Name: Obtention des oeufs de Xenopus laevis femelles (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: Apprenez à obtenir des œufs de Xenopus laevis pour la biologie cellulaire et le développement. Cette méthode montre l'induction de la ponte, la collecte et le tri des œufs de qualité.

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Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">Current Protocols in Cell Biology</a> .

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

obtention des oeufs de xenopus laevis femelles

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Les œufs de Xenopus laevis intacte, lysées, et / ou fractionnées sont utiles pour une grande variété d&#39;expériences. Ce protocole montre comment provoquer la ponte, la collecte et dejelly les oeufs, les oeufs et le tri pour éliminer les oeufs endommagés.

Obtention des oeufs de Xenopus laevis femelles

Les ovocytes de Xenopus laevis intacts, lysés et/ou fractionnés sont utiles pour une grande variété d'expériences. Ce protocole montre comment induire la ponte, ...

Les extraits d'œufs de Xip Labis sont utiles comme sources de matériel cytoplasmique et d'organites pour la reconstitution in vitro d'événements cellulaires tels que l'assemblage du noyau et l'importation de protéines nucléaires. Bien entendu, avant de pouvoir utiliser des extraits d'œufs, vous devez d'abord obtenir les œufs de grenouilles femelles. Bonjour, je m'appelle Marie Cross et je suis étudiante diplômée dans le laboratoire de la Dre Maureen Power, au Département de biologie cellulaire de l'Université Emory à Atlanta, en Géorgie.Aujourd'hui, nous allons vous montrer comment obtenir des œufs gélatineux D à partir de femelles adultes d'opus lavis. Cette procédure comprend les étapes suivantes : la stimulation des grenouilles pour la ponte d'œufs à l'aide de sérum de poulain gravide, l'induction de la ponte d'œufs par la gonadotrophine chorionique humaine, et le tri des œufs ou des cellules anormaux. Commençons donc.Pour produire des œufs, les grenouilles femelles matures sont d'abord primées avec une gonadotrophine de jument enceinte. Pour commencer la procédure de priming, préparez un réservoir contenant du chlorure de sodium à cent millimolaire pour y loger les grenouilles. Après l'injection, les grenouilles primées doivent être maintenues à une densité d'environ une grenouille par litre.La production optimale d'œufs est maintenue en gardant les grenouilles à 18 degrés Celsius. À l’aide d’une aiguille de 27 gauge fixée à une seringue d’un mil, injecter 0,5 mil de 200 unités par mil de gonadotrophine chorionique de jument gravide par voie sous-cutanée dans le sac lymphatique dorsal de la grenouille.Replacer les grenouilles adultes dans le réservoir contenant cent millimoles par litre de chlorure de sodium. Après deux à trois jours, induire la ponte en injectant aux grenouilles 0,5 ml d'une solution à cent unités par ml d'hormone chorionique humaine, administrée à nouveau par injection sous-cutanée dans la poche lymphatique dorsale.Après l'injection, placer chaque grenouille dans cinq litres d'une solution de chlorure de sodium à cent millimolaire. Il est préférable de placer chaque grenouille dans un récipient individuel, car la qualité des œufs varie d'une grenouille à l'autre. Environ 16 à 22 heures après l'injection d'hormone chorionique humaine, retirer la grenouille vers un aquarium d'eau propre et verser les œufs dans un bécher.Il est conseillé d'observer les grenouilles pendant un à deux jours afin de détecter tout signe d'infection au site d'injection. À ce stade, une couche gélatineuse transparente entoure chaque œuf, ce qui empêche les œufs de se toucher. Pour dégeler les œufs, rincez-les une fois dans une solution de L-cystéine à 2 %, pH 8, puis poursuivez l'incubation dans 100 mL de solution de L-cystéine à 2 % par grenouille pendant environ cinq minutes. À température ambiante, agitez doucement les œufs périodiquement après cinq minutes.Versez la solution de cystéine sur les œufs déjelés et rincez-les trois fois dans une solution de Ringer modifiée à 0,25 x. Pour éliminer les débris, versez les œufs dans une boîte de Pétri en verre de cent millimètres en travaillant sous un microscope stéréoscopique. Retirez les œufs abîmés de la boîte de Pétri à l’aide d’une pipette Pasteur.Les œufs matures de xip présentent une moitié supérieure fortement pigmentée et une moitié inférieure claire. Une petite tache blanche, de la taille d'un point, indiquant la maturation de l'ovocyte, doit être visible au centre de l'hémisphère fortement pigmenté de l'œuf mature. Un bon œuf est un œuf dont le pigment est uniformément réparti. Tout élément ne présentant pas cette tache blanche est un ovocyte et doit être éliminé. Tous les œufs qui sont blancs, agrandis ou non uniformément pigmentés doivent également être retirés. Un œuf particulièrement altéré apparaîtra comme une boule blanche gonflée avec une limite entre les hémisphères entièrement obscurcie. Lavez les œufs triés deux à trois fois en versant dessus du tampon de lyse pour œufs, puis en versant soigneusement le tampon, en minimisant le nombre d'œufs renversés.Les œufs peuvent maintenant être lysés et les extraits préparés. Nous venons de vous montrer comment obtenir des œufs et les débarrasser de leur gélatine à partir de femelles Xenopus laevis matures. N'hésitez pas à consulter nos deux autres vidéos qui vous montrent comment préparer des extraits bruts d'œufs ainsi que comment reconstituer in vitro l'assemblage nucléaire en utilisant des extraits d'œufs fractionnés.Voilà, c'est tout. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

