בדיקת הטלת ביצים: שיטה לכימות התנהגות הטלת הביצים של C. elegans

Abstract

מקור: Lee, S. Y. and Kang, K. מדידת ההשפעה של כימיקלים על צמיחה ורבייה של Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2017).

C. התנהגות הטלת ביצים של elegans יכולה לספק מידע חשוב במחקרים התפתחותיים, פוריותיים ואנטומיים. סרטון זה מציג את השלבים החשובים של בדיקת הטלת ביצים ומציג ניסוי לדוגמה שבו תרופה נבדקת לרעילות רבייה.

Protocol

Lee and Kang, מדידת ההשפעה של כימיקלים על הצמיחה והרבייה של Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1. C. elegans בדיקת הטלת ביצים

1. יש לדגור על הביציות המסונכרנות לגיל על צלחת NGM המכילה DMSO או אטופוסיד במשך 64 שעות (לפני הלידה הראשונה) עד לשלב הבוגר הצעיר בטמפרטורה של 20°C.
   NOTE: אופציונלי להשתמש בתולעים מניסויי מדידת הצמיחה. נוח לבצע את מדידת הצמיחה ובדיקת הטלת הביצים יחד.
2. העבירו 5 תולעים בוגרות לצלחות NGM החדשות ללא כימיקלים (תנאי 1, טיפול כימי תוך פרק זמן מסוים, משלב הביצים לשלב הבוגר הצעיר) או לצלחת NGM חדשה המכילה את אותו טיפול מקדים כימי (תנאי 2, חשיפה מתמשכת של כימיקלים לאורך תקופת הניסוי הכוללת), ולאחר מכן דגרו עליהן במשך 24 שעות
   NOTE: מומלץ להכין רפליקטים באמצעות 3-5 צלחות NGM לכל טיפול; ניתן להשתמש ברפליקטים אלה לניתוח סטטיסטי.
3. מעבירים לצלחת הגז הטבעי החדשה כמתואר לעיל וסופרים את מספר הביצים מדי יום. ספרו את התולעים שזחלו, מתו ובקעו מבפנים.
4. חזור על שלבים אלה עד שהתולעים לא יטילו ביצים יותר, בדרך כלל תוך 5 ימים.
5. חשב את מספר הביצים המוטלות לכל תולעת מכל צלחת, וסכם ערכים אלה מדי יום במשך 5 ימים כדי לקבוע את המספר הכולל של ביצים שהוטלו.
   NOTE: לא לכלול את מספר התולעים שזחלו ובקעו פנימית מהחישוב.

Materials