ג. אלגנס דיסקציה של בלסטומיר: שיטה להסרת קליפת הביצה ולניתוק תאים עובריים

Abstract

מקור: Hsu, C. R., et al. In Vitro Reconstitution of Spatial Cell Contact Patterns with Isolated Caenorhabditis elegans, Embryo Blastomeres and Adhesive Polystyrene Beadsive.J. Vis. Exp.(2019).

סרטון זה מציג שיטה לבידוד בלסטומרים של C. elegans מעוברים מוקדמים. התאים המתקבלים מתאימים לתרבית תאים או לניסויים ex vivo.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Hsu et al, In Vitro Reconstitution of Spatial Cell Contact Patterns with Isolated Caenorhabditis elegans Embryo Blastomeres and Adhesive Polystyrene Beads, J. Vis. Exp.(2019).

1. בידוד של בלסטומר עובר
2. יש ללבוש כפפות ומעיל מעבדה כדי למנוע חיתוך ומגע עם תמיסת ההלבנה.
   1. החזק כל קצה של מיקרו-נימי (קיבולת; 10 μL) ביד ימין ושמאל.
   2. משכו את המיקרו-נימים לכיוון שני הקצוות כדי להפעיל מתח, והביאו את מרכז הנימים מעל מבער כדי ליצור שני נימים ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
מכלול צינור שאיפה	דראמונד	לבידוד הבלסטומרי.
זן Caenorhabditis elegans: N2, סוג בר	המרכז לגנטיקה Caenorhabditis	N2	הזן ששימש במחקר זה
זן Caenorhabditis elegans: KSG5, גנוטיפ: zuIs45; itIs37	בבית	KSG5	הזן ששימש במחקר זה
Mircopipets מכויל 10 μL	דראמונד	21-180-13	לבידוד הבלסטומרים
CD תרכיז שומנים	לייף טכנולוגיות	11905031	לבידוד הבלסטומרי. עבודה בתרבית הרקמה.
קלורוקס	קלורוקס	נ. א.	לבידוד הבלסטומרי. פתח בקבוק חדש כאשר הטיפול hypochlorite לא עובד טוב.
מחזיק כיסוי	בבית	נ.א.	לבידוד הבלסטומרי.
מיקרוסקופ ניתוח: Zeiss Stemi 508 עם מעמד M. מקור האור הוא LED מובנה. הגדלת העין היא פי 10.	קרל זיס	סטמי 508	לבידוד הבלסטומרי.
סרום בקר עוברי, Qualified One Shot, מקור קנדה	גיבקו	A3160701	לבידוד הבלסטומרי. עבודה בתרבית הרקמה.
שימוש כללי ומחטים היפודרמיות מדויקות לגלישה, 25 מד	ב.ד.	14-826AA	לבידוד הבלסטומרים
אינולין	אלפא עזר	AAA1842509	לבידוד הבלסטומרים
MEM (100x)	גיבקו	11120052	לבידוד הבלסטומרי.
Multitest Slide 10 Well	MP Biomedicals	ICN6041805	לבידוד הבלסטומרים
פניצילין-סטרפטומיצין (10,000 U/mL)	גיבקו	15140148	לבידוד הבלסטומרי.
פוליוויניל פירולידון	פישר ביוריאגנטים	BP431-100	לבידוד הבלסטומרים
אשלגן כלורי	ביושופ	POC888	לבידוד הבלסטומרים
המדיום הסטרילי דרוזופילה של שניידר	גיבקו	21720024	לבידוד הבלסטומרי. עבודה בתרבית הרקמה.
נתרן כלורי	ביושופ	SOD001	לבידוד הבלסטומרים
תמיסת נתרן הידרוקסידי, 10 N	פישר כימיקלים	SS255-1	לבידוד הבלסטומרים
מסנני מזרק, PTFE, לא סטרילי	בסיקס	13100115	לבידוד הבלסטומרי.
צינורות מעבדה Tygon S3,, נוסחה E-3603, קוטר פנימי 3.175 מ"מ	Saint Gobain Performance פלסטיק	89403-862	לבידוד הבלסטומרי.
Tygon S3,, נוסחה E-3603, קוטר פנימי 6.35 מ"מ	Saint Gobain Performance פלסטיק	89403-854	לבידוד הבלסטומרי.