בדיקת תגובה אופטוקינטית: שיטה למדידת חדות ראייה בדגי זברה

תקציר

מקור: Cameron, D. J., et al. התגובה האופטוקינטית כמדד כמותי לחדות הראייה בדגי זברה. J. Vis. Exp.(2013)

סרטון זה מתאר את בדיקת התגובה האופטוקינטית בדגי זברה. הסרטון מודד את תנועות העיניים הרפלקסיביות בהתבסס על הגירוי החזותי הנע וקובע את חדות הראייה בדגי זברה.

פרוטוקול

1.תגובה אופטוקינטית (OKR)

1. בנו את מכשיר ההקלטה OKR המותאם אישית באמצעות תוף מסתובב בקוטר 14.5 ס"מ, מיקרוסקופ סטריאופוני עם הגדרות עוצמת אור מתכווננות (300-8,000 לוקס) ומחשב (איור 1A).
   1. חברו למיקרוסקופ מצלמה שתספק הזנה חיה על צג סמוך ותאפשר צילום והקלטה של תמונות.
   2. שלוט בתוף המסתובב באמצעות מיקרו-בקר המקושר למחשב אשר יתאים לבחירות מהירות וכיוון שונות.
2. מרדימים את הדג ב-0.016% טריקאין למשך 2-3 דקות ולאחר מכן מניחים את הדג על מצע קטן כשהעיניים והזימים תלויים מעבר לקצה.
3. מניחים ספוג/מגבת דקה על גוף הדג ונעצים 2-3 חתיכות קצף, בצורת הדג, מעל הדג כדי לשמור עליו משותק. הגבלת תנועת זנב הדג נמצאה כהיבט מכריע לאימוביליזציה מבלי לגרום לפגיעה בדג, והושגה בצורה הטובה ביותר באמצעות פיסת קצף שטוחה. (איור 1B)
4. מקם את הדג בתוך מיכל גלילי מלא מים, שמתאים לתוף המסתובב של מכשיר ההקלטה OKR. השתמשו במגנטים על המשטח כדי למקם את הדג זקוף, כשהעיניים נמצאות במרחק של כ-7.3 ס"מ מקצה התוף. הדג אמור להתאושש מההרדמה תוך מספר דקות - הנשימה הרגילה תתחדש ויש להבחין בתנועות עיניים אקראיות.
5. הניחו סורג בסיס של 0.07 מחזורים למעלה (cpd) לתוך התוף המסתובב והפעילו את פקדי המחשב כדי להתחיל בסיבוב ובלכידת וידאו (מהירות של 12 סל"ד שימשה למאמר זה, אך מהירויות של 8-16 סל"ד אמורות לתת תוצאות דומות).
6. לאחר ש-OKR ראשוני נוצר על ידי סורג הבסיס, השהה את הסיבוב לזמן קצר, והחלף את הסורג בסורג קטן יותר (תדירות מרחבית גבוהה יותר).
7. חזור על תהליך זה עד שלא ניתן יהיה עוד להפעיל אישור. בדוק שוב עם הסורג הקטן ביותר שגרם ל- OKR בעקבות גישת גרם מדרגות שונה ולאחר מכן חזור על הפעולה באמצעות הסורג שלא הצליח לעורר תגובה כדי לאמת את אובדן ה- OKR. ניתן לחזור על תהליך זה כדי לאמת תגובה אמיתית לסורג הקטן ביותר שניתן לזהות, אם הסורג הסופי השתנה ביחס לאירוע ההכחדה הראשון.
8. קבל מדידות חדות מונוקולרית על ידי הנחת אוקלודר פלסטיק שחור על הפסים הסמוכים לעין הנגדית. חזור על ההליך לעיל (שלבים 1.6-1.7).
9. השג את חדות העין הנגדית על ידי מיקום מחדש של הנסתר וחזרה על השלבים 1.6-1.7 שוב.
10. שימו לב למרחק של כל עין מהפסים במהלך הליך הבדיקה על ידי שימוש ברצועת מדידת הייחוס מתחת למכל הדגים, כך שניתן יהיה לחשב את מדדי החדות המדויקים בשלבים הבאים.

2. חישוב חדות הראייה

1. השג את חדות הראייה על-ידי חישוב ה- cpd: כאשר a הוא המרחק ממרכז העדשה לסורג, ו- h הוא אורכו של מחזור אחד של הסורג הקטן ביותר שבו נצפה OKR (איור 1C).
2. עבור מדידות חדות ראייה משולבות, נעשה שימוש בערך A הממוצע הן מהעין השמאלית והן מהעין הימנית.

תוצאות

איור 1. הקלטת OKR. א) מכשיר ה-OKR מורכב מתוף מסתובב ומיקרוסקופ בקוטר 14.5 ס"מ עם הגדרות עוצמת אור מתכווננות (300-8,000 לוקס). מצלמה מספקת הזנה חיה בצג סמוך. לתוף המסתובב יש הגדרות מהירות שונות הן בכיוון השעון והן נגד כיוון השעון, וגרגרי תדר מרחביים הניתנים להחלפה מוכנסים ומוסרים לפי הצורך. ב) הדגים מאובטחים וממוקמים במרכז התוף המסתובב. C) מחזורים לפי מעלה (cpd) מחושבים ב...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אור חלש במיוחד שחור לבן מצלמת אבטחה וידאו	מעגלי על	PC164CEX-2	ניתן להשתמש בכל מצלמה בתאורה חלשה
מיקרו-בקר Arduino Duemilanove	אדהפרי תעשיות		Arduino Uno תואם גם לתוכנת בקרת המהירות.
טריקאין מתאן-סולפונט	VWR	101107-950