מבחן תגובת בריחה: שיטה לחקר התגובה של זחלי דגי זברה לגירויי מגע

תקציר

מקור: Sztal, T. E., et al. שימוש במבחני תגובה ותנועה מעוררי מגע כדי להעריך את ביצועי השרירים ותפקודם בדגי זברה. J. Vis. Exp.(2016)

סרטון זה מתאר את מבחן התגובה מעורר מגע, המודד את התגובה של זחל דג הזברה לגירויי מגע.

פרוטוקול

1. בדיקת תגובה מעוררת מגע

1. הכנת 2 עוברי dpf לבדיקת תגובה מעוררת מגע
   1. ודא שהשעה ביום שבה הבדיקה נערכת עקבית בין הניסויים, מכיוון שהפעילות יכולה להשתנות באופן דרמטי במהלך היום.
      הערה: יש לבצע את הניסוי באופן עיוור ולבצע את סדר הבדיקות באופן אקראי כדי למזער ממצאים ניסיוניים.
   2. הקצו לזני הדגים מספר, שאינו ידוע לאדם המבצע את הניסוי. לאחר מכן, שימוש בכלים מקוונים זמינים באופן חופשי ליצור רשימה אקראית המכתיבה את סדר הבדיקה.
   3. לפחות שעה לפני הבדיקה, dechorionate עוברים על ידי קריעת חור בכוריון ומשיכת הכוריון בעדינות לגזרים באמצעות זוג פינצטה עדינה. הסר את כל הפסולת מצלחת הפטרי לפני שתחזור לאינקובטור של 28 מעלות צלזיוס.
2. ביצוע בדיקת תגובה מעוררת מגע
   1. יש לחמם את השלב ל-28°C לפחות 15 דקות לפני תחילת הבדיקה.
      הערה: שלב זה מבוקר טמפרטורה ויישאר בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס למשך הבדיקה. הטמפרטורה תשפיע על הפעילות ולכן חשוב לשמור על טמפרטורה קבועה. אם שלב מחומם אינו זמין, יש לנטר את טמפרטורת המים וכל הניסויים צריכים להתבצע באותה טמפרטורה.
   2. הניחו צלחת פטרי מלאה בתווך עוברי (5 mM NaCl, 0.17mM KCl, 0.33 mM CaCl₂, 0.33 mM MgSO₄ במים) על במה מוארת והרכיבו את המצלמה המהירה מעל צלחת הפטרי.
   3. הפעל את תוכנת הקלטת מצלמת הווידאו (כגון Stream Pix 5, המתוארת כאן) ותחת הכרטיסייה "סביבת עבודה" בחר 1,000 פריימים לשנייה (1,000 fps) כמהירות הלכידה כדי להבטיח שפעולת השחייה המהירה של הדג מתועדת.
   4. בעבודה עם עובר אחד בכל פעם, הניחו את העובר במרכז צלחת הפטרי כשדג הזברה נראה בבירור בשדה הראייה.
      הערה: אם העובר שוחה משם לפני תחילת הניסוי, החליפו אותו באחר, שכן לכידה מחדש ומיקום של העובר עלולים לגרום לו לאבד את רגישותו לגירוי ותגובות פרץ חוזרות ונשנות עלולות לקדם חולשת שרירים במודלים מסוימים של מחלות.
   5. התחל להקליט על ידי לחיצה על כפתור "הקלט", ולהעביר את הגירוי mechanosensory לעובר על ידי נגיעה עדינה עם מחט קהה בחלק העליון של הראש.
   6. הפסק את ההקלטה לאחר שהעובר שחה מחוץ לשדה הראייה או חזר למנוחה.
      הערה: התאוצה מגיעה לשיאה בתוך 0.2 השניות הראשונות של תגובת הבריחה המתפרצת בעקבות הגירוי המכני. לכן, יש לוודא שלפחות במהלך 0.2 השניות הראשונות של תגובת הבריחה הדג נמצא בשדה הראייה. באמצעות התוכנה זרם Pix 5, הנתונים יישמרו באופן אוטומטי כקובץ וידאו .avi. ניתן להשתמש גם בתוכנות חלופיות ללכידת וידאו כגון Free Video Capture או Softonic, שתיהן זמינות להורדה באופן חופשי.
   7. החזירו את העובר לצלחת פטרי חדשה ובחרו עובר אחר לבדיקה. בצע בדיקות על מינימום של 15 דגים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צלחות פטרי 90 מ"מ	מוצרי מעבדה פסיפיק	PT S90001
פינצטה, דגם 8	ProSciTech	טלפון: 04-821
אינקובטור	תרמולין סיינטיפיק	TEI-43L
מצלמה במהירות גבוהה	באומר	HXC20
StreamPix5	נורפיקס		שלב 1.2.3
יחידת בקרת טמפרטורה	נקודת מבט
http://www.randomization.com	לא ישים		שלבים 1.1.2