Method Article

בדיקת תגובה פוטומוטורית: שיטה למדידת התגובה ההתנהגותית של דגי זברה זחלים לשינוי פתאומי במצב התאורה

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Steele, W. B., et al. פרוטוקול ניסויי לבחינת פרופילי תגובה התנהגותית בדגי זחל: יישום לקפאין נוירו-סטימולנט. J. Vis. Exp.(2018).

סרטון זה מתאר את בדיקת התגובה הפוטומוטורית של דגי זברה וזחלי מיננו שמנים באמצעות תוכנת מעקב אוטומטית. הפרוטוקול מודד את התגובה ההתנהגותית של דגי הזחל בעקבות שינוי פתאומי בתנאי התאורה.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. כיול פרמטרים של מעקב וידאו

  1. לפני מדדים התנהגותיים, הגדר פרמטרים של תצפית וכיול בתוכנת מסלול הווידאו (ראה טבלת חומרים).
    1. מניחים צלחת באר בתא ההקלטה עם לפחות דג זחל אחד בבאר בודדת. השתמש בצלחת ובדגים המשויכים אליה כייצוגים כדי להגדיר פרמטרי כיול.
    2. בתוכנת רצועת הווידאו, לחץ על "קובץ | צור פרוטוקול", אשר יפתח תיבת דו-שיח "אשף יצירת פרוטוקולים". בשדה "ספירת מיקום", הזן את מספר בארות האנשים של צלחת הבאר ולאחר מכן לחץ על "אישור".
    3. בחלק העליון של המסך, לחץ על "תצוגה | מסך מלא", אשר יבקש מהמערכת להציג תצוגת מצלמה עילית של צלחת הבאר.
    4. לחץ על סמל "צייר אזורים", המופיע כשלוש צורות צבעוניות. מימין לאזור הצפייה בלוח הבאר, בחר את סמל העיגול בשדה שכותרתו "אזורים".
    5. השתמש בסמן כדי לתחום את אזור מעקב הווידאו המעגלי בבאר השמאלית העליונה של צלחת הבאר. בחר "סמן מימין למעלה" ולאחר מכן תאר היטב את אזור התצוגה בפינה השמאלית העליונה. לאחר מכן, בחר "סימן תחתון" כדי לתאר היטב את הפינה השמאלית התחתונה.
      הערה: לאחר שרטוט קו המתאר המעגלי, סביר להניח שיהיה צורך להתאים את מיקומו. כדי להתאים את מיקום המתאר, לחץ על "בחר" ולאחר מכן השתמש בסמן כדי להזיז את האזור המסומן. כמו כן, ניתן לשכפל קווי מתאר על ידי לחיצה על "העתק" ולאחר מכן "הדבק".
    6. לאחר שהוגדרו אזורי המעקב אחר בארות בפינה השמאלית העליונה, הימנית העליונה והימנית התחתונה, לחץ על "בנה" כדי לבקש מהתוכנה לתחום באופן אוטומטי את אזורי הצפייה של הבארות הנותרות.
    7. באזור שכותרתו "כיול", לחץ על "צייר קנה מידה". השתמש בסמן כדי לצייר קו אופקי לרוחב הצלחת. לאחר שרטוט הקו, תופיע תיבת דו-שיח בשם "מדידת כיול". הזן את אורך צלחת הבאר ולחץ על "אישור".
    8. צא ממנהל הציור על ידי לחיצה על הסמל "צייר אזורים".
    9. לחץ על סמל "אריחים". באמצעות הסמן, סמן את כל התיבות המופיעות במסך הצפייה כך שכל תיבה תהיה ירוקה.
      הערה: סמל האריחים מופיע כקבוצה של שישה ריבועים קטנים נפרדים
    10. "לחץ על תצוגה| מסך מלא". מימין לאזור הצפייה בלוחית, לחץ על "Bkg" בתיבה שכותרתה "סף זיהוי". השתמשו בסרגל התאמת הסף כדי להגדיר את סף זיהוי הפיקסלים. לאחר שנבחר סף זיהוי הפיקסלים המתאים, לחץ על "החל על קבוצה".
      הערה: פרוטוקול זה מגדיר את סף הזיהוי על 13 במצב שחור עבור תצפיות דגי זברה ועל 110 במצב שקוף עבור תצפיות של דגי שומן.
    11. בתיבה שכותרתה "סף תנועה", הזן את הפרמטרים הרצויים למעקב אחר מהירות תנועה. לאחר הגדרת פרמטרי מהירות, לחץ על "החל על קבוצה".
      הערה: פרוטוקול זה מגדיר תנועות קטנות/גדולות ב-20 מ"מ/שנייה ותנועות לא פעילות/קטנות ב-5 מ"מ/שנייה. בחירות אלה מתכנתות את התוכנה לעקוב אחר תנועת דגי הזחל בשלוש רמות מהירות שונות: לא פעיל (מקפיא) = <5 מ"מ לשנייה, קטן (שיוט) = 5-20 מ"מ לשנייה, וגדול (מתפוצץ) = >20 מ"מ לשנייה.
    12. לחץ על "פרמטרים | פרמטרים פרוטוקול" מהתפריט הנפתח. בתיבת הדו-שיח, בחר בכרטיסייה "זמן". הזן את זמן התצפית ואת זמן האינטגרציה. לאחר הזנת פרמטרים, לחץ על "אישור".
    13. כדי להגדיר את זמני תקופת האור / חושך ואת עוצמת האור עבור כל תקופת צילום, פתח את תיבת הדו-שיח הגדרות מנהל התקן האור על ידי בחירה באפשרות "נהיגה קלה" מהתפריט הנפתח "פרמטרים".
      הערה: ראה סרטון פרוטוקול להגדרת נקודות צילום מרובות של בהירות-כהות.
    14. לאחר הגדרת פרמטרי מעקב הווידאו, שמור את פרוטוקול התצפית.
      הערה: פרוטוקול זה בוחן את התנהגות הדגים במשך תקופה של 50 דקות הכוללת שלב התאקלמות של 10 דקות ואחריו 4 פאזות אור / חושך משתנות המורכבות משתי תקופות אור של 10 דקות ושתי תקופות חושך של 10 דקות. זמן האינטגרציה מוגדר למדידת התנהגות עבור כל דקה של הניסוי ההתנהגותי בן 50 הדקות.

