ב Vivo אלקטרופורציה: שיטה ספציפית לאתר להעברת דגי זברה

במאמר זה

תקציר

מקור: Durovic, T., et al. שיטת אלקטרופורציה להעברת DNA פלסמיד בדג הזברה הבוגר טלנספלון. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מתאר אלקטרופורציה in vivo, שהיא טכניקה להעברת דנ"א לתאים אפנדימוגליים בדגי זברה בוגרים.

פרוטוקול

1. אלקטרופורציה

מוציאים את הדג ממערך ההזרקה ועדיין מחזיקים אותו בספוג.
לטבול את הצד הפנימי של קצה האלקטרודות בג'ל אולטרסאונד.
מכסים את telencephalon דגים עם כמות קטנה של ג'ל אולטרסאונד.
מקמו את ראש הדג בין האלקטרודות, הניחו את האלקטרודה החיובית בצד הגחוני של ראש הדג ואת האלקטרודה השלילית בצד הגבי (איור 1C), בעודכם עדיין מחזיקים את גוף הדג בספוג. זה קובע את כיוון זרימת הזרם הדרוש כדי electroporate ependymoglia הממוקם באזור subventricular.
לחצו על האלקטרודות בעדינות ובדייקנות כנגד הטלנספלון (איור 1 C). נהל את הזרם עם דוושת הרגל. החזק את האלקטרודות במקומן עד לסיום כל חמשת הפולסים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

figure-results-1
איור 1: ייצוג סכמטי של חתך העטרה של טלנספלון דג הזברה המנותק. (A) סכימה של חתך קורונלי של טלנספלון דג זברה, המדגישה את מיקומם של תאים אפנדימוגליאליים, המרפדים את פני השטח של החדר ובונים את דופן החדר הגחוני. שכבת אפנדימל גבית מגשרת בין שתי ההמיספרות ומכסה את החדר (V), הממוקם בין שתי שכבות תאים: ependymoglial ו ependymal. (B) משמאל, תצלום של ראש דג הזברה שצולם מלמעלה, המדגיש את מיקום הטלנס...