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</ol>

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01916-500G</td><td>Composant du milieu LB agar; 15 g/L.</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Lab1st&nbsp;</td><td>SV120H</td><td>Utilisé pour stériliser les instruments/matériaux ou valider un traitement aseptique.</td></tr><tr><td>Kit d'extraction d'ADN bactérien</td><td>Promocell</td><td>PK-MB708-206-100</td><td>Extraction d'ADN</td></tr><tr><td>Configuration de comptage/enregistrement des colonies</td><td>OCS</td><td>B079Y5W57N</td><td>Nécessaire pour enregistrer les UFC, les morphotypes et les différences de plaque; le manuscrit ne spécifie pas le compteur/modèle.</td></tr><tr><td>Fioles de cryoconservation</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z359033</td><td>Impliqué pour le stockage des stocks de glycérol à -80 & degré;C; pas nommé explicitement mais nécessaire pour l'étape de conservation.</td></tr><tr><td>Système d'enregistrement numérique des isolats</td><td>Non spécifié dans le manuscrit</td><td>Non applicable</td><td>Utilisé pour enregistrer les métadonnées des isolats: origine, réplicata, condition, traitement de stérilisation, date d'isolement, milieu de plaque, morphologie, statut d'identification.</td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>VWR</td><td>83813440</td><td>Utilisé pour préparer une solution d'éthanol à 70% v/v pour la stérilisation de la surface des semences.</td></tr><tr><td>Papier filtre</td><td>Fisher Scientific</td><td>11718772</td><td>Support de germination alternatif optionnel.</td></tr><tr><td>Forceps/Pince à épiler</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>930229</td><td>Utilisé pour transférer les graines et collecter les plantules germées.</td></tr><tr><td>Kit d'extraction d'ADN génomique</td><td>PromoCell</td><td>PK-MB708-206-100</td><td>Utilisé pour extraire l'ADN génomique à partir de cultures bactériennes purifiées; le kit/méthode exact n'est pas spécifié.</td></tr><tr><td>Glycérol, stérile 80%</td><td>VWR</td><td>24388364</td><td>Mélangé 1:1 v/v avec la culture liquide pour la préparation de cryostocks.</td></tr><tr><td>Hotte à flux laminaire Bio48</td><td>Faster</td><td>LAB-CAP-22</td><td>Requis pour la manipulation aseptique des semences, les transferts de stérilisation et la préparation de matériaux stériles.</td></tr><tr><td>Milieu LB agar</td><td>VWR</td><td>846495000</td><td>Milieu standard utilisé pour la culture comparative; par litre: 10 g de tryptone, 5 g d'extrait de levure, 10 g de NaCl, 15 g d'agar.</td></tr><tr><td>Tubes de microcentrifugation</td><td>Ratiolab</td><td>RATI5615000</td><td>Utilisés pour la stérilisation des semences et le traitement des échantillons.</td></tr><tr><td>Milieu MS</td><td>Sigma</td><td>M0404-10L</td><td>Mentionné comme support de germination stérile pour la germination axénique.</td></tr><tr><td>NZYTaq II 2&times; Master mix</td><td>Nzytech</td><td>MB35803</td><td>Mélange PCR pour l'amplification</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Parafilm/Merck</td><td>HS234526A</td><td>Utilisé pour sceller les plaques de germination tout en réduisant la contamination.</td></tr><tr><td>Garnitures de Pétri</td><td>Labbox</td><td>PDIP-E9N-500</td><td>Utilisé pour la configuration de germination, le placage et la manipulation des semences stérilisées.</td></tr><tr><td>Phytoagar</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>9002-18-0</td><td>Mentionné comme un support de germination stérile alternatif optionnel.</td></tr><tr><td>Ensemble de pipettes et embouts</td><td>Merck</td><td>EP3123000918-1EA</td><td>Utilisé pour retirer les solutions de stérilisation, le lavage, la dilution et le placage.</td></tr><tr><td>Milieu LB agar</td><td>HI-MEDIA</td><td>M1743-500G</td><td>Milieu supplémentaire optionnel pour les flux de travail culturomiques étendus.</td></tr><tr><td>Chlore de sodium, NaCl</td><td>Fisher Chemical</td><td>10040460</td><td>Utilisé pour préparer du NaCl stérile à 0,45% pour l'homogénéisation et les dilutions sérielles; également partie du milieu LB.</td></tr><tr><td>Hypochlorite de sodium</td><td>Carlo Erba</td><td>370323</td><td>Utilisé pour préparer une solution d'hypochlorite de sodium à 20% v/v pour la stérilisation de la surface des semences. Corrosif; nécessite du EPI.</td></tr><tr><td>Pistolets jetables stériles</td><td>Eppendorf</td><td>EP0030120973</td><td>Utilisé pour l'homogénéisation des semences sèches et des plantules germées.</td></tr><tr><td>Mixeur vortex</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901137</td><td>Utilisé pour resuspendre les cellules microbiennes à partir des homogénéisés.</td></tr></tbody></table>

isolement du microbiote associé aux graines de tomate par germination contrôlée et culture comparative

Isolation of Tomato Seed-Associated Microbiota Through Controlled Germination and Comparative Culturing

Isolement du microbiote associé aux graines de tomate par germination contrôlée et culture comparative

Surface sterilization is a critical yet frequently under-optimized step in studies aiming to isolate seed-associated microorganisms, as excessively harsh ...