2. תצפית על לוקומוטור דגי הזחל והתנהגות פוטומוטורית

  1. הניחו את צלחת הבאר המכילה דגי ניסוי בתא ההקלטה ההתנהגותי.
  2. בתוכנת מעקב הווידיאו, פתח את פרוטוקול המעקב שפותח בשלב הבא.
  3. במציג המעקב אחר וידאו, ודא שכל הזחלים נראים על מסך המחשב, שרק זחל בודד אחד נמצא בכל באר, ושבארות בודדות מיושרות בתוך אזורי התצפית שהוגדרו בשלבים 1.1.5 ו-1.1.6.
  4. לחץ על "ניסוי | ביצוע".
    הערה: המערכת תבקש מהמשתמש לספק שם ומיקום לשמירת נתוני התצפית.
  5. לאחר ציון השם ומיקום השמירה של נתוני התצפית, לחץ על הסמל "מספר תמונות חיות" כדי להדגיש את כל אזורי הצפייה שהוגדרו מראש
    הערה: סמל זה ממוקם בחלק העליון של מסך המחשב ומופיע כתיבה המחולקת לארבעה ריבועים קטנים יותר. לחיצה על אייקון זה תדגיש את כל אזורי הצפייה שהוגדרו מראש.
  6. סגור את הלוח של תא ההקלטה ולחץ על "רקע | התחל" על צג המחשב.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
צלחות 48 בארותפישר סיינטיפיק08-772-52תאי רישום התנהגותיים של זברי זחלים
צלחות 24 בארותVWR10062-896תאי הקלטה התנהגותיים של זחל fathead minnow

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Photomotor Response AssayZebrafish LarvaeBehavioral ResponseLighting ConditionVideo Tracking SoftwareWell PlateRecording ChamberFathead MinnowCaffeine ExposureAutomated Tracking

Related Articles