דג זברה שמקורו בחולה קסנוגרפט (zPDX): מודל סרטן

תקציר

מקור: Wang L. et. al., מודל Xenograft הטרוגני הנגזר מהמטופל של סרטן הלבלב באמצעות זחלי דגי זברה כמארחים להערכת תרופות השוואתית. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מתאר את הטכניקה ליצירת מודל xenograft הנגזר מדג זברה. בפרוטוקול הדגימה, אנו מעריכים את יעילות התרופות Gemcitabine ו- Navitoclax במודל xenograft גידול הלבלב.

פרוטוקול

1. הזרקת תרחיף תאים מעורבים לדגי הזברה

1. הוסיפו תמיסת טריקאין 10x למי E3 כדי להרדים זחלי דגי זברה והעבירו את הזחלים (משלב 2.3) לצלחת ההזרקה המלאה ב-E3 שונה (E3 עם 1 גרם/ליטר גלוקוז ו-5 מילימול/ליטר L-גלוטמין).
2. מלא 25 μL של תרחיף תאים מעורבים לתוך מחט נימים מיקרו והכנס את המחט לתוך מניפולטור הזרקת מיקרו.
3. הגדר לחץ הזרקה וזמן. הזריקו 50-80 תאים (~8 nL) לתוך שק החלמון של 48 HPF דגי זברה.

2. תרבית דג הזברה Xenografted (מודל zPDX)

1. העבירו את זחלי דגי הזברה שלאחר הקסנוגרפט ל-40 מ"ל של תמיסת תערובת (תמיסת E3 עם 1 גרם/ליטר גלוקוז ו-5 מילימול/ליטר L-גלוטמין) ב-32°C.

3. מתן תרופות על דג זברה Xenografted והערכת כדאיות תאי גידול/פיברובלסטים

1. קביעת הריכוז האופטימלי של gemcitabine/navitoclax.
   1. הניחו 10 עוברים של דגי זברה פראיים בטמפרטורה של 48 HPF בכל באר של צלחת בת 12 בארות.
   2. מוסיפים ריכוזים שונים של gemcitabine או navitoclax בכל באר ודגרים ב 32 ° C במשך יומיים.
   3. לאחר יומיים, חשב את מינון הסבילות המרבי (MTD) של gemcitabine ו- navitoclax שבו זחלי דגי הזברה אינם מראים מום משמעותי והתנהגות חריגה, וריכוזי העבודה נקבעים מתחת ל- MTD.
2. טיפול בדגמי zPDX עם gemcitabine/navitoclax.
   1. מניחים 10 זחלים xenografed לתוך כל באר של צלחת 12 באר.
   2. חלקו את הזחלים לארבע קבוצות, טפלו בקבוצת הביקורת ב-E3 המכילה 0.1% DMSO, וטפלו בקבוצות האחרות בגמציטאבין 5 מיקרוגרם/מ"ל ו/או 50 מיקרומטר נביטוקלקס, ודגרו בטמפרטורה של 32 מעלות צלזיוס במשך יומיים.
3. הערכת כדאיות התא והרכב התא במודלים של zPDX.
   1. מרדימים את הזחלים xenografned לאחר הטיפול ומניחים אותם 3% methylcellulose.
   2. לערבב את הזחלים ממבט רוחבי באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי או מיקרוסקופ קונפוקלי.
   3. כמת את עוצמת האותות הפלואורסצנטיים האדומים והירוקים באמצעות תוכנות ImageJ ו-GraphPad.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
ל-גלוטמין	גיבקו	21051024
גמציטאבין	גמזן
מתילצלולוז	סיגמא	M0262
Navitoclax(ABT-263)	סלק	S1001	מעכב Bcl-xL
ציוד
מיקרו-מזרק	נארישיגה
מיקרוסקופ קונפוקלי	לייקה	SP8	0.00