מאמר שיטה

החדרת ריאות וקיבוע: החדרת נוזלים לקנה הנשימה ותיקון ריאות למדידת נפח הריאה הקבוע

30 באפריל 2023

במאמר זה

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Limjunyawong, N. et al, שיטות החדרה וקיבוע שימושיות במחקר סרטן ריאות עכבר. J. Vis. Exp. (2015).

סרטון זה מתאר שיטה פשוטה ואמינה להחדרת נוזלים לקנה הנשימה לצורך החדרת ריאות, קיבוע ומדידת נפח ריאה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים המערבים בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. החדרת ריאות

  1. בחר צינורית מסחרית באורך אינץ 'אחד 20 גרם תוך ורידי לשימוש עבור אינטובציה.
  2. שנו את קצה הצנתר בכיפוף ידני שלו כדי ליצור עקמומיות קלה בקצה כפי שמודגם באיור 1.
  3. מרדימים את העכבר עם תערובת של קטמין (100 מ"ג / ק"ג) וקסילזין (15 מ"ג / ק"ג) מוזרק IP, ולאשר את ההרדמה על ידי היעדר תנועת רפלקס. החל משחה וטרינרית על העיניים מיד לאחר הרדמה. מיד לאחר ההרדמה יש למרוח משחה וטרינרית על העיניים ולתת קרפרופן (5-10 מ"ג/ק"ג SQ) לשיכוך כאבים לאחר ניתוח והחדרה.
  4. הניחו את העכבר בשכיבה על משטח משופע. כפי שניתן לראות באיור 2, קלסר משרדי גדול עם לולאות תפרים מודבקות עליו עובד מצוין.
  5. יש לגלח את החלק הגחוני של הצוואר ולנקות ולחטא את אזור הצוואר ב-70% אלכוהול. עם כפפות חדשות ללא לטקס ואבקה, השתמשו בכלי ניתוח שעברו חיטוי ב-70% אלכוהול.
  6. באמצעות מספריים חדים לבצע חתך כירורגי קטן בצוואר כ 12 מ"מ מתחת לחתך התחתון.
  7. בעזרת מלקחיים מושכים בעדינות את העור בצוואר בצורה קאודלית עד שניתן לראות את קיר הגחון של קנה הנשימה.
  8. משכו בעדינות את הלשון והכניסו את הצינורית כשהקצה הכפוף מוטה לכיוון משטח הגחון של העכבר. כמו ב 1.4, למשוך בעדינות על העור בצוואר, ולהכניס את הצינורית לתוך קנה הנשימה.
    הערה: עם קצת תרגול, הצנתר ייראה נע במורד קנה הנשימה. אם זה נכנס לוושט, אז לא תהיה ראייה חזותית של תנועת הצנתר. לא נעשים חתכים בקנה הנשימה.
  9. ברגע שהקטטר נראה בקנה הנשימה בצוואר, קידמו אותו כ-5 מ"מ כדי לעבור בצורה אמינה את מיתרי הקול אך עדיין הרבה מעל הקרינה.
  10. היכונו להחדיר עד 50 μl של נוזל על ידי הזרקת דרך הקטטר עם קצה פיפטה העמסת ג'ל. הניחו את החוד ברכזת הפיתוי, אך לפני ההזרקה הסתכלו היטב כדי לבחון את תנועת הנוזל בקצה המסונכרנת עם נשימת העכבר. לאחר מכן להזריק את החדר.
  11. עם מזרק 1 מ"ל, מיד לעשות ניפוח מהיר יחסית של 0.6 מ"ל של אוויר לתוך הריאות דרך קטטר כדי לעזור להפיץ את הנוזל עמוק בתוך הריאות. מוציאים את הצינורית.
  12. מוציאים את הצינורית.
  13. השתמש בכמות קטנה של דבק ציאנואקרילט כדי לסגור את הפצע הכירורגי הקטן בהתאם להוראות הכנס של VetBond. הכניסו עכברים לכלובים נפרדים ועקבו אחריהם באופן חזותי עד שהם מתעוררים ומתנהגים כרגיל ללא כל סימן לאי נוחות.

2. מדידת נפח הריאה הקבוע

  1. מדדו את נפח הריאה באמצעות עקרון ארכימדס כפי שמודגם באיור 3. הסר את הריאה הקבועה מהפורמלדהיד ונתח את הלב וכל רקמה אחרת שאינה ריאה.
  2. השתמש בעבר פשוט תוצרת בית חוט תמיכה מכשיר המשמש כדי לשמור על הריאות לחלוטין מתחת למים.
    הערה: התקן זה צריך להיות תואם ליתרה שבה נעשה שימוש. התקן טיפוסי שמוצג באיור 4 עשוי מפיפטות פלסטיק וחוטים דקים (20 גרם). מערכת זו עובדת היטב עם האיזון המשמש בסרטון, אך ניתן להתאים אותה בקלות לרוב יתרות המעבדה.
  3. מניחים עם ≈200 מ"ל מים על האיזון ומטפלים עם הכלוב התומך במקומו במים. ראו איור 5. הסר את כלוב המתכת; מניחים את הריאה על פני המים ולוחצים מתחת למים עם הכלוב.
  4. רשום את המשקל על האיזון. מספר זה משקף את נפח המים שנעקרו ולכן הוא מדד ישיר לנפח הריאה. יש להקפיד לוודא שהריאה או התפר או כל חלק של כלוב התיל אינם נוגעים בדפנות או בתחתית הכד.
  5. לקבלת דיוק, חזור על מדידה זו. מוציאים את הריאה מהמים, ומייבשים על רקמה. החזירו שוב את הכד עם הכלוב למקומו וחזרו על מדידת נפח הריאה. לאחר מכן יש לבצע ממוצע של שתי מדידות נפח.
    הערה: אם הריאות נשארות בפורמלין במשך יותר משבוע, האוויר בריאות יומס בנוזל. כשזה קורה, הריאה שוקעת, כך שכבר אין צורך להשתמש במכשיר כלשהו כמו באיור 4 כדי לשמור על הריאה שקועה במים. במקרה כזה ניתן למדוד את הנפח פשוט על ידי החזקת הריאה על ידי אחד ממיתרי התפרים עד שהיא שקועה לחלוטין כפי שמודגם באיור 3.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: צנתר תוך ורידי עם קצה מעוקל מעט המשמש להחדרה.

figure-results-2
איור 2: קלסר משופע בעל 3 טבעות המשמש לתמיכה בעכברים לצורך אינטובציה. קלסר זה מוגדר להכיל 3 עכברים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
לא הוכרז על ניגוד עניינים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
איזון מעבדהאוהאוסאדוונצ'ר פרו דגם AV 313יתרות אחרות ניתן להשתמש אם יש להם טווח של 1-300 גרם
20 גרם Luer צנתר תוך ורידיאינסילטמספר ספקים אפשריים אחרים, למשל, Jelco Optiva
בקבוק מעבדה 500 מ"למגווןמספר ספקים אפשריים אחרים

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים