Name: Une méthode définie à base d’hydrogel pour générer des organoïdes mammaires humains tridimensionnels qui récapitulent la morphogenèse mammaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Découvrez une méthode à base d'hydrogel pour générer des organoïdes mammaires humains tridimensionnels qui reproduisent la morphogenèse mammaire. Ce protocole permet d'étudier le développement du sein et les mécanismes précoces de carcinogenèse.

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<table><tbody><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td>Tubes stériles pour le traitement des tissus et la centrifugation</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td>Dispositif de filtration pour la préparation de suspensions cellulaires</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer for low volumes</td><td>Bel-Art</td><td>136800040</td><td>Dispositif de filtration pour la préparation de suspensions cellulaires</td></tr><tr><td>Automated cell counter</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td>Dispositif utilisé pour compter les cellules et déterminer leur viabilité</td></tr><tr><td>Bovine pituitary extract</td><td>Thermo Scientific</td><td>13028014</td><td>Supplément pour les milieux de culture de cellules épithéliales</td></tr><tr><td>Cell counting slides</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td>Glissements à double chambre utilisés pour le comptage des cellules</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Centrifugeuse de table/s doit avoir une capacité de vitesse d'au moins 500 x g et l'accommodation de tubes de 15 mL et 1,5 mL. </td></tr><tr><td>Collagen I</td><td>Millipore Sigma</td><td>08-115</td><td>Protéine de matrice extracellulaire utilisée pour la formation d'hydrogel</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11088793001</td><td>Enzyme utilisé pour la dissociation des tissus</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Corning</td><td>976171</td><td>Vials stériles pour le stockage cryogénique des échantillons</td></tr><tr><td>Culture vessels (e.g., chamber slides, multiwell plates)</td><td>Corning</td><td>354104 354108 3603</td><td>Plateformes pour le dépôt d'hydrogel et la culture d'organoïdes.</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Millipore Sigma</td><td>317275</td><td>Cryoprotecteur utilisé dans le milieu de congélation</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>Enzyme utilisé pour la dissociation secondaire des tissus</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td>Enzyme utilisé pendant la dissociation cellulaire.</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437</td><td>Supplément de sérum utilisé dans les milieux de lavage et de neutralisation</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td>Composant de protéine de matrice extracellulaire</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td>Supplément pour les milieux de culture de cellules épithéliales</td></tr><tr><td>Human epidermal growth factor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Supplément pour les milieux de culture de cellules épithéliales</td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>Supplément pour les milieux de culture de cellules épithéliales</td></tr><tr><td>Hyaluronic acid</td><td>Millipore Sigma</td><td>385908</td><td>Composant de matrice extracellulaire pour la formulation d'hydrogel</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Enzyme utilisé pour la dissociation des tissus</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>3598</td><td>Dispositif utilisé pour l'incubation de la culture cellulaire</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Supplément pour les milieux de culture de cellules épithéliales</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>Composant de protéine de matrice extracellulaire</td></tr><tr><td>Mammary epithelial basal medium</td><td>Thermo Scientific</td><td>M171500</td><td>Milieu de croissance pour les cellules épithéliales</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>Tubes utilisés pour les réactions à petit volume</td></tr><tr><td>Orbital rotator</td><td>Thermo Scientific</td><td>400110</td><td>Rotateur utilisé pour la dispersion des tissus pendant la dissociation enzymatique</td></tr><tr><td>P1000 pipette</td><td>Gilson</td><td>P1000</td><td>Dispositif utilisé pour mélanger et transférer des volumes jusqu'à 1 000 &mu;L</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin</td><td>Thermo Scientific</td><td>15140122</td><td>Supplément d'antibiotique pour les milieux de culture de cellules épithéliales</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>Solution tampon utilisée pour le lavage et le rinçage</td></tr><tr><td>Precision balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>ML303E</td><td>Balance utilisée pour le pesage des tissus</td></tr><tr><td>Serological pipette</td><td>Nunc</td><td>170356N</td><td>Pipette utilisée pour la récolte des cellules épithéliales non adhérentes</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (1 N)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS261</td><td>Réactif utilisé pour la neutralisation du collagène</td></tr><tr><td>Sterile scalpels</td><td>Bard-Parker</td><td>372615</td><td>Outils utilisés pour la découpe mécanique des tissus</td></tr><tr><td>Trypan blue solution</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Colorant utilisé pour l'évaluation de la viabilité cellulaire</td></tr><tr><td>Trypsin (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Réactif enzymatique utilisé pour la dissociation cellulaire</td></tr><tr><td>Water bath (37 &deg;C)</td><td>VWR</td><td>10LA</td><td>Dispositif utilisé pour le décongélation contrôlée des échantillons</td></tr></tbody></table>

une méthode définie à base d’hydrogel pour générer des organoïdes mammaires humains tridimensionnels qui récapitulent la morphogenèse mammaire

A Defined Hydrogel-Based Method For Generating Three-Dimensional Human Breast Organoids That Recapitulate Mammary Morphogenesis

Une méthode définie à base d’hydrogel pour générer des organoïdes mammaires humains tridimensionnels qui récapitulent la morphogenèse mammaire

The development of physiologically relevant human model systems that recapitulate tissue architecture and cell-state dynamics remains a major challenge in ...

