Name: Préparation et fractionnement de Xenopus laevis oeufs Extraits (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-27T12:38:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Apprenez la préparation et le fractionnement d'extraits d'œufs de Xenopus laevis pour la biologie cellulaire. Cette méthode permet d'obtenir des fractions cytoplasmiques et membranaires pour l'étude de l'assemblage nucléaire in vitro.

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Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract ]">Current Protocols in Cell Biology</a> .

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

préparation et fractionnement de xenopus laevis oeufs extraits

Preparation and Fractionation of Xenopus laevis Egg Extracts

Brut et fractionné des extraits d&#39;œufs de Xénope peuvent être utilisés pour fournir les ingrédients pour reconstituer les processus cellulaires pour l&#39;analyse morphologique et biochimique. Lyse des œufs et centrifugation différentielle sont utilisés pour préparer l&#39;extrait brut qui à son tour utilisée pour préparer des extraits fractionnés et des préparations de membranes de lumière.

Préparation et fractionnement de Xenopus laevis oeufs Extraits

Des extraits d'œufs de Xenopus, bruts ou fractionnés, peuvent être utilisés pour fournir les composants nécessaires à la reconstitution de processus cellulaires à des fins morphologiques et biochimiques...

Dans une vidéo précédente, nous avons montré comment obtenir et débarrasser de leur gélatine les œufs de XUS labis matures. Les extraits bruts provenant de ces œufs constituent une source utile de matériel cytoplasmique et d'organites pour la reconstitution in vitro d'événements cellulaires tels que l'assemblage du noyau, l'importation de protéines nucléaires et la réplication de l'ADN. Bonjour, je m'appelle Marie Cross et je suis étudiante diplômée dans le laboratoire de la Dre Maureen Power, au Département de biologie cellulaire de l'Université Emory à Atlanta, en Géorgie.Aujourd'hui, nous allons vous montrer comment fractionner un extrait d'œuf en fractions cytoplasmique soluble et membranaire légère. Cette procédure comprend les étapes suivantes : lyser les œufs, recueillir les extraits bruts, fractionner les extraits bruts d'œuf, recueillir l'extrait cytoplasmique et recueillir la fraction membranaire légère de l'extrait d'œuf. Commençons donc.Commençons par lyser les œufs et recueillir des extraits bruts avant la lyse des œufs. Une pipette de transfert doit être fabriquée en cassant une pipette Pasteur, puis en insérant soigneusement l'extrémité cassée dans un embout de pipet

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Les œufs de Xenopus laevis intacte, lysées, et / ou fractionnées sont utiles pour une grande variété d'expériences. Ce protocole montre comment provoquer la ponte, la collecte et dejelly les oeufs, les oeufs et le tri pour éliminer les oeufs endommagés.

Obtention des oeufs de Xenopus laevis femelles

Assemblage membrane nucléaire est une étape essentielle dans le cycle de division cellulaire, ce processus peut être reproduit dans le tube à essai en combinant la chromatine des spermatozoïdes de Xenopus, le cytosol et des fractions membranaires de lumière. Remplissez noyaux sont formés, y compris les membranes nucléaires avec des complexes de pores, et ces noyaux reconstitués sont capables du processus normal de nucléaire.

In Vitro Assemblée nucléaire utilisant fractionnée extraits d&#39;œufs de Xénope

Xenopus embryonnaire épithéliums sont un système modèle idéal pour étudier les comportements cellulaires tels que le développement de polarité et changer de forme lors de la morphogenèse épithéliale. Histologie classique d'échantillons fixe est de plus en plus complétée par des cellules vivantes imagerie confocale. Ici nous démontrons méthodes pour isoler les tissus de grenouilles et de visualiser en direct les cellules épithéliales et de leur cytosquelette des cellules vivantes en utilisant la...

Imagerie des cellules vivantes et de l&#39;analyse quantitative des cellules embryonnaires épithéliales Xenopus laevis</em

Ce protocole vidéo montre une méthode pour générer des...

La production de transgéniques Xenopus laevis Intégration par médiation des enzymes de restriction et de la transplantation nucléaire

Xenopus oeuf extrait est un système modèle utile pour étudier le point de contrôle de dommages à l'ADN. Ce protocole est destiné à la préparation d'extraits d'œufs de xénope et de l'ADN réactifs induisant des dommages aux points de contrôle. Ces techniques sont adaptables à une variété d'approches endommageant l'ADN dans l'étude de la signalisation checkpoint dommages de l'ADN.

Etude de l&#39;ADN à l&#39;aide de Checkpoint dommages<em&gt; Xenopus</emExtraits d&#39;oeufs&gt;

Production d&#39;<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; Œuf Extraits pour identifier les ARN associée aux microtubules

Un procédé est décrit pour l'analyse de la dégradation des protéines en utilisant des protéines radiomarquées et la luciférase-fusion dans Xenopus extrait d'oeufs et de son adaptation pour le criblage à haut débit pour les petites molécules modulateurs de la dégradation des protéines.

Reconstitution de β-caténine dégradation dans<em&gt; Xenopus</em&gt; Extrait des oeufs

Les mécanismes moléculaires de la décondensation de la chromatine mitotique hautement compactée sont mal définis. Nous présentons un test acellulaire basé sur des amas de chromatine mitotique isolés de cellules HeLa et d’extrait d’œuf de Xenopus laevis qui reconstitue fidèlement le processus de décondensation in vitro.

A Cell Assay libre d&#39;étudier décondensation de chromatine à la fin de la mitose

Les mécanismes de mise à l’échelle cellulaire et intracellulaire restent insaisissables. L’utilisation d’extraits d’embryons de xénope est devenue de plus en plus courante pour élucider les mécanismes de régulation de la taille des organites. Cette méthode décrit la préparation d’extraits d’embryons et un nouveau test de détartrage nucléaire permettant d’identifier les mécanismes de régulation de la taille nucléaire.

Un dosage cellulaire sans l&#39;aide<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryo Extraits d&#39;étudier les mécanismes de règlement des tailles nucléaire

Nous présentons une méthode pour la production d’in vitro auto-entretenue oscillations mitotique au niveau unicellulaire en encapsulant les extraits d’oeufs de Xenopus laevis dans eau-dans-huile microémulsions.

Reconstitution du cycle cellulaire Oscillations Microemulsions des extraits d’oeufs acellulaire Xenopus

Nous décrivons une méthode de préparation et d’imagerie en direct d’extraits cytoplasmiques non dilués d’œufs de Xenopus laevis .

Xenopus laevis Préparation d’extrait d’oeuf et méthodes d’imagerie en direct pour visualiser l’organisation cytoplasmique dynamique

Apprenez la préparation et le fractionnement d'extraits d'œufs de Xenopus laevis pour la biologie cellulaire. Cette méthode permet d'obtenir des fractions cytoplasmiques et membranaires pour l'étude de l'assemblage nucléaire in vitro.

Préparation et fractionnement de Xenopus laevis oeufs Extraits

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