הזרקה תוך צפקית: שיטה להעברת תמיסה לחלל הבטן של דג זברה בוגר

Abstract

מקור: Luukinen, H., et al. Modeling Tuberculosis in Mycobacterium marinum Infected Adult Zebrafish. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מתאר טכניקה של הזרקה תוך צפקית, שיטה להעברת תמיסות לחלל הבטן של דגי זברה בוגרים.

Protocol

1. זיהום ניסיוני M. marinum עם הזרקה intraperitoneal

1. פיפטה טיפה של 5 μL של תמיסת החיידקים המדוללת על פיסת סרט פרפילם ולמשוך את הטיפה לתוך מחט אינסולין 30 גרם.
2. השתמשו בדגי בר בני 5-8 חודשים ובדגי מוטציה מסוג rag1−/−hu1999 לצורך הניסוי. מרדימים דגי זברה בוגרים במי המיכל עם 0.02% אתיל אסטר חומצה 3-אמינובנזואית (pH 7.0). מקמו את צד הגחון של הדג לחריץ על פלסטיק מוקצף לח.
   הערה: דגים מוטנטיים מסוג Rag-/- אינם מסוגלים לעבור רקומבינציה סומטית ולייצר תאי T ו-B פונקציונליים.
3. הזריקו את המחט בין סנפירי האגן בזווית של כ-45 מעלות. שמור על פתיחת המחט כלפי מעלה כדי לראות שכל הפתח נמצא בתוך חלל הבטן. להזריק לאט את התרחיף החיידקי בזהירות להסיר את המחט.
   הערה: במקרה שהנותב האדום דולף החוצה מהדג עם ההזרקה, הוציאו את הדג מהניסוי.
4. מיד לאחר ההזרקה, מעבירים את הדג למיכל התאוששות עם מי מיכל מתוקים.
5. קח דגימות של תרחיף חיידקי על לוחות 7H10 כל 15 דקות מן aliquot חיידקי בשימוש לדגור את החיידקים ב 29 ° C במשך 5 ימים ולאמת את מינון הזיהום על ידי ספירת המושבות על הצלחות.
6. בדוק את רווחתם של הדגים באופן קבוע להרדים כל דג עם סימפטומים של זיהום עם ריכוז של מעל 0.02% של חומצה 3-aminobenzoic אתיל אסטר (pH 7.0).
   הערה: כ-7% מדגי הזברה הבוגרים שנדבקו ב-34 ±-15 CFU וב-30% מדגי הזברה שנדבקו ב-CFU של 2029 ±-709 יסבלו מתסמינים עד 8 שבועות. הסימפטומים עשויים לכלול שחייה לא תקינה, חוסר תגובה למגע, התנשפויות, בצקת או בזבוז נצפה.
7. שמרו על דגי הזברה על פי הסטנדרטים המקובלים.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
מיקובקטריום מרינום	אוסף תרבות הטיפוס האמריקאי	ATCC 927
פנול אדום	סיגמא-אולדריץ'	P3532
טבליות מלח חוצצות פוספט (PBS)	סיגמא-אולדריץ'	P4417-50TAB
אגר Middlebrock 7H10	BD, תרמו פישר סיינטיפיק	11799042
3-חומצה אמינובנזואית אתיל אסטר (pH 7.0)	סיגמא-אולדריץ'	A5040
Omnican 100 30 גרם מחט אינסולין	בראון	9151133
1 מזרק מ"ל	הנקה סאס וולף	4010.200V0