הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
2.6K צפיות
⸱
30 באפריל 2023
מקור: Groh, N. et al. שיטות לחקר שינויים בצבירת חלבונים אינהרנטית עם הגיל ב- Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp.(2017).
RNAi הוא כלי גנטי רב עוצמה הזמין לחוקרי C. elegans. סרטון זה מציג שיטה לטיפול ביותר תולעים עם RNAi מאשר הזנת צלחות על ידי ניצול תנאי תרבית נוזלית.
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Groh et al, Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
1. תרבית נוזלית של בעלי חיים חסרי גונדה לאיסוף בעלי חיים צעירים וקשישים הנתונים ל-RNAi המכוון לגן מעניין
הערה: התגובה של גנים מסוימים ל-RNAi יכולה להיות תלוית טמפרטורה כפי שתואר קודם לכן. כחלופה ל-RNAi, גן מוטנטי יכול להיות משולב ברקע gon-2(-).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| בקבוק תרבות פרנבך | קורנינג | 4425-2XL | Pyrex, קיבולת 2,800 מ"ל, עם 3 כניסות baffle | כן |
| מכסה בורג ממברנה | שוט | 1E+06 | GL45 | כן |
| מיקסר מזין | VWR | 444-0148 | כן | |
| משפך מפריד | נלג'ין | 4300-1000 | תכולה: 1,000 מ"ל | לא |
| 1 מ"ל מזרק | BD פלסטיפק | 3E+05 | לא | |
| מחט אפורה, 27 G x 1/2 אינצ', 0.4 מ"מ x 13 מ"מ | BD מיקרולנס 3 | 3E+05 | לא | |
| מסנני ממברנה 0.025 מיקרומטר | מיליפור | VSWP04700 | לא | |
| רצועת pH | מצ'רי-נגל | 92110 | pH-תיקון 0-14 | לא |
| קוקטייל מעכב פרוטאז | רוש | 5E+09 | טבליות Mini EDTA שלמות | לא |
| אוקוקסינול-9 | אפליכם | A1388 | טריטון X-100 | לא |
| 4-חומצה מורפולינית-סולפונית (MES) | סיגמא-אולדריץ' | M1317 | לא | |
| נונילפנילפוליאתילן גליקול | אפליכם | A1694 | נונידט P40 (NP40) | לא |
| DNaseI | רוש | 5E+09 | רקומביננטי, ללא RNase | לא |
| RNaseA | פרומגה | A7973 | תמיסה | לא |
| סה"כ כתמים חלבונים | תרמופישר | S11791 | כתם חלבון Sypro Ruby | לא |
| סה"כ צביעת ג'ל חלבון | תרמופישר | S12001 | כתם ג'ל חלבון Sypro Ruby | לא |
| TCEP (תריס (2-קרבוקסיאתיל) פוספין הידרוכלוריד) | סרווה | 36970 | לא | |
| יודואצטמיד | סרווה | 26710 | לא | |
| אמוניומביקרבונט | סיגמא-אולדריץ' | 9830 | לא | |
| טריפסין מעובד בדרגת ריצוף | פרומגה | V5111 | לא | |
| תגים איזובריים לכימות יחסי ומוחלט | סייקס | 4E+06 | ערכת מולטיפלקס ריאגנטים iTRAQ | לא |
| צנטריפוגה Avanti J-26XP | בקמן קולטר | 4E+05 | כן | |
| אולטרה-צנטריפוגה Optima Max-XP | בקמן קולטר | 4E+05 | לא | |
| צנטריפוגה 5424R | אפנדורף | 5E+09 | כן | |
| צנטריפוגה 5702 | אפנדורף | 6E+09 | כן | |
| צנטריפוגה Megafuge 40R | תרמו סיינטיפיק | 8E+07 | לא | |
| רכז פלוס | אפנדורף | 5E+09 | מאייד צנטריפוגלי | לא |
| מיקרוסקופ סטריאו פלואורסצנטי M165 FC | לייקה | עם המטרה Planapo 2.0x | לא | |
| מיקרוסקופ דיסקציה | לייקה | Leica S6E | כן | |
| מיקרוסקופ בהגדלה גבוהה Zeiss Axio Observer Z1 | זיס | עם PlanAPOCHROMAT 20x objective ו- Zeiss Axio Cam MRm | לא | |
| תוכנה | לא | |||
| תוכנה לניתוח תמונות | ImageJ | לא | ||
| ניתוח נתוני ספקטרומטריית מסות | Protein Prospector | http://prospector.ucsf.edu/prospector/mshome.htm | לא | |
| זני E.coli | ||||
| OP50 | CGC | |||
| חיידקי RNAi | ||||
| L4440 | Julie Ahringer ספריית RNAi | |||
| C. elegans מוטנטים | ||||
| CF2253 | CGC, שם הזן: EJ1158 | גנוטיפ: gon-2(q388) | ||
| C. elegans transgenics | ||||
| DCD214 | המעבדה של דלה דוד ב-DZNE Tübingen | גנוטיפ: N2; uqIs24[Pmyo-2::tagrfp::p ab-1] | ||
| DCD215 | המעבדה של דלה דוד ב-DZNE Tübingen | גנוטיפ: daf-2(e1370) III; uqIs24[Pmyo-2::tagrfp::p ab-1] | ||
