אלקטרופיזיולוגיה של דגי זברה בוגרים: שיטה למדידת הפעילות החשמלית החוץ-תאית של תאי עצב ב-Vivo

תקציר

מקור: Johnston, L., et al. רישום אלקטרופיזיולוגי במוחם של דגי זברה בוגרים שלמים. J. Vis. Exp. (2013)

הפרוטוקול מתאר את ההליך לביצוע אלקטרופיזיולוגיה בדגי זברה בוגרים. שיטה זו יכולה לשמש למדידת פעילות עצבית in vivo.

פרוטוקול

1. אלקטרופיזיולוגיה

1. כבה את זין עצירת האינטובציה ונתק במהירות את מנעול Luer המחבר את בסיס האינטובציה לטפטוף הטריקאין.
   1. העבירו את מערך האינטובציה השלם למיקרוסקופ האלקטרופיזיולוגי והתחברו למערכת הזילוח.
   2. הפעל את מי בית הגידול ונקב בקצב של 1 מ"ל/דקה למשך ~1 שעה, על מנת לשטוף את הטריקאין.
2. באמצעות מיקרומניפולטור תחת בקרה חזותית, מקם את האלקטרודה המשנית כך שניתן יהיה להחדיר את קצה האלקטרודה לנחיר של החיה או לשקע מאחורי הלסת העליונה.
3. הכנס את מחט האלקטרודה הראשית לפתח הקרניוטומיה. הכנס את המחט לתוך הרקמה, כך שהקצה ממוקם שטחי למדי בתוך הטקטום האופטי.
   1. אם האלקטרודה עמוקה מדי, האות החשמלי עשוי להיות קטן.
4. לאסוף ולנתח את ההבדל החשמלי שנרשם בין אלקטרודות הייחוס הראשוניות והמשניות. תהליך זה יאפשר קבלת הקלטות חוץ-תאיות.
   1. אסוף את הנתונים במצב ללא פערים בקצב דגימה של 5 kHz, עם מסנן מעבר נמוך של 0.1 kHz ומסנן מעבר גבוה של 1 Hz.
   2. אין להתחיל לתעד פעילות אלקטרופיזיולוגית עד שמי בית הגידול מחוררים למשך 45 דקות לפחות.
   3. הקלט קו בסיס של פעילות מקומית במשך 15 דקות לפחות לפני הוספת תרופות ניסיוניות. התחל זילוח עם תרופות ניסיוניות לפי בחירה ורשום את משך הזמן הרצוי. בתכשירים בריאים, ניתן להקליט את הפעילות הנוירולוגית במשך 2-3 שעות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מי בית גידול			pH 7.0-7.4, מוליכות של 400-450 μS; מתוחזק על ידי Instant Ocean ו סודיום ביקרבונט
0.4% טריקאין חוצץ טריס	סיגמא-אולדריץ'	E10521	pH 7.2-7.4; מאוחסן ב -20 oC
60 מ"ל צינורות מזרק Luer Lock	בקטון, דיקינסון ושות'	309653
סטופקוקים תלת-כיווניים עם חיבורי Luer
0.010 אינץ' חוט כסף	A-M מערכות, Inc.
מחזיק אלקטרודות מסדרת Q
צלחת פטרי Fisherbrand 100 מ"מ x 15 מ"מ	פישר סיינטיפיק	NC9299146
34 גר' מחט משופעת	World Precision Instruments, Inc.	NF34BV
קימוויפ 37X42 ס"מ	קימברלי-קלארק פרופשיונל	TW31KEM
צינור בקוטר 1/8 אינץ
צינור בקוטר 1 מ"מ
מיקרוסקופ (Leica MZ APO)	ניתן להשתמש במיקרוסקופ נוסף

'