Notre recherche porte sur le développement mammaire humain et la lactation, l'organisation des tissus, les expositions environnementales et les facteurs génétiques menant à des modifications biologiques dans le cancer. Les modèles existants ne rendent pas fidèlement l'architecture du tissu mammaire humain, le chronométrage du développement ni le microenvironnement. Ce protocole comble le fossé entre les modèles en 2D et les modèles animaux au sein d'un système humain.Obtenez du tissu mammaire humain digéré cryopréservé pendant au moins 24 heures. Plongez immédiatement le tube cryogénique jusqu'au bouchon dans un bain d'eau à 37 degrés Celsius et décongelez rapidement pendant une minute afin de minimiser la mort cellulaire. Une fois complètement décongelé, transférez le contenu du tube cryogénique dans un tube conique de 15 millilitres contenant 10 millilitres de milieu de croissance des cellules épithéliales mammaires, ou MEGM, et centrifugez à 250g pendant cinq minutes.Après avoir éliminé le surnageant, resuspendre le culot dans 500 microlitres de solution d'enzyme de dissociation préalablement réchauffée à 37 degrés Celsius et contenant 0,25 % de trypsine. Transférer la suspensio

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Research

Recherche

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Nous décrivons un modèle de culture 3D de l’épithélium du sein humain qui convient à l’étude de l’action hormonale.

Un modèle 3D Culture hormone-sensibles de la glande mammaire humaine épithélium

Ce manuscrit décrit une technique à base de lithographie douce pour concevoir des tableaux uniformes en trois dimensions (3D) tissus épithéliaux de géométrie définie entourées par la matrice extracellulaire. Cette méthode se prête à une grande variété de types de cellules et dans des contextes expérimentaux et permet un criblage à haut débit de répétitions identiques.

Ingénierie en trois dimensions des tissus épithéliaux incorporés au sein de la matrice extracellulaire

Les organoïdes développés à partir de glandes mammaires de souris ont été irradiés et caractérisés pour évaluer les traits épithéliaux et les interactions avec les cellules immunitaires. Les organoïdes irradiés peuvent être utilisés pour mieux évaluer les interactions de cellules cellulaires qui peuvent conduire au recrutement de cellules tumorales dans le tissu normal irradié.

Croissance et caractérisation des organoïdes irradiés des glandes mammaires

Un protocole pour produire des organoïdes endométrials primaires humains qui se composent des cellules épithéliales et stromales et pour retenir des caractéristiques du tissu endométrial indigène est présenté. Ce protocole décrit des méthodes de l'acquisition utérine de tissu au traitement histologique des organoïdes endométrials.

Génération d'organoïdes endométrials primaires humains multicellulaires

La glande mammaire est une structure bilayered, comprenant des cellules épithéliales myoépitheliales et internes intérieures. Présenté est un protocole pour préparer les organoïdes à l’aide de la trypsinisation différentielle. Cette méthode efficace permet aux chercheurs de manipuler séparément ces deux types de cellules pour explorer les questions concernant leurs rôles dans la forme et la fonction des glandes mammaires.

Génération d’organoïdes mammaires mosaïques par trypsinisation différentielle

Le but de ce protocole est de bioimprimer directement les cellules épithéliales du sein sous forme de sphéroïdes multicellulaires sur les réseaux endothéliales pré-formés pour créer rapidement des modèles de co-culture mammaire-endothéliale 3D qui peuvent être utilisés pour des études de dépistage de médicaments.

Bioimpression directe de sphéroïdes mammaires multicellulaires 3D sur les réseaux endothéliales

Le but de ce protocole est d’expliquer et de démontrer le développement d’un modèle microfluidique tridimensionnel (3D) de tissu cardiaque humain fortement aligné, composé de cardiomyocytes dérivés de cellules souches co-cultivés avec des fibroblastes cardiaques (CFs) dans un hydrogel biomimétique et à base de collagène, pour des applications dans l’ingénierie tissulaire cardiaque, le criblage de drogue, et la modélisation de maladie.

Développement de tissu cardiaque humain organisé en 3D au sein d’une plate-forme microfluidique

Ce protocole traite d’une approche pour générer des organoïdes épithéliaux à partir de tissu mammaire primaire normal et tumoral par centrifugation différentielle. En outre, des instructions sont incluses pour la culture tridimensionnelle ainsi que l’imagerie immunofluorescente des organoïdes intégrés.

Génération et imagerie d’organoïdes épithéliaux de souris et humains à partir de tissus mammaires normaux et tumoraux sans passage

Ici, nous décrivons un protocole pour la formation d’organoïdes de thymus humains dérivés d’iPSC cultivés dans des hydrogels de fibrine 3D visant à soutenir la maturation des cellules épithéliales thymiques (TEC) et le maintien prolongé, ainsi que la thymopoïèse in vitro.

Formation d’organoïdes de thymus humain dans des hydrogels de fibrine tridimensionnels

Il existe un besoin critique de modèles de cancer 3D qui capturent la diaphonie hétérocellulaire pour étudier les métastases cancéreuses. Notre étude présente la génération d’épithélium stromal hétéromulticellulaire dans un environnement sans échafaudage qui peut être utilisé pour étudier l’invasion et les distributions spatiales cellulaires.

Cellules stromales hétéromulticellulaires dans des cultures 3D sans échafaudage de cellules cancéreuses épithéliales pour stimuler l’invasion

Découvrez une méthode à base d'hydrogel pour générer des organoïdes mammaires humains tridimensionnels qui reproduisent la morphogenèse mammaire. Ce protocole permet d'étudier le développement du sein et les mécanismes précoces de carcinogenèse.

Une méthode définie à base d’hydrogel pour générer des organoïdes mammaires humains tridimensionnels qui récapitulent la morphogenèse mammaire (Vidéo) | JoVE Journal

Une méthode définie à base d’hydrogel pour générer des organoïdes mammaires humains tridimensionnels qui récapitulent la morphogenèse mammaire

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