כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הביקורת הווטרינרית של Jove.
1. IRE של גידולי SQ
- הכינו את החומרים הנדרשים: אלקטרופורטור גל מרובע, מתג בטיחות לרגליים, אלקטרודות (מערך מחטים לעומת טוויטר-טרוד) ומתאמים. יש לשמור בקרבת מקום תפרים סטריליים (4-0 שאינם נספגים), מקלוני אלכוהול, קוצצי שיער, קרם מסיר שיער, חומר סיכה לעיניים, גזה צמר גפן, בופרנורפין וחומרי הרדמה.
- יש לעקר את אלקטרודות הפינצטה או מערך המחטים באמצעות עיקור גז. Autoclaving אינו מומלץ. השתמשו במעקר חרוזי זכוכית כדי לעקר את האלקטרודות בין בעלי חיים.
- בצע את השלבים כדי לגרום בהצלחה להרדמה בעכברים ברגע ששתל הגידול SQ מגיע לקוטר 5 מ"מ. בקצרה, לנהל את העכבר המושתל 0.05 - 1 מ"ג / ק"ג buprenorphine משכך כאבים SQ, 30 דקות לפני הניתוח. לאחר מכן, הרדימו את העכברים המקבלים עם 2-3% איזופלורן בחמצן (2 ליטר/דקה) באמצעות וופורייזר מדויק (או חומרי הרדמה אחרים). יש לשמור עכברים על כרית חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך כל ההליך. החל חומר סיכה על העיניים כדי למנוע התייבשות. בדוק את עומק ההרדמה על ידי חוסר רפלקס מבהיל בהתחלה, ואשר הרדמה במישור הניתוח על ידי חוסר רפלקס דוושה לצביטה עדינה של הבוהן. לשמור על ההרדמה במהלך כל ההליך הכירורגי.
- הניחו את העכבר המרדים על צדו כדי לגשת לגידול SQ בצדו. יש להסיר את השיער באמצעות קוצץ ולנקות את העור באמצעות מקלון אלכוהול.
- עבור גידולי SQ, השתמש באלקטרודות מערך 2 מחטים. מרימים את העור ישירות מתחת לאתר הגידול באמצעות מלקחיים ומחדירים את האלקטרודות דרך העור במקביל לגוף ומוודאים שהן אינן חודרות לחלל הצפק. לאחר דרך העור, למקם את האלקטרודות בצורה כזו שהם סוגרים את הגידול.
- תכנת את האלקטרופורטור לספק פולסים של 100 מיקרו-שניות בתדר של 1 הרץ ב-1,500 וולט/ס"מ ובסך הכל 150 פעימות. העבר את הפולסים באמצעות דוושת הרגל. הפרד כל קבוצה של 10 פולסים על 10 שניות, על מנת לאפשר פיזור חום ולאשר את המיקום הנכון של האלקטרודות.
הערה: ללא שימוש בחומרים משותקים, עכברים יחוו התכווצויות שרירים עם IRE שעלולות לגרום לתזוזה של האלקטרודות אלא אם כן מאובטחות ידנית.
- הסר את האלקטרודות לאחר מינון מלא, אשר לא יעלה על 200 שניות. רשום את המתח בפועל שנמסר, אשר מוצג על electroporator. אפשרו לעכברים להתאושש לאחר IRE בכלוב הביתי שלהם עם גישה חופשית למזון ומים. הניחו את הכלוב על כרית חימום כדי להקל על ההתאוששות. עקוב אחר סימנים חיוניים כגון נשימה, זילוח וכו ', במהלך תהליך ההחלמה. אשר את סימני רפלקס התיקון ברגע שהעכבר מתאושש, ולאחר מכן החזר את פחית הכלוב לדיור רגיל. מתן buprenorphine 0.05 - 0.1 מ"ג / ק"ג 8 - 12 שעות לאחר הניתוח, וכל 8 - 12 שעות לאחר ההליך לפי הצורך עבור סימנים של כאב.
2. IRE של גידולים אורתוטופיים
הערה: IRE של גידולים אורתוטופיים כרוך בניתוח הישרדות שני על אותו עכבר ולכן דורש אישור מיוחד של IACUC המקומי לפני תחילת העבודה.
- הכינו את החומרים הנדרשים: כלי ניתוח כגון מספריים, אזמלים, נהגי מחט, מלקחיים מחודדים ומלקחיים שטוחים. יש לשמור גם את הדברים הבאים בקרבת מקום: תפרים סטריליים (נספגים 6-0 ולא נספגים 4-0), מקלוני אלכוהול, קוצצי שיער, קרם דפילטורי, חומר סיכה לעיניים, גזה כותנה, תמיסת יוד פובידון 10%, וילונות כירורגיים, רפידות חימום, אלקטרופורטור גל מרובע, מתג בטיחות לרגליים, אלקטרודות ומתאמיהן, בופרנורפין והרדמה.
- להעריך את העכברים עבור גידול גידול אורתוטופי על ידי הדמיה ביולומינסנציה in vivo. יש לעקוב אחר גדילת הגידול על ידי הדמיה החל מהיום הרביעי לאחר ההשתלה האורתוטופית, ולבצע הדמיה פעמיים בשבוע. ביום ההדמיה, יש לתת (הזרקה תוך צפקית) 30 מ"ג/ק"ג D-לוציפרין לעכבר מורדם (2-3% איזופלורן בחמצן (2 ליטר/דקה)) 10 דקות לפני ההדמיה. תמונה לפעילות לוציפראז באמצעות הגדרת הארה ללא מסנני פליטה לחשיפה מינימלית של 5 שניות במצלמת הארה עם שלב חימום אוטומטי ללא פלואורסצנטיות ותוך שמירה על ההרדמה עבור העכברים.
הערה: הגידולים האורתוטופיים אידיאליים לטיפול IRE 8 עד 10 ימים לאחר ההשתלה כאשר הגידולים נראים בבירור ועדיין מוגבלים ללבלב כפי שניתן לראות בתמונות לומינסנציה של לוציפראז
- בצע את השלבים כדי לאתר את הגידול המושתל. בקצרה, לנהל את העכבר המקבל 0.05 - 1 מ"ג / ק"ג buprenorphine משכך כאבים SQ, 30 דקות לפני הניתוח. מרדימים את העכברים המקבלים עם 2-3% איזופלורן בחמצן (2 ליטר/דקה) באמצעות וופורייזר מדויק (או חומרי הרדמה אחרים). יש לשמור עכברים על כרית חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך כל ההליך. החל חומר סיכה על העיניים כדי למנוע התייבשות. בדוק את עומק ההרדמה על ידי חוסר רפלקס מבהיל בהתחלה, ואשר הרדמה במישור הניתוח על ידי חוסר רפלקