaux en acier inoxydable</td><td>MicroGroup</td><td>316H16H</td><td>Tuyaux de transfert d'ions fabriqués sur mesure (1/16" OD, 0,033" ID) pour l'intégration de l'interface Orbitrap</td></tr><tr><td>Seringue, 250 &micro;L</td><td>Hamilton</td><td>1725LTN250UL</td><td>Chargement de solvant et distribution de solvant en nano-débit</td></tr><tr><td>Sérum bovin fœtal synthétique (FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH3006603</td><td>Supplément sérique pour la préparation du milieu de culture cellulaire mammifère complet</td></tr><tr><td>Compteur de cellules automatisé TC20</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>1450102EDU</td><td>Comptage automatisé des cellules cultivées avant semis sur lames</td></tr><tr><td>Plat de culture tissulaire, 100 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012924</td><td>Expansion et maintenance des cultures cellulaires OVCAR-8 adhérentes</td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200-072</td><td>Détachement enzymatique des cellules adhérentes pendant le passage</td></tr><tr><td>Résine à durcissement UV</td><td>Prime Dental</td><td>6.03</td><td>Fabrication et stabilisation des composants personnalisés du support de pulvérisateur DESI</td></tr><tr><td>Logiciel Xcalibur</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4.7</td><td>Contrôle de l'instrument, configuration de la méthode Orbitrap et acquisition de données spectrales de masse</td></tr></tbody></table>

imagerie par spectrométrie de masse à cellule unique utilisant l’ionisation par électrospray par désorption couplée aux spectromètres de masse orbitrap

Single-Cell Mass Spectrometry Imaging Using Desorption Electrospray Ionization Coupled To Orbitrap Mass Spectrometers

Imagerie par spectrométrie de masse à cellule unique utilisant l’ionisation par électrospray par désorption couplée aux spectromètres de masse Orbitrap

Desorption electrospray ionization&#8211;mass spectrometry imaging (DESI&#8211;MSI) enables ambient, matrix-free molecular imaging with minimal sample ...

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Research

Recherche

JoVE Journal

Chemistry

Chimie

Désorption ionisation électrospray spectrométrie de masse (DESI-MS) est une méthode ambiant par lequel des échantillons, y compris les tissus biologiques, peuvent être imagées avec une préparation minimale de l'échantillon. Par rastering l'échantillon en dessous de la sonde d'ionisation, cette technique spray à base offre une résolution spatiale suffisante pour discerner les caractéristiques moléculaires d'intérêt au sein des coupes de tissus.

Imagerie des tissus biologiques par désorption ionisation électrospray spectrométrie de masse

Des lignées cellulaires de cancer immortalisées peuvent être cultivées sous forme de cultures de cellules 3D, un modèle précieux pour la recherche biologique. Ce protocole décrit imagerie par spectrométrie de masse des cultures de cellules 3D, y compris l'amélioration de la plate-forme de préparation de l'échantillon. L'objectif de ce protocole est de demander aux utilisateurs de préparer des cultures cellulaires 3D pour la masse analyse de l'imagerie par spectrométrie.

Exemple Stratégies Préparation de Spectrométrie de Masse Imagerie de culture cellulaire 3D Modèles

Ici, nous présentons des protocoles pour effectuer à la fois l’imagerie par spectrométrie de masse ambiante (MSI) des tissus et l’analyse MS à cellule unique vivante (SCMS) in situ à l’aide de la sonde unique, qui est un dispositif multifonctionnel miniaturisé pour l’analyse MS.

Applications de la mono-sonde: Mass Spectrometry Imaging et simple Cellule d&#39;analyse dans les conditions ambiantes

Une source d’imagerie par spectrométrie de masse (MSI) fonctionnant à pression atmosphérique a été développée en couplant la désorption laser dans l’infrarouge moyen et la post-ionisation par électronébulisation. Une matrice de glace exogène a été utilisée comme matrice d’absorption d’énergie pour faciliter la désorption résonnante du matériau lié aux tissus. Ce manuscrit fournit un protocole étape par étape pour la réalisation de l’IR-MALDESI MSI de souris néonatale du corps entier.