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La fertilisation des Ovocytes de Xenopus En utilisant la méthode de transfert d&#39;hôte

Xenopus embryonnaire épithéliums sont un système modèle idéal pour étudier les comportements cellulaires tels que le développement de polarité et changer de forme lors de la morphogenèse épithéliale. Histologie classique d'échantillons fixe est de plus en plus complétée par des cellules vivantes imagerie confocale. Ici nous démontrons méthodes pour isoler les tissus de grenouilles et de visualiser en direct les cellules épithéliales et de leur cytosquelette des cellules vivantes en utilisant la...

Imagerie des cellules vivantes et de l&#39;analyse quantitative des cellules embryonnaires épithéliales Xenopus laevis</em

Xenopus oeuf extrait est un système modèle utile pour étudier le point de contrôle de dommages à l'ADN. Ce protocole est destiné à la préparation d'extraits d'œufs de xénope et de l'ADN réactifs induisant des dommages aux points de contrôle. Ces techniques sont adaptables à une variété d'approches endommageant l'ADN dans l'étude de la signalisation checkpoint dommages de l'ADN.

Etude de l&#39;ADN à l&#39;aide de Checkpoint dommages<em&gt; Xenopus</emExtraits d&#39;oeufs&gt;

Production d&#39;<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Œuf Extraits pour identifier les ARN associée aux microtubules

Un procédé est décrit pour l'analyse de la dégradation des protéines en utilisant des protéines radiomarquées et la luciférase-fusion dans Xenopus extrait d'oeufs et de son adaptation pour le criblage à haut débit pour les petites molécules modulateurs de la dégradation des protéines.

Reconstitution de β-caténine dégradation dans<em&gt; Xenopus</em&gt; Extrait des oeufs

Nous décrivons les méthodes de manipulation des ovocytes immatures de Xenopus laevis, de maturation in vitro des ovocytes en ovules et d’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes. Ce protocole permet la dégradation de certaines protéines maternelles et la surexpression des gènes d’intérêt lors de la fécondation, et est donc précieux pour étudier les rôles de facteurs spécifiques dans le développement embryonnaire précoce.

Manipulation et<em&gt; In Vitro</em&gt; Maturation du<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; ovocytes, Suivi par injection intracytoplasmique de spermatozoïdes, pour étudier le développement embryonnaire

Le contrôle de la synthèse des protéines se produit principalement à l’étape d’initiation de la traduction, dont les déficiences sont liées à divers troubles. Pour mieux comprendre leur étiologie, nous avons décrit ici un protocole utilisant des ovocytes de Xenopus laevis évaluant la traduction du transcrit mos en présence d’un mutant du facteur d’initiation de traduction eIF4G1.

Xenopus laevis comme un modèle pour identifier traduction Dépréciation

Les mécanismes de mise à l’échelle cellulaire et intracellulaire restent insaisissables. L’utilisation d’extraits d’embryons de xénope est devenue de plus en plus courante pour élucider les mécanismes de régulation de la taille des organites. Cette méthode décrit la préparation d’extraits d’embryons et un nouveau test de détartrage nucléaire permettant d’identifier les mécanismes de régulation de la taille nucléaire.

Un dosage cellulaire sans l&#39;aide<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryo Extraits d&#39;étudier les mécanismes de règlement des tailles nucléaire

Ce protocole démontre une méthode à base de fluorescence pour visualiser le système vasculaire et pour quantifier sa complexité chez Xenopus tropicalis . Les vaisseaux sanguins peuvent être imagés quelques minutes après l'injection d'un colorant fluorescent dans le coeur battant d'un embryon après des manipulations génétiques et / ou pharmacologiques pour étudier le développement cardiovasculaire in vivo .

Visualisation et analyse quantitative de l&#39;angiogenèse embryonnaire dans<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Nous décrivons une méthode de préparation et d’imagerie en direct d’extraits cytoplasmiques non dilués d’œufs de Xenopus laevis .

Xenopus laevis Préparation d’extrait d’oeuf et méthodes d’imagerie en direct pour visualiser l’organisation cytoplasmique dynamique

Lorsque les protéines précurseurs de la famille ß du facteur de croissance transformant sont exprimées ectopiquement dans les embryons de Xenopus laevis, elles se dimérisent, se clivent et sont sécrétées dans le blastocoele, qui commence à la fin de la blastula au stade précoce de gastrula. Nous décrivons une méthode d’aspiration des produits de clivage de la cavité blastocoèle pour l’analyse immunoblot.

Analyse du facteur de croissance transformant ß Produits de clivage de la famille sécrétés en blastocoèles d’embryons xenopus laevis

Apprenez à obtenir des œufs de Xenopus laevis pour la biologie cellulaire et le développement. Cette méthode montre l'induction de la ponte, la collecte et le tri des œufs de qualité.

Obtention des oeufs de Xenopus laevis femelles

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