הימנעות מדגי זברה ובדיקת תיגמוטקסיס: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לבחינת התנהגות הזחלים בתגובה לגירוי חזותי מרתיע

Abstract

מקור: Richendrfer, H., et al. ניתוחים התנהגותיים אוטומטיים בעלי תפוקה גבוהה בזחלי דגי זברה. J. Vis. Exp.(2013)

הסרטון מתאר את ההימנעות ובדיקת thigmotaxis של זחלי דגי זברה. הסרטון בוחן את התנהגותם של זחלי דגי זברה בתגובה לגירוי חזותי מרתיע.

Protocol

1. לכידת תמונות

1. ניתן להציב עד 20 זחלים בכל נתיב של הלוחות. בדרך כלל 5 זחלים בכל נתיב משמשים כדי להקל על המעקב המדויק ביותר אחר מהירות השחייה ולהפחית את מספר הזחלים הדרושים לכל ניסוי. ניתן למלא את הנתיבים במי ביצים עם או בלי תרופות או רעלים, בהתאם לניסוי. עם זאת, אין למלא נתיבים עד להנחתם בארונות ההדמיה; זה ימנע הצפה. לקבלת עקביות, הזחלים צריכים להיות תקופת התאקלמות של עשר דקות לאחר שהם ממוקמים בתבניות agarose ממוקם על גבי מסך המחשב הנייד. העברה יעילה של הזחלים מצלחת הפטרי לנתיב האגרוז תסייע להפחית את לחץ הזחלים. זה הכי קל כאשר הזחלים שוכנים במיכלים רדודים או צלחות פטרי.
2. ארונות ההדמיה כוללים מצלמה דיגיטלית של Canon המשמשת לצילום בהילוך מהיר ומחשב נייד. יש למקם את המצלמה בחלק העליון של הארון ולכוון אותה לתחתית הארון, שם יש למקם מחשב נייד עם מסך בגודל 15.6 אינץ' כשהמסך פונה כלפי מעלה (איור 1). ארבע צלחות צריכות להיות ממוקמות ביד ישירות על גבי מסך המחשב הנייד. בשלב זה ניתן לכסות את הנתיבים במי ביצה או בטיפול כימי כך שהוא יהיה מפולס עם החלק העליון של הנתיב (כדי להסיר צללים בשולי הנתיבים בתמונות).
3. מצגת PowerPoint משמשת כגירוי מרתיע עבור הזחלים. בעבר הוצגו כדורים אדומים נעים לזחלי דגי זברה ב-6 או 12 צלחות מרובות בארות. PowerPoint הנוכחי מתחיל עם רקע לבן ריק למשך 15 דקות, ולאחר מכן 15 דקות של פס אדום נע בחצי העליון של הלוח (איור 2). על מנת למנוע התחממות יתר של הזחלים, עדיף לרכוש מחשב נייד עם טמפרטורת מסך זה לא הולך מעל 28 מעלות צלזיוס. כדי למנוע אידוי של הנוזל בתוך נתיבי האגרוז, זמן ההדמיה המקסימלי צריך להישמר מתחת לשעה.
4. המצלמה הדיגיטלית צריכה להיות מתוכנתת לצילום בהילוך מהיר, לצלם כל 6 שניות ובסך הכל 300 תמונות לכל ניסוי. עם זאת, ניתן להתאים את התדירות והאורך בהתאם לניסוי ולכימות התנהגותי. בעבר נעשה שימוש בזמני הדמיה מורחבים תוך שימוש במרווחים ארוכים יותר בין כל תמונה. ניתן להגדיר את המצלמה ברזולוציה נמוכה יותר לצילום במהירות וידאו (30 פריימים לשנייה). בעוד שהרזולוציה הנמוכה מגבילה את ההקלטות לצלחת מרובת בארות אחת, הקלטות הווידאו מתאימות להדמיית אירועי שחייה מהירים.

Results

איור 1. ארונות הדמיה. ארונות הדמיה נבנו במיוחד במעבדה שלנו ושימשו לניתוחים התנהגותיים בעלי תפוקה גבוהה. מצלמה דיגיטלית של 15 מגה פיקסל הוצמדה לחלק העליון של הארון הפונה כלפי מטה כדי לאסוף תמונות בהילוך מהיר של הזחלים בצלחות מרובות נתיבים שהונחו על גבי מסך של מחשב נייד. בין הלוחות למסך יש מפזר פלסטיק המשמש למניעת דפוסי moiré בתמונות שנאספו.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ארונות הדמיה	מגדלי וודקראפט
אגרוז	פישר	BP1356-100
מצלמה דיגיטלית	Canon EOS	רבל T1i
מחשבים נישאים	Acer Aspire		כל אחד טוב כל עוד יש לו 15.6 אינץ '. מסך LCD ברזולוציה של 1366 x 768 פיקסלים ובהירות של 220 cd/m2.
צלחות באר אחת	פישר	12-565-493
PowerPoint 2010	מיקרוסופט
מפזר פלסטיק	פנדפלקס	52345