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Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Source : Hassan, J. A., et al. Identification à haut débit de la résistance à Pseudomonas syringae pv. Tomate dans la tomate à l’aide d’un test d’inondation de semis. J. Vis. Exp. (2020).Cette vidéo fait la démonstration d’une méthode de dépistage de la résistance bactérienne dans différentes souches de tomates à l’aide de semis âgés de dix jours inoculés avec une suspension bactérienne. Il explique comment les bactéries envahissent les stomates, délivrent des protéines effectrices pour...

Essai d’inondation des semis pour le dépistage de la résistance bactérienne des tomates

Source : Nathoo, N., et al. Un système de co-culture hydroponique pour l’analyse simultanée et systématique des interactions moléculaires et de la signalisation plantes/microbes. J. Vis. Exp. (2017).Cette vidéo fait la démonstration d’un système de co-culture hydroponique pour étudier les interactions plantes-bactéries dans des conditions stériles. Les semis sont transférés dans un milieu de croissance stérile et acide, incubés et inspectés pour détecter toute contamination avant d’être...

Un système de co-culture pour étudier les réponses moléculaires des plantes hôtes et des bactéries en interaction

Les bactéries endophytes colonisent les tissus végétaux et favorisent leur croissance.Pour étudier leur impact sur la croissance des plants de tomates en stress salin, commencez par des semis stériles montrant des feuilles et des racines en développement.Immerger les racines du semis expérimental dans une suspension de bactéries endophytes ; Laissez le témoin non inoculé.Transférez les deux groupes dans un sol stérilisé pour éviter les interférences microbiennes externes et incubez dans une...

Amélioration de la tolérance au stress salin chez les plants de tomates grâce à la colonisation bactérienne endophyte

Source : Matthysse, A. G. Adhérence des bactéries aux surfaces végétales mesurée en laboratoire. J. Vis. Exp., (2018)Cette vidéo illustre un protocole pour mesurer la colonisation racinaire des semis de tomates par des bactéries pathogènes sauvages et déficientes en cellulose. Les décomptes viables de bactéries fortement adhérentes montrent une meilleure adhésion et formation de microcolonies par la souche sauvage, soulignant le rôle de la cellulose dans la colonisation racinaire stable.

Évaluation de la colonisation des racines de semis de tomates par une bactérie pathogène à l’aide de comptages cellulaires viables

Une méthode simple permettant de mesurer et de caractériser l’adhérence bactérienne aux plantes, en particulier les racines et les pousses, est décrit dans cet article.

Adhérence des bactéries à planter des Surfaces mesurées en laboratoire

Ici, nous présentons une méthode polyvalente pour la transformation des racines de tomate suivie de l’inoculation avec Ralstonia solanacearum pour effectuer l’analyse génétique simple pour l’étude de la maladie bactérienne de flétrir.

Transformation des racines de tomate suivie de l’inoculation avec Ralstonia Solanacearum pour l’analyse génétique directe de la maladie bactérienne de wilt

L’essai d’inondation de semis facilite le criblage rapide des adhésions de tomate sauvage pour la résistance à la bactérie de seringue de Pseudomonas. Cet essai, utilisé en conjonction avec l’essai de croissance bactérienne de semis, peut aider à caractériser davantage la résistance sous-jacente à la bactérie, et peut être employé pour dépister la cartographie des populations pour déterminer la base génétique de la résistance.

Identification à haut débit de la résistance aux seringues Pseudomonas pv. Tomate dans la tomate à l’aide de semis Flood Assay

Pour obtenir un insecte axenique, sa surface d’œuf est stérilisée et la larve éclose est ensuite élevée à l’aide de feuilles axeniques. Cette méthode fournit un moyen efficace pour la préparation d’insectes axeniques sans administrer d’antibiotiques ou développer un régime artificiel, qui peut également être appliqué à d’autres insectes mangeurs de feuilles.

Préparation et élevage d’insectes axeniques avec des semis de culture tissulaire pour les études d’interaction entre le microbiote hôte et intestinal du coléoptère

Ce protocole présente un résumé détaillé des stratégies pour inoculer les racines des plantes avec des microbes transmis par le sol. Exemple pour les champignons Verticillium longisporum et Verticillium dahliae, trois systèmes d’infection racinaire différents sont décrits. Les applications potentielles et les analyses en aval possibles sont mises en évidence, et les avantages ou les inconvénients sont discutés pour chaque système.

Stratégies d’inoculation pour infecter les racines des plantes avec des micro-organismes transmis par le sol

Ce protocole vise à fournir des procédures détaillées pour la collecte, la fixation et la conservation d’échantillons de plantes mycohétérotrophes, en appliquant différentes techniques de microscopie telles que la microscopie électronique à balayage et à transmission, la microscopie optique, confocale et à fluorescence pour étudier la colonisation fongique dans les tissus et les graines des plantes germées avec des champignons mycorhiziens.

Techniques de microscopie pour interpréter la colonisation fongique dans les tissus végétaux mycohétérotrophes et germination symbiotique des graines

La graine de tomate est un modèle important pour étudier la génétique et la biologie du développement pendant la reproduction des plantes. Ce protocole est utile pour éliminer les graines de tomates à différents stades de développement afin d’observer la structure embryonnaire plus fine.

Un protocole de défrichement efficace pour l’étude du développement des semences de tomates (Solanum lycopersicum L.)

iPlantMicro Lab..  Ce protocole combine la stérilisation standardisée de la surface des graines avec la germination contrôlée afin de permettre l’isolement reproductible du microbiote associé aux graines de tomate lors de la transition de la graine vers les semis. Cette approche favorise la récupération des micro-organismes cultivables sous-représentés dans les graines sèches et soutient des études comparatives culturomanes lors du développeme...

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