גירוי תאי T Ex vivo בגידול הלבלב: שיטה להגברת ייצור הציטוקינים בתאי T

תקציר

מקור: Spear, S., et al. דור גידולי לבלב אורתוטופיים ואפיון Ex vivo של ציטוטוקסיות תאי T חודרי גידול. J. Vis. Exp. (2019).

מאמר זה מתאר את הטכניקה לגירוי תאי T ex vivo כדי להגדיל את הריכוז התוך-תאי של ציטוקינים כגון אינטרפרון-גמא או IFN-גמא וגורם נמק גידולי-אלפא או TNF-אלפא בתא T. ציטוקינים אלה מתווכים תגובה יעילה נגד הגידול ויכולים להיות בעלי תפקיד טיפולי בגידול.

פרוטוקול

1. עיכול גידולים בלבלב

1. הניחו את גידול הלבלב המנותח, גידולים באתר גרורתי או רקמת לבלב בריאה ב-PBS קר כקרח, ואחסנו על קרח.
   1. השתמשו במלקחיים כדי להעביר את הגידול לצלחת פטרי.
   2. הוסף 5.0 מ"ל של מדיום העיכול (2 מ"ג / מ"ל Collagenase, 0.025 מ"ג / מ"ל DNase RPMI) לתוך צינור 50 מ"ל; לאחסן על קרח כדי למנוע פעילות אנזימים החלה.
      הערה: פרוטוקול זה משתמש ב-Collagenase Type V, בעל פעילות של ≥1 יחידות/מ"ג FALGPA ו-> 125 יחידות עיכול קולגן (CDU)/מ"ג מוצק. ניתן לאחסן Collagenase ו-DNase aliquots בטמפרטורה של -20°C ולהפשיר על קרח לפני השימוש. כאשר שניהם מסיסים לחלוטין בסל"ד סטרילי, ניתן להעביר אותם דרך מסנן 0.2 מיקרומטר כדי להסיר ....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מסננת תאים בגודל 70 מיקרומטר בגודל נקבוביות	פישר סיינטיפיק	11597522
אנטי-CD107a PE (שיבוט 1D4B)	ביואגדה	121612	1:100 לתקשורת התרבות
אלבומין בסרום בקר (BSA)	סיגמא-אולדריץ'	A4503
קוקטייל גירוי תאים (500x) (פורבול 12-מיריסטט 13-אצטט (PMA) ויונומיצין)	eBioscience	00-4970-03	x ריכוז סופי PMA 0.081 מיקרומטר, יונומיצין 1.34 מיקרומטר
THP1 תאי לוקמיה מונוציטיים אנושיים	ATCC	TIB-202
Collagenase סוג V מ Clostridium histolyticum	סיגמא-אולדריץ'	C9263	2 מ"ג/מ"ל במדיה
דימתיל סולפוקסיד (DMSO)	סיגמא-אולדריץ'	D2650-100 מ"ל
DNase (Deoxyribonuclease I מלבלב בקר סוג II-S) מלאי 10 מ"ג/מ"ל ב-0.15 מ' NaCl	סיגמא-אולדריץ'	D4513	ריכוז סופי באמצעי העיכול: 0.025 מ"ג/מ"ל
נסיוב עגל עובר (FCS)	GE שירותי בריאות	A15-104	10% ב-RPMI
מזרק המילטון סדרה 700, נפח 25 מיקרוליטר, קצה משופע מחט מד 22s	פישר סיינטיפיק	10100332
פניצילין/סטרפטומיצין	הרשות הפלסטינית	15140122	100 יחידות/מ"ל פניצילין, 100 מיקרוגרם/מ"ל סטרפטומיצין
קוקטייל מעכב הובלת חלבונים (500x) (ברפלדין A ומונזין)	eBioscience	00-4980-03	1x ריכוז סופי ברפלדין A 10.6 מיקרומטר, מונסין 2 מיקרומטר
RPMI-1640 (מכיל 0.3 גרם/ליטר גלוטמין)	סיגמא-אולדריץ'	₪220
להב אזמל כירורגי מס '10	סוואן-מורטון	501
פתרון טריפסין-EDTA 10x	סיגמא-אולדריץ'	594-18ג	טריפסין (0.1%) EDTA (0.4%) ריכוז סופי
צלחת מיקרווול 96 תחתית U	VWR	734-2080