מודל קרדיומיופתיה של דג זברה: רעילות לב הנגרמת על ידי תרופות

תקציר

מקור: Ma X., et. al. מודל קרדיומיופתיה המושרה על ידי דוקסורוביצין בדגי זברה בוגרים. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מתאר את הטכניקה של יצירת מודל קרדיומיופתיה של דג זברה עם שינויים מינימליים בין קבוצות ניסוי ובמדגם אנו יוצרים מודל קרדיומיופתיה של דגי זברה באמצעות התרופה דוקסורוביצין.

פרוטוקול

1. הזרקת DOX בדגים בוגרים

1. הניחו צלחת פטרי נקייה בקוטר 100 מ"מ עם ספוג בתוכה, תחת מיקרוסקופ דיסקציה, ואז התאימו את המיקוד. חותכים את הספוג כדי ליצור חלל באורך של כ 4 ס"מ להחזיק דג. צרו חלל ארוך יותר עבור דג גדול יותר.
2. הכינו מחט 34 גרם עם מזרק מיקרו 10 μL. שטפו את המחט עם חיץ HBSS 1x כדי להסיר בועות ובלוקים מהמזרק והצינורית.
3. מרדימים את הדגים הבוגרים במי עובר המכילים 0.16 מ"ג/מ"ל טריקאין למשך 2 דקות
   הערה: הרדמה ממושכת במשך 5 דקות ואחריה הזרקת DOX יכולה בקלות לגרום למוות דגים.
4. משרים את הספוג במי העובר עם טריקאין, ומעבירים את הדג לספוג להזרקה.
5. בצע הזרקת IP DOX באחת משתי השיטות המתוארות להלן.
   1. הזרקת IP קלאסית
      1. מקמו את הדג עם הבטן למעלה בחלל הספוג. הכניסו במהירות את המחט, בזווית של 45 מעלות לגוף הדג לקו האמצע שבין סנפירי האגן, וחדרו כ-1-2 מ"מ. שחרר את כל פתרון DOX לאט. המתן 5 שניות לפני שליפת המחט. בדוק את משלוח DOX על ידי צבע אדום גלוי בבטן הדג.
   2. הזרקת IP חלופית
      1. מניחים את הדג לרוחב על הספוג עם החלק הקדמי מימין. ייצבו בעדינות את הדג באמצעות מלקחיים קהים ביד שמאל, והחזיקו את המיקרו-מזרק ביד ימין.
      2. מקמו את המחט מתחת לקו הרוחבי מעל סנפיר האגן, כשהשיפוע פונה כלפי מעלה. מצביעים על מיקום השעה 7 בזווית של 45 מעלות, מחדירים את המחט 3-4 מ"מ לחלל הדג הממוקם בין האגן לסנפירי פי הטבעת, ואז לאט לאט מדכאים את הבוכנה. בדוק את משלוח DOX על ידי צבע אדום גלוי בבטן הדג.
6. העבירו במהירות את הדג המוזרק למיכל מעבר נקי מלא במי מערכת מתוקים כדי לאפשר לדגים להתאושש. שטפו את המחט פעם אחת עם חיץ HBSS אחד בין הזרקות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
טנק מעבר	אקוונירינג	ZHCT100	גידול דגים
דוקסורוביצין הידרוכלוריד	סיגמא	D1515-10MG
תמיסת המלח המאוזנת של האנק (HBBS)	תרמופישר	14025076	רכב עבור DOX
צלחת פטרי 100 מ"מ	בז	431741
10 מיקרו-מזרק NanoFil	WPI	ננופיל	להזרקה
מחט מד 34	WPI	NF34BV-2	להזרקה
טריקאין	ארגנט		הרדמת דגים