Name: Séparation électrophorétique de protéines (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Apprenez la séparation électrophorétique des protéines par PAGE pour l'analyse protéomique. Cette méthode permet de séparer les protéines selon leur taille et leur charge dans un gel de polyacrylamide.

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Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471142720/cp/cpmb/article/mb1002a/current/abstract" target="_blank">Current Protocols in Molecular Biology</a> .

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

séparation électrophorétique de protéines

Electrophoretic Separation of Proteins

L&#39;électrophorèse est utilisée pour séparer des mélanges complexes de protéines (par exemple, à partir des cellules, fractions subcellulaires, fractions de colonne, ou immunoprécipités), pour enquêter sur des compositions sous-unité, et de vérifier l&#39;homogénéité des échantillons de protéines. Il peut également servir à purifier des protéines pour des applications supplémentaires. En électrophorèse sur gel de polyacrylamide, les protéines migrent en réponse à un champ électrique à travers les pores dans une matrice de gel de polyacrylamide, la taille des pores décroît avec la concentration d&#39;acrylamide augmente. La combinaison de la taille des pores et chargé en protéines, la taille et la forme détermine le taux de migration de la protéine. Dans cette unité, la méthode standard Laemmli est décrite pour l&#39;électrophorèse sur gel discontinu dans des conditions dénaturantes, c&#39;est à dire, en présence de dodécylsulfate de sodium (SDS).

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode pour la séparation électrophorétique des protéines par électrophorèse sur gel de poly-acrylimide (PAGE).

Séparation électrophorétique de protéines

L'électrophorèse est utilisée pour séparer des mélanges complexes de protéines (par exemple, provenant de cellules, de fractions subcellulaires, de fractions de colonnes ou d'immunoprécipités), pour...

La séparation des protéines individuelles à partir de mélanges protéiques complexes peut être réalisée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide, également connue sous le nom de PAGE. Les protéines migrent en réponse à un champ électrique à travers les pores de la matrice du gel. La taille des pores du gel, ainsi que la charge, la taille et la forme de la protéine, déterminent la vitesse de migration de celle-ci. Dans cette vidéo, nous démontrerons une méthode de séparation électrophorétique des protéines.Bonjour, je suis le Dr. Bobul Chakravarti du Centre de protéomique de l'Institut de post-doctorat Keck des sciences de la vie appliquées. Aujourd'hui, je vais vous montrer une procédure pour réaliser une électrophorèse sur gel 1D. Commençons donc.Pour commencer, assemblez le sandwich de plaques en verre de l'appareil d'électrophorèse selon les instructions du fabricant, en utilisant deux plaques en verre propres et deux entretoises de 1,5 millimètre. Fixez ensuite fermement le sandwich de plaques en verre sur le support de coulée. Préparez ensuite la solution de gel de séparation, telle que décrite dans les protocoles actuels.Ajouter la quantité précisée de 10 % de persulfate d

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Cette vidéo présente une technique de séparation dénaturante à base de polyacrylamide pour les protéines. Cette technique permet d’identifier avant tout les protéines en fonction de leur poids moléculaire.

Électrophorèse sur gel de polyacrylamide de dodécylsulfate de sodium pour l’analyse des protéines : une technique pour séparer et visualiser les protéines en fonction de leur poids moléculaire

Cette vidéo décrit la PAGE multimérique pour séparer les complexes protéiques natifs des homogénats tissulaires. La technique est un hybride des techniques blue native-PAGE et SDS-PAGE. Les complexes séparés peuvent être caractérisés et étudiés pour leur rôle dans le fonctionnement cellulaire.

Multimer-PAGE pour la séparation de complexes de protéines natives : une technique de séparation hybride composée de Blue Native-PAGE et de SDS-PAGE pour séparer les protéines multimères intactes du lysat tissulaire

Dans cette vidéo, nous faisons la démonstration d’une méthode d’électrophorèse sur gel bidimensionnelle qui sépare des protéines individuelles d’un mélange complexe de protéines obtenues à partir de tissus tumoraux d’adénome hypophysaire non fonctionnel humain (NFPA). Les protéines sont séparées en fonction de leur charge électrique dans la première dimension et séparées en fonction des poids moléculaires dans la deuxième dimension.

Électrophorèse bidimensionnelle sur gel de polyacrylamide : technique de séparation pour l’analyse des protéines dans un mélange complexe de protéines basé sur la charge et la masse moléculaire

Ce protocole décrit comment préparer et réaliser l’électrophorèse de piégeage de fraction liquide éluée de gel natif clair (CN-GELFrEE), une technique de séparation native pour les assemblages biomoléculaires non covalents et les protéines d’échantillons hétérogènes qui est compatible avec diverses techniques d’analyse de protéines en aval.

CN-GELFrEE - Clear natif Gel-élué Fraction liquide Entrapment Electrophoresis

Après la séparation par des méthodes électrophorétiques des protéines dans un gel peut être détectée par des méthodes de coloration de plusieurs. Coloration des protéines au bleu de Coomassie, coloration à l'argent, SYPRO Orange, SYPRO Ruby sont démontrées dans cette vidéo.

Coloration protéines dans les gels

Impression par microcontact est largement utilisé pour les protéines et autres molécules tendance sur les surfaces de matériaux. Nous démontrons les étapes de base de ce processus, l'estampage modèles de la fibronectine sur le verre.

Impression par microcontact de protéines pour la biologie cellulaire

L'accouplement et la séparation des tétrades sont nécessaires pour l'analyse génétique...

L&#39;accouplement et la séparation des Tétrade Chlamydomonas reinhardtii Pour l&#39;analyse génétique

Rat MSC ont été isolés à partir des fémurs et tibias et ensuite enrichi par tri cellulaire magnétique. Cellules triées ont été confirmés pour l'expression des marqueurs de surface par cytométrie en flux. Ces cellules ont également été cultivées à une densité clonale pour former des colonies isolées et ensuite ces colonies ont été séparés par des cylindres de clonage.

L&#39;isolement et l&#39;enrichissement des cellules de rat souches mésenchymateuses (CSM) et de séparation des mono-colonie Dérivé MSC

Les protocoles décrivent les étapes essentielles pour obtenir des cristaux par diffraction de la qualité d'une protéine membranaire à partir de la reconstitution de la protéine dans une phase lipidique cubique (LCP), trouver les conditions initiales avec LCP-FRAP pré-cristallisation des essais, la mise en place des essais de cristallisation LCP et des cristaux de récolte .

La cristallisation des protéines membranaires dans des mésophases lipidique

Calmoduline (CaM) pull-down test est un moyen efficace pour étudier l'interaction de la CAM avec diverses protéines. Cette méthode utilise la CaM-sépharose perles pour une analyse efficace et spécifique des protéines liant la CaM. Cela fournit un outil important d'explorer de signalisation CAM dans la fonction cellulaire.

Pull-down des protéines se liant à la calmoduline

Apprenez la séparation électrophorétique des protéines par PAGE pour l'analyse protéomique. Cette méthode permet de séparer les protéines selon leur taille et leur charge dans un gel de polyacrylamide.

Séparation électrophorétique de protéines

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