Corps entier Spectrométrie de masse d&#39;imagerie par infrarouge laser assistée par matrice désorption Electrospray Ionisation (IR-MALDESI)

Caractérisation du protéome de lits microvasculaires oculaires est essentielle pour une compréhension approfondie des nombreuses pathologies oculaires chez les humains. Cette étude démontre une méthode efficace, rapide et robuste pour l’extraction de la protéine et préparation des échantillons de petits vaisseaux sanguins qui emploient les artères ciliaires postérieures courtes porcines comme navires de modèle pour l’analyse basée sur la spectrométrie de masse protéomique.

Préparation des échantillons pour l’analyse protéomique basée sur la spectrométrie de masse des microvaisseaux oculaires

Une plate-forme intégrée de manipulation cellulaire est développée pour une utilisation en conjonction avec une configuration de spectrométrie de masse à sonde unique pour l'analyse en ligne des cellules de suspension individuelles dans des conditions ambiantes.

Plateforme intégrée de manipulation cellulaire couplée à la sonde unique pour l'analyse de spectrométrie de masse des médicaments et des métabolites dans les cellules de suspension unique

Cet article introduit des méthodes de préparation d’échantillons pour une méthode d’analyse unique en temps réel basée sur la spectrométrie de masse ambiante. Cette méthode nous permet d’effectuer une analyse en temps réel des molécules biologiques in vivo sans aucun prétraitement spécial.

Préparation d’échantillons pour la spectrométrie de masse d’ionisation de l’électrospray de sonde

La spectrométrie de mobilité ionique (IMS) est un complément intéressant à la spectrométrie de masse pour la caractérisation des biomolécules, notamment parce qu’elle est sensible à l’isomérisme. Ce protocole décrit une expérience IMS en tandem (IMS/IMS), qui permet l’isolement d’une molécule et la génération des profils de mobilité de ses fragments.

Utilisation d’un spectromètre de mobilité ionique cyclique pour les expériences de mobilité ionique en tandem

Nous décrivons ici une caractérisation protéomique basée sur la spectrométrie de masse de lignées cellulaires avec des destins tissulaires connus chez l’embryon vertébré Xenopus laevis .

Protéomique de spectrométrie de masse guidée par lignée cellulaire dans l’embryon (grenouille) en développement

Ce protocole décrit l’utilisation de la microMS pour la spectrométrie de masse monocellulaire MALDI-2 guidée par fluorescence, permettant un profilage moléculaire amélioré des cellules neuronales primaires du rat.

Désorption/ionisation laser assistée par matrice guidée par fluorescence avec spectrométrie de masse de postionisation induite par laser de cellules neurales de rat individuelles

Ce protocole vise à préserver les métabolites cellulaires pour la spectrométrie de masse sur cellule unique (SCMS) en combinant le lavage en solution de sel volatil, l’extinction rapide de l’azote liquide, la lyophilisation et le stockage à -8 °C. Il démontre que l’extinction de l’azote liquide est essentielle pour maintenir les profils de métabolites, tandis que le stockage prolongé au froid doit être minimisé pour prévenir les altérations métaboliques.

Préparation d’échantillons pour les études métabolomiques par spectrométrie de masse sur cellule unique : lavage, trempe, séchage et stockage combinés des cellules

University of Oklahoma.  Ce protocole décrit l’imagerie par spectrométrie de masse monocellulaire des cellules OVCAR-8 utilisant une ionisation par électropulvérisation par désorption couplée à des spectromètres de masse Orbitrap pour une analyse métabolomique à haute résolution spatiale.

Imagerie par spectrométrie de masse à cellule unique utilisant l’ionisation par électrospray par désorption couplée aux spectromètres de masse Orbitrap

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