מבחן העדפה אור-כהה: שיטה לחקר התנהגות הקשורה לחרדה בדגי זברה

תקציר

מקור: Holcombe, A., et al. שיטה חדשנית למתן תרופות לדגי זברה מרובים (Danio rerio) וכימות הגמילה. J. Vis. Exp.(2014)

הסרטון מתאר את בדיקת ההעדפה לאור-חושך כדי לחקור את ההתנהגות הקשורה לחרדה בדגי זברה בעקבות החשיפה לאתנול.

פרוטוקול

1. בדיקות התנהגותיות

1. השג זירה בהירה/כהה ברוחב 9.5 ס"מ על 55 ס"מ אורך ובעומק 9.5 ס"מ עם רצפה לבנה אטומה למים (איור 1B). הדביקו נייר לבן ושחור עמיד למים ללא השתקפות על הקירות הפנימיים של הזירה באמצעות סקוטש, כאשר חצי מהזירה מכוסה בלבן וחצי מכוסה בשחור. מלאו את הזירה לעומק של 5 ס"מ במי בית גידול בטמפרטורה של 25-28 מעלות צלזיוס. שמרו על טמפרטורה זו לאורך כל הבדיקה.
2. מזער גירויים חזותיים חיצוניים על ידי בניית מתחם תלת צדדי לבן עבור הזירה להיות ממוקם בו. ודא שבאזור הבדיקה יש תאורה עילית מפוזרת שאינה גורמת להשתקפויות על פני המים, אך בהירה מספיק עבור תוכנת מעקב התנועה, או כימות ידני פוסט-הוק מתמונות וידאו.
3. מקם את הזירה במתחם והגדר את פרמטרי ההקלטה וניתוח התנועה של תוכנת מעקב ההתנהגות. הגדר את משך הניסיון ל 5-15 דקות, בהתאם לשאלת המחקר.
   הערה: כאן, השתמשנו 5 דקות.
4. להעביר את קבוצת הדגים לבדיקה לאזור המחקר במיכל בית הגידול ולמקם אותם מחוץ למתחם הזירה. מקלימים את הדג במשך 10 דקות.
5. רשת בעדינות דג מהקבוצה המתאימה ומקם במרכז זירת האור/חושך, הקפד לשחרר את הדג כאשר הוא ממוקם במקביל לציר הארוך של הזירה כדי למנוע הטיית הדג לאזור הבהיר או החשוך.
6. התחל לתעד התנהגות מיד לאחר שחרור החיה. שימו לב לבעיות תוכנה כלשהן במעקב אחר הדגים או לדגים קופצים או קופאים. סובב את הזירה ב-180° לאחר שמחצית מהנבדקים נבדקו כדי למנוע בלבולים עקב הטיות הנובעות מאיזה קצה של הזירה מכוון לכיוון הקצה הפתוח של המתחם.
7. לאחר סיום המשפט, נטו בעדינות והוציאו את הדגים מהזירה למכל אחיזה או למכל בית גידול.

2. ניתוח

1. בחנו את הזמן המושקע באזורים בהירים לעומת חשוכים. עבור כל קבוצה וכל דג, קבל את הזמן היחסי שבילה באזורים הבהירים והכהים ונתח באמצעות מבחן t מדגם אחד (או מבחן דירוג חתום על ידי Wilcoxon לנתונים לא פרמטריים; הפרש מ (מחצית מזמן הניסוי הכולל) 150 שניות) כדי לקבוע אם קבוצות מעדיפות באופן משמעותי אזור אחד על פני השני.
2. כדי להשוות העדפות, חשב מדד העדפות על-ידי הפחתת הזמן המושקע באזור האור מהזמן שבילה באזור הכהה והשווה הבדלים בין קבוצות. ניתן להשתמש במבחני T כדי להשוות בין שתי קבוצות. השווה בין מספר קבוצות עם ניתוח חד-כיווני של שונות באמצעות מבחן HSD פוסט הוק של Tukey במידת הצורך (או מבחן Kruskal-Wallis עם מבחן ההשוואה המרובה של Dunn לאחר הוק עבור נתונים לא פרמטריים).
3. השווה מהירות, מספר מעברי אזור, התפתלויות וחוסר תנועה בין קבוצות. השתמש בניתוח חד-כיווני של שונות באמצעות מבחן HSD פוסט הוק של Tukey במידת הצורך (או מבחן Kruskal-Wallis עם מבחן ההשוואה המרובה של Dunn לאחר הוק לנתונים לא פרמטריים).

תוצאות

איור 1: נוהל העברה וזירת האור/חושך. תמונות אלה ממחישות את הליך ההעברה. (A) ראשית, הדגים נמצאים במיכל ההעברה (משמאל). מיכל מינון המכיל אתנול בתמונה (מימין). (ב-ג) העברת הדגים ממיכל ההעברה לתמיסת אתנול מחייבת את החוקר להרים את אינסרט ההשרצה ממיכל ההעברה אל מיכל תמיסת האתנול. (D) הזירה הבהירה/חשוכה כפי שהודגם נמדדה ברוחב 9.5 ס"מ ובעומק 9.5 ס"מ ובאורך 55 ס"מ. נעשה שימוש ברי...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
זירת אור/חושך	מנהג		יש לבנות לפי תיאור הנוהל. 9.5 ס"מ רוחב, 9.5 ס"מ עומק, 55 ס"מ אורך.
מערכת דיור עם שלושה ספסלי מדף	בתי גידול מימיים	לא ישים
מיכל השרצה 1.5 ליטר עם 400 מיקרומטר	בתי גידול מימיים	לא ישים
תוכנת מעקב תנועה Ethovision XT	נולדוס טכנולוגיית מידע
אתנול דגנים טהור	Luxco, INC	לא ישים