Olfactive tests comportementaux chez la souris adulte

Le système olfactif Rodin ou odorat est devenu un domaine de recherche de plus en plus populaire. Afin de tester la sensibilité olfactive, une souris est laissée s’habituer dans une cage sans litière et est ensuite exposée à des morceaux de papier filtre contenant des concentrations croissantes d’odorant. Le temps que la souris passe à enquêter sur le papier filtre est ensuite enregistré.

Le test de préférence olfactive se fait exactement de la même manière. Cependant, au lieu d’augmenter les concentrations d’odorisant, le temps que la souris passe à enquêter sur différents odorants est noté. Bonjour, je suis Rochelle Witt du laboratoire du Dr Rosalyn Siegel au département de neurobiologie de la Harvard Medical School.

Bonjour, je m’appelle Jennifer Deno, je travaille également au Siegel Lab. Aujourd’hui, nous allons vous montrer deux procédures de tests olfactifs. Nous utilisons ces procédures dans notre laboratoire pour étudier la sensibilité olfactive et la préférence olfactive.

Alors commençons. Pour commencer la procédure de test de sensibilité olfactive, procurez-vous quatre cages propres, toutes sans litière. Les cages doivent mesurer huit pouces de haut sur 10 pouces de large sur 18 pouces de long.

Alignez les quatre cages dans une enceinte de biosécurité. Ensuite, installez des cloisons entre chaque arène à l’aide de papier filtre opaque. Placez ensuite un panneau d’affichage noir sur la cloison finale afin qu’il aligne le côté et le bas de la cage.

Laissez la lumière illuminer l’aréna en recouvrant le haut de la cage d’un morceau de plexiglas transparent. Commencez maintenant à habituer les sujets à faire cela. Placez le premier sujet dans la première cage.

Après 15 minutes, déplacez le premier sujet dans la deuxième cage. Nettoyez la première cage avec Quatra côté tb. Ensuite, placez le deuxième sujet dans la première cage nettoyée.

Poursuivez ce processus avec les sujets suivants avant le test. Placez l’un des sujets dans la quatrième cage et habituez-le pendant encore 15 minutes. En fin de compte, un sujet doit être habitué dans chacune des trois premières cages.

Nous sommes maintenant prêts à préparer les échantillons de parfums. Les échantillons d’odeur doivent être préparés par un chercheur différent qui ne connaît pas le sujet, les génotypes et/ou les conditions. Commencez la préparation de l’échantillon en préparant un nombre approprié de carrés de papier filtre de deux pouces sur deux.

Effectuez ensuite les dilutions appropriées du parfum présélectionné dans des tubes coniques. Gardez à l’esprit que des origines différentes de souris peuvent nécessiter une dilution différente du sens pour une discrimination efficace entre un groupe témoin et un groupe expérimental. En raison de cette observation, nous trouvons utile de dériver empiriquement des dilutions d’odeur appropriées sur des sujets similaires au groupe témoin avant de procéder aux tests expérimentaux sur des souris naïves. Pour les échantillons hydrophobes tels que le beurre de cacahuète, utilisez de l’huile comme solvant pour tous les autres.

Utilisez un vortex d’eau distillée pour vous assurer que les dilutions sont correctement mélangées. Ensuite, placez un appareil d’enregistrement vidéo numérique à l’extrémité de la hotte de sorte que toute l’extrémité de la cage soit nette. Prenez une vidéo préliminaire pour vous assurer que les paramètres de l’appareil photo sont adéquats.

Dans un cahier de laboratoire, notez l’ordre dans lequel les dilutions seront testées, en prenant soin de randomiser l’ordre dans chaque essai. Notez également la portée et les numéros d’identification du sujet. Une fois que le sujet s’est habitué pendant 15 minutes dans l’arène, commencez la préparation du premier essai.

Pipetez la première dilution de haut en bas dans le tube conique avant de la pipeter sur un carré de papier filtre. La surface du papier filtre doit être couverte à environ 85 % de manière optimale. Utilisez une lingette Kim pour vous assurer que le papier filtre n’est pas trop saturé.

