בידוד איי הלבלב באמצעות זילוח Collagenase: שיטה אנזימטית לבידוד תאי איון הלבלב

תקציר

מקור: Villarreal D. et al. A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice. J. Vis. Exp. (2019)

איי הלבלב, המכונים גם איי לנגרהנס, הם אשכול של תאים אנדוקריניים המייצר הורמונים לוויסות גלוקוז ופונקציות ביולוגיות חשובות אחרות. פרוטוקול זה מסביר שיטה לבידוד איי הלבלב על ידי החדרת קולגנאז תחילה דרך אמפולה של Vater כדי לעכל את רקמת הלבלב האקסוקרינית וצנטריפוגה הדרגתית צפיפות פשוטה כדי לטהר את האיים מעכברים.

פרוטוקול

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

כלי הניתוח הדרושים מוצגים באיור 1 והתרשים הסכמטי של ההליך מוצג באיור 2.

1. פתרונות

1. הכינו את תמיסת המלח המאוזנת של האנק (HBSS) על ידי הוספת 100 מ"ל HBSS 10X (מהמלאי) ל-900 מ"ל מים מזוקקים ליצירת 1 ליטר HBSS (1X).
2. הכינו תמיסת STOP (חייבת להיות טרייה ויש להשתמש בה תוך שעה) על ידי הוספת 50 מ"ל של סרום בקר עוברי 100X (FBS) ל-450 מ"ל של 1X HBSS קר כקרח; זה מייצר תמיסת STOP של 500 מ"ל. שמור על תמיסת STOP בטמפרטורה של 4°C.
<....

תוצאות

איור 1: כלי ניתוח.
מוצגים מספריים כירורגיים מעוקלים, מלקחיים מזכוכית כיסוי, מלקחיים מיקרו אדסון, מלקחיים מעוקלים, מספריים כירורגיים קטנים ומיקרו סרפינים של שוורץ (מהדק מיקרו-וסקולרי). לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מזרק 3 מ"ל	ב.ד.	309657	מחזיק collagenase P
מלקחיים מזכוכית כיסוי	VWR	82027-396	החזקת עור העכבר כדי לסייע בהליך החתך
מלקחיים מעוקלים	סיגמא-אולדריץ'	Z168696	החזקת רקמות במהלך הסרת הלבלב
צלחות פטרי 100 מ"מ	VWR	30-2041	משמש לתרבות האיונים
30 גרם. 1/2 אינץ 'מחט	ב.ד.	305106	לחדירה של אמפולה של vater כדי לספק Collagenase P - זה guage משמש כפי שהוא מתאים היטב ברוב CBDs
צינור 50 מ"ל	VWR	89039-658	החזקת רקמת לבלב מעוכלת, collagenase P ואיונים מטוהרים
רפידות סופגות עם עמיד במים מחסום לחות	VWR	82020-845	כדי לספוג דם מהליכים כירורגיים
צנטריפוגה 5810R עם נדנדה יכולת דלי והאטה	אפנדורף	5811FJ478114	השתמש עבור רקמות pelleting, גלולה נוצר בחלק התחתון של צינור חרוטי - צנטריפוגה דלי נדנדה יש צורך. כמו כן, תכונת ההצהרה חשובה ליצירת שכבות מעבר הצבע
קולגנאז P- 1g	רוש דיאגנוסטיקה	11249002001	לעיכול הלבלב האקסוקריני
מספריים כירורגיים מעוקלים	פישר-סיינטיפיק	13-804-21	לחיתוך בטן עכבר פתוחה
מיקרוסקופ דיסקציה	אולימפוס	SZX16	משמש לזיהוי מבנים אנטומיים מרכזיים ל העברת collagenase ללבלב
תמיסת המלח המאוזנת של האנק פי 10	קורנינג	20-023-CV	שטיפת תאים
היסטופק-1077	סיגמא	RNBF5100	ליצירת שיפוע
מקור אור	לידס	LR92240	שיפור הראות של המיקרוסקופ
RPMI-1640 מדיה עם L-גלוטמין	קורנינג	15-040-CV	איים מטפחים
שוורץ מיקרו סרפינים (מהדק מיקרו-וסקולרי)	כלים מדעיים משובחים	18052-01	הידוק צינור המרה המשותף ו עורק הכבד
אמבט מים מטלטל	בוקל/גרנט	8R0534008	חשוב לעיכול מכני של רקמה אקסוקרינית
מספריים כירורגיים קטנים	VWR	82027-578	חיתוך רקמה המחוברת ללבלב
RNaseZap	פישר-סיינטיפיק	AM9780	להסרת RNase
איזופלורן	פיראמל	B13B16A	להרדמת עכברים לפני ניתוח