Name: Principes de la recombinase site-spécifique (SSR) Technologie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-29T12:11:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Découvrez la technologie des recombinases site-spécifiques (SSR) et le système Cre/lox pour l'ingénierie génomique avancée. Cette méthode permet la mutagenèse conditionnelle et l'étude précise des fonctions géniques.

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principes de la recombinase site-spécifique (ssr) technologie

Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology

Recombinase site-spécifique (SSR) la technologie permet la manipulation de la structure génétique d&#39;explorer la fonction des gènes et est devenu un outil intégral de la biologie moléculaire. Recombinases site-spécifiques sont des protéines qui se lient à différentes séquences cibles d&#39;ADN. Le système Cre / lox a d&#39;abord été décrite dans les bactériophages durant les années 1980. Recombinase Cre est un type topoisomérase I qui catalyse recombinaison spécifique de site d&#39;ADN entre deux loxP (locus de X-over P1) sites. Le système Cre / lox ne nécessite aucune cofacteurs. Séquences LoxP contiennent distinctes sites de liaison pour les recombinases Cre qui entourent une séquence centrale directionnelle, où la recombinaison et le réarrangement a lieu. Lorsque les cellules contiennent des sites loxP et expriment la recombinase Cre, un événement de recombinaison se produit. ADN double-brin est coupé à deux sites loxP par la recombinase Cre, réarrangés, et ligaturé (&quot;ciseaux et de colle»). Produits de l&#39;événement de recombinaison dépendent de l&#39;orientation relative des séquences asymétriques. La technologie RSS est souvent utilisé comme un outil pour explorer la fonction des gènes. Ici, le gène d&#39;intérêt est flanquée de Cre cible loxP sites (&quot;floxés&quot;). Les animaux sont ensuite croisés avec des animaux exprimant la recombinase Cre sous le contrôle d&#39;un promoteur tissu-spécifique. Dans les tissus qui expriment la recombinase Cre il se lie à des séquences cibles et accises du gène floxés. Délétion du gène contrôlé permet à l&#39;enquête sur la fonction des gènes dans les tissus spécifiques et à des moments distincts. Analyse de la fonction génique utilisant la technologie SSR --- mutagenèse conditionnelle - a des avantages significatifs par rapport traditionnelle knock-outs, où une délétion du gène est fréquemment mortelle.

L&#39;avènement de la recombinase site-spécifique (SSR) de technologie et le système Cre / lox a conduit à de nombreuses avancées en biologie moléculaire, et s&#39;est avéré un outil précieux pour évaluer la fonction des gènes dans des animaux transgéniques. Cette interview aborde le mécanisme de recombinaison site spécifique par cyclisation recombinase (Cre) et comment l&#39;utilisation de cette enzyme a conduit à l&#39;élaboration de mutagenèse conditionnelle, qui a des avantages significatifs par rapport knock traditionnelle des stratégies.

Principes de la recombinase site-spécifique (SSR) Technologie

La technologie des recombinases sito-spécifiques (SSR) permet de manipuler la structure des gènes pour explorer leur fonction et est devenue un outil essentiel de la biologie moléculaire...

Bonjour, je m'appelle Frank Buchholz. Je suis chef d'équipe à l'Institut Max PL de biologie cellulaire moléculaire et de génétique. Et nos travaux sont entretenus.Nous avons deux aspects dans notre travail. L'un concerne le criblage de l'ARN I. L'autre concerne le développement de recombinases spécifiques de site pour une ingénierie génomique avancée.Mon parcours est celui d'un biologiste, d'un biologiste moléculaire, ayant étudié la biologie du développement. J'ai ensuite effectué un doctorat aux Laboratoires européens de biologie moléculaire à Heidelberg, puis un postdoctorat à San Francisco à l'UCSF avec Mike Bishop, sur des modèles animaux de leucémie. L'Institut Max Puncture ici à Dresde cherche à combiner, disons, au moins deux aspects différents, à savoir la biologie du développement et la biologie cellulaire, dans le but fondamental, je dirais même le thème de base, de comprendre comment les cellules forment les tissus.C’est essentiellement l’objectif global de l’institut ici à Ston. Nous travaillons donc sur deux domaines principalement. L’un de ces domaines concerne la réalisation de cribles d’ARNi, visant à identifier de nouvelles fonctions de gènes auparavant non caract

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Courant VIH-1 stratégies agir pour supprimer le cycle de vie du virus mais ne éradiquer efficacement l'infection. Ici, nous démontrons que l'ingénierie peut ADN recombinase efficacement accise intégré le VIH-1 proviral dans le génome des cellules infectées.

