Method Article

אגר הרכבה: שיטה בסיסית להרכבת עוברים חיים של דגי זברה להדמיה ארוכת טווח

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Hagedorn E. J., et al. יצירת עוברים של דגי זברה פרביוטיים על ידי איחוי כירורגי של בלסטולה מתפתחת. J. Vis. Exp. (2016).

סרטון זה מתאר הוראות שלב אחר שלב להרכבת עוברים חיים של דגי זברה על 6 פלטות באר באמצעות אגרוז נמס נמוך. הוא גם מספק את התהליך כדי לרכוש תמונות של עוברים חיים ולנתח אותו באמצעות תוכנה.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הגדרת מיקרוסקופ, רכישת תמונה, עיבוד וניתוח

  1. מכינים אגרוז בעל נקודת התכה נמוכה של 0.8% (LMP): מוסיפים 0.8 גרם אגרוז LMP ל-100 מ"ל E3 ומחממים עד להמסה מלאה. בעודו חם, aliquot 1 מ"ל של LMP agarose לתוך צינורות microfuge 1.5 מ"ל בלוק חימום 37 °C. אגרוז LMP יישאר מותך ב 37 ° C. להוסיף 40 μl של 4 מ"ג / מ"ל (25x), pH 7.0 tricaine לכל 1 מ"ל aliquot של LMP agarose ב 37 ° C. הערה: אם עובדים עם זן פיגמנט, להוסיף 20 μl של 0.15% (50x) PTU לכל 1ml aliquot.
    1. לאחסן את שארית LMP agarose במשך מספר חודשים בצינורות אטומים 50 מ"ל ב 4 ° C.
  2. להרדים עוברים פרביוטיים כדי להיות הדמיה על ידי הוספת 1 מ"ל של 4 מ"ג /....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
LMP agarose (אגרוז LMP טהור במיוחד)Invitrogen16520100
טריקאין (אבקה) (טריקאין מתאן-סולפונטו, טריקאין-S)ווסטרן כימיקלים בע"מMS 222
לוחות 6 בארות עם תחתית זכוכית המשמשים להדמיהמאטקP06G1.5-20-F
משאבת פיפטה 10 מ"ל (ירוק) (פיפטה משאבת פיפטור)נובהטק אינטרנשיונלF37898-0000

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Agar MountingZebrafish EmbryosLow Melting AgaroseLong Term ImagingEmbryo AnesthesiaMicroscope ImagingAgarose Gel PreparationEmbryo PositioningConfocal MicroscopyImage Analysis

Related Articles