Olfactive tests comportementaux chez la souris adulte

Le système olfactif ou le sens de l'odorat de la souris est devenu un domaine de recherche de plus en plus populaire. Afin d'évaluer la sensibilité olfactive, on laisse une souris s'habituer à une cage sans litière, puis on l'expose à des morceaux de papier filtre contenant des concentrations croissantes d'un odorant. La durée pendant laquelle la souris explore le papier filtre est ensuite enregistrée.

Le test de préférence olfactive est effectué exactement de la même manière. Cependant, au lieu d'augmenter les concentrations d'odeur, on note la durée pendant laquelle la souris explore différents odorants. Bonjour, je suis Rochelle Witt du laboratoire de la Dre Rosalyn Siegel, du Département de neurobiologie de la faculté de médecine de Harvard.

Bonjour, je suis Jennifer Deno, également du laboratoire Siegel. Aujourd'hui, nous allons vous montrer deux procédures pour les tests olfactifs. Nous utilisons ces procédures dans notre laboratoire afin d'étudier la sensibilité olfactive et les préférences olfactives.

Commençons donc. Pour débuter la procédure de test de la sensibilité olfactive, procurez-vous quatre cages propres, toutes sans litière. Les cages doivent mesurer huit pouces de hauteur sur dix pouces de largeur et dix-huit pouces de longueur.

Alignez les quatre cages dans une hotte de sécurité biologique. Ensuite, installez des cloisons entre chaque arène à l’aide de papier filtre opaque. Puis placez une feuille de carton noir le long de la cloison finale afin qu’elle recouvre le côté et le fond de la cage.

Permettez à la lumière d'illuminer l'arène en recouvrant le dessus de la cage avec une plaque de plexiglas transparente. Commencez maintenant à habituer les sujets à cette procédure. Placez le premier sujet dans la première cage.

Après 15 minutes, déplacer le premier sujet dans la deuxième cage. Nettoyer la première cage avec du Quatra side tb. Ensuite, placer le deuxième sujet dans la première cage nettoyée.

Continuer ce processus avec les sujets suivants avant le test. Placer l'un des sujets dans la quatrième cage et les habituer pendant encore 15 minutes. En fin de compte, un sujet doit être habitué dans chacune des trois premières cages.

Nous sommes maintenant prêts à préparer les échantillons d'odeur. La préparation des échantillons d'odeur doit être effectuée par un chercheur différent, ignorant du sujet, des génotypes et/ou des conditions. Commencez la préparation des échantillons en découpant un nombre approprié de carrés de papier filtre de deux pouces sur deux pouces.

Ensuite, effectuez les dilutions appropriées de l'odeur pré-sélectionnée dans des tubes coniques. Tenez compte du fait que différents fonds génétiques de souris peuvent nécessiter des dilutions d'odeur différentes pour permettre une discrimination efficace entre un groupe témoin et un groupe expérimental. Étant donné cette observation, nous trouvons utile de déterminer empiriquement les dilutions d'odeur appropriées sur des sujets similaires au groupe témoin avant de procéder aux tests expérimentaux sur des souris naïves. Pour les échantillons hydrophobes tels que le beurre d'arachide, utilisez de l'huile comme solvant ; pour tous les autres, utilisez un autre solvant.

Utilisez un vortex à eau distillée pour vous assurer que les dilutions sont correctement mélangées. Ensuite, placez un dispositif d'enregistrement vidéo numérique à l'extrémité opposée de la hotte aspirante de manière à ce que toute l'extrémité de la cage soit nette. Effectuez une vidéo préliminaire pour vérifier que les réglages de la caméra sont adéquats.

Dans un cahier de laboratoire, noter l'ordre dans lequel les dilutions seront testées, en veillant à randomiser l'ordre à chaque essai. Noter également la portée et les numéros d'identification du sujet. Une fois que le sujet a été habitué pendant 15 minutes dans l'arène, commencer la préparation du premier essai.

Effectuez plusieurs aspirations et dispersions de la première dilution dans le tube conique avant de la pipeter sur un carré de papier filtre. La surface du papier filtre doit être recouverte à environ 85 %. Utilisez un essuie-tout Kim pour vous assurer que le papier filtre ne soit pas excessivement saturé.

À présent que le papier-filtre parfumé est préparé, nous sommes prêts à réaliser le premier essai de sensibilité olfactive. Pour commencer l'essai, démarrez l'enregistrement vidéo. Ensuite, placez le papier-filtre parfumé dans la cage à l'extrémité opposée à la position actuelle de l'animal.

Commencez le chronométrage. Après trois minutes, arrêtez l'enregistrement et retirez l'odeur. Ensuite, remettez le chronomètre en marche et préparez un deuxième échantillon odorant.

Après une minute, commencez l'enregistrement vidéo. Comme précédemment, placez l'échantillon odorant dans la cage à l'extrémité opposée de la position actuelle de l'animal. Répétez cette procédure pour chaque dilution centésimale et pour chaque sujet ; pensez à enregistrer le numéro du fichier vidéo pour chaque essai.

Maintenant que nous vous avons montré le test de sensibilité olfactive, passez au test de préférence olfactive. Pour le test de préférence olfactive, suivez la même procédure que celle décrite pour le test de sensibilité olfactive, à l'exception de deux légères modifications. Premièrement.

Plutôt que de préparer plusieurs dilutions d'une odeur préalablement sélectionnée, préparez à la fois une odeur attractive et une odeur aversive. Deuxièmement, au lieu d'enregistrer la dilution à tester, notez l'ordre des variations qui seront testées en randomisant l'ordre à chaque essai. Toutes les autres étapes du protocole sont identiques à celles du test olfactif, y compris l'habituation des sujets, le recours à un chercheur en aveugle, l'application de l'odeur sur du papier filtre et l'enregistrement vidéo chronométré de chaque essai.

Une fois le test de préférence olfactive terminé, procédez à l'évaluation des tests olfactifs. Après avoir visionné toutes les vidéos de sensibilité et de préférence olfactives, mesurez le temps total que le sujet a passé à explorer chaque dilution ou stimulus, afin d'assurer la cohérence. Un chercheur en insu doit analyser les vidéos pour effectuer cette analyse.

Il est utile de visionner d'abord la vidéo et de noter les éléments suivants. Lorsque le papier filtre est placé dans l'arène, lorsque la souris s'approche du papier filtre, lorsque la souris explore le papier filtre, et lorsque trois minutes se sont écoulées depuis le moment où le papier filtre a été initialement placé dans l'arène, savoir à quel moment se concentrer sur le comportement de la souris facilite une évaluation précise du temps total passé à l'exploration lors de l'analyse. À présent, examinez toute la vidéo pendant que vous la revoyez. Utilisez un chronomètre pour mesurer toutes les périodes d'exploration survenant dans les trois minutes suivant le placement du papier filtre dans l'arène.

La durée d'investigation est définie comme toute période pendant laquelle le nez de la souris se trouve à moins d'un millimètre du papier filtre. Il est important de ne pas inclure le temps où la souris est proche du papier filtre sans l'explorer activement. N'incluez pas les épisodes de mastication ou de léchage du papier, ni les périodes où la souris est assise sur le papier, dans le temps total d'exploration. Appliquez rigoureusement et de façon constante ces règles afin d'analyser précisément le comportement olfactif.

Après avoir examiné l'enregistrement vidéo, relevez le temps total passé à explorer le papier filtre, puis répétez l'analyse pour toutes les vidéos. Voici des résultats représentatifs d'un test olfactif. Ce premier graphique présente les résultats d'une séance d'entraînement à la sensibilité olfactive.

Chaque souris, provenant soit du groupe expérimental B soit du groupe témoin A, a été exposée à l'une des cinq dilutions différentes d'extrait de cannelle sur papier filtre pendant une séance de trois minutes. Le temps total passé à explorer le papier filtre a été évalué, et ce graphique présente les résultats d'une séance de test de préférence olfactive. Chaque souris a été exposée à chacun des différents parfums sur papier filtre pendant une séance de trois minutes.

Le temps total passé à explorer le papier filtre a été évalué. Nous venons de vous montrer comment tester les capacités olfactives chez la souris adulte en utilisant ces procédures ; il est important d'utiliser des souris naïves afin d'évaluer précisément les capacités olfactives, et non d'autres fonctions telles que l'apprentissage ou la mémoire. Voilà donc tout.

Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.