Interview: le VIH-1 Excision ADN proviral utilisant une recombinase Evolved

La protéine de nucléoïde mitochondrial de la levure, Mgm101, est une protéine de recombinaison Rad52 type qui forme des gros anneaux oligomères. Un protocole est décrit pour préparer Mgm101 recombinant soluble avec la protéine de liaison du maltose (MBP)-tagging stratégie couplée avec échange de cations et la chromatographie d'exclusion stérique.

Préparation de la recombinaison de protéines Mgm101 par la stratégie de marquage MBP basée

Les méthodologies de ciblage génique peuvent être utilisées pour générer des souris transgéniques avec des allèles knockout, knock-in et marqués.  Ici, nous décrivons une méthode améliorée de recombinaison chez E. coli, que nous appelons « sous-clonage plus insertion », qui peut être utilisée pour générer rapidement des vecteurs de ciblage génique personnalisés.

Sous-clonage plus insertion (SPI) - Un Recombineering nouveau procédé pour la construction rapide de ciblage de gène Vecteurs

Le minivecteur d’ADN linéaire fermé de manière covalente (LCC) (ministring d’ADN) est un vecteur de livraison de gènes non viral offrant une efficacité de transfection élevée et est pertinent pour toute application de livraison d’ADN. Le système de production est simple, rapide et évolutif in vivo. Le protocole suivant fournit des instructions visuelles étape par étape pour la production de mini-chaînes d’ADN.

Production de l&#39;ADN double brin Ministrings

Nous rapportons ici une méthode d'édition de gène rapide et efficace basée sur CREM dans le locus AAVS1 des cellules souches pluripotentes humaines (hPSCs) qui améliore les systèmes décrits précédemment. En utilisant cette technique, les lignes isogéniques peuvent être rapidement et de manière fiable générés pour des études comparatives appropriées, ce qui facilite la recherche en transgénèse médiée avec hPSCs.

Génération rapide et efficace des Recombinant pluripotentes humaines cellules souches par recombinase médiée Cassette Exchange dans le<em&gt; AAVS1</em&gt; Locus

Nous présentons ici un protocole détaillé pour identifier les événements de recombinaison homologue qui s’est produite dans les cellules souches embryonnaires de souris à l’aide de Southern et/ou PCR. Cette méthode est illustrée par la génération de modèles murins non musculaires myosine II remplacement génétique à l’aide traditionnelle embryonnaire sur les cellules souches homologue induite par la recombinaison technologie de ciblage.

Identification des événements de recombinaison homologue dans les cellules souches embryonnaires de souris à l’aide de transfert de Southern et la réaction en chaîne par polymérase

Des endonucleases de restriction avec une nouvelle spécificité de séquence peuvent être développées à partir d’enzymes reconnaissant une séquence partiellement dégénérée. Ici, nous fournissons un protocole détaillé que nous avons utilisé avec succès pour modifier la spécificité de la séquence de l’enzyme NlaIV. Les ingrédients clés du protocole sont la compartimentation in vitro de la réaction de transcription/traduction et la sélection de variantes avec de nouvelles spécificités séquences.

In Vitro Directed Evolution of a Restriction Endonuclease with More Stringent Specificity

La Biotinylation par illumination restreinte par localisation spécifique à AviTag (ALIBi) est une méthode novatrice activée par l’optogénétique développée pour marquer et purifier par affinité les populations subcellulaires de ribosomes pour le séquençage en aval et l’analyse protéomique.

Isolement des sous-populations de ribosomes subcellulaires basé sur la biotinylation enrichie par éclairage restreinte par peptide peptidique spécifique à la marque de recombinaison

Nous rapportons ici la génération de Tre recombinase travers dirigé, l'évolution moléculaire. Tre recombinase reconnaît une séquence cible pré-définie dans les séquences LTR du provirus VIH-1, résultant en l'excision et l'éradication du provirus de cellules humaines infectées. Alors qu'il était encore à ses balbutiements, l'évolution moléculaire dirigée va permettre la création d'enzymes personnalisées qui serviront d'outils moléculaires de la chirurgie et la médecine moléculaire.

Molecular Evolution de la recombinase Tre

Avant de tenter la chirurgie, un nouveau chirurgien doit avoir une formation de base en techniques chirurgicales et des concepts. Cet article présente les considérations chirurgicales de base avec un accent sur les rongeurs.

Principes de la chirurgie des rongeurs pour le nouveau chirurgien

Découvrez la technologie des recombinases site-spécifiques (SSR) et le système Cre/lox pour l'ingénierie génomique avancée. Cette méthode permet la mutagenèse conditionnelle et l'étude précise des fonctions géniques.

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