Maintenant que le papier filtre parfumé est prêt, nous sommes prêts à réaliser le premier essai de sensibilité olfactive. Pour commencer l’essai, lancez l’enregistrement vidéo. Placez ensuite le papier filtre parfumé dans la cage à l’extrémité opposée de la position actuelle de l’animal.

Commencez le chronométrage. Au bout de trois minutes, arrêtez l’enregistrement et supprimez l’odeur. Ensuite, redémarrez la minuterie et préparez un deuxième échantillon de parfum.

Au bout d’une minute, lancez l’enregistrement vidéo. Comme précédemment, placez l’échantillon d’odeur dans la cage à l’extrémité opposée de la position actuelle de l’animal. Répétez cette procédure pour chaque dilution de centime et pour chaque sujet, n’oubliez pas d’enregistrer le numéro de fichier vidéo pour chaque essai.

Maintenant que nous vous avons montré les tests de sensibilité olfactive, passez à la préférence olfactive. Test. Pour les tests de préférence olfactive. Suivez la même procédure que celle décrite pour les tests de sensibilité olfactive, à l’exception de deux légères modifications. Un.

Plutôt que de préparer une dilution multiple d’un parfum présélectionné, préparez un parfum attrayant et un parfum aversif. Et deuxièmement, plutôt que d’enregistrer la dilution à tester, notez l’ordre des variables qui seront testées de manière aléatoire dans chaque essai. Toutes les autres étapes de la procédure sont identiques aux tests olfactifs, y compris l’habituation des sujets, l’utilisation d’un chercheur à l’aveugle, l’application de papier filtre et l’enregistrement vidéo chronométré de chaque essai.

Une fois le test de préférence olfactive terminé, procédez à la notation des tests olfactifs. Après avoir exigé toutes les vidéos de sensibilité et de préférence olfactives, notez le temps total que le sujet a passé à explorer chaque dilution ou envoyé pour la cohérence. Demandez au chercheur aveugle d’analyser les vidéos pour effectuer cette analyse.

Il est utile de prévisualiser d’abord la vidéo et de noter ce qui suit. Lorsque le papier filtre est placé dans l’arène, lorsque la souris s’approche du papier filtre, lorsque la souris examine le papier filtre et lorsque trois minutes se sont écoulées depuis le moment où le papier filtre a été initialement placé dans l’arène, savoir quand se concentrer sur le comportement de la souris facilite l’évaluation précise du temps total passé à explorer lors de l’examen maintenant, Examinez l’intégralité de la vidéo pendant que vous la regardez. Utilisez un chronomètre pour chronométrer toutes les enquêtes dans les trois minutes suivant la mise en place du papier filtre dans l’arène.

Le temps d’investigation est défini comme toute durée pendant laquelle le nez de la souris est à moins d’un millimètre du papier filtre, il est important de ne pas inclure le temps où la souris est à proximité du papier filtre mais ne l’étudie pas activement. N’incluez pas les épisodes de mastication et de léchage du papier, ainsi que les épisodes de position assise sur le papier dans le temps d’exploration total. Respectez scrupuleusement et systématiquement ces règles afin d’analyser avec précision le comportement olfactif.

Après avoir examiné l’enregistrement vidéo et passé le temps total consacré à l’examen du papier filtre, répétez l’analyse pour toutes les vidéos. Voici les résultats représentatifs des tests olfactifs. Ce premier graphique montre les résultats d’une séance d’entraînement à la sensibilité olfactive.

Chaque souris du groupe expérimental B ou du groupe témoin A a été exposée à l’une des cinq dilutions différentes d’extrait de cannelle sur du papier filtre pendant une séance de trois minutes. Le temps total passé à explorer le papier filtre a été évalué, et ce graphique montre les résultats d’une session de test de préférence olfactive. Chaque souris a été exposée à chacune des différentes odeurs sur du papier filtre pendant une session de trois minutes.

Le temps total consacré à l’exploration du papier filtre a été évalué. Nous venons de vous montrer comment tester les capacités olfactives chez la souris adulte lors de l’utilisation de ces procédures, il est important d’utiliser des souris naïves pour tester avec précision les capacités olfactives et non d’autres capacités telles que l’apprentissage et la mémoire. Donc c’est tout.

Merci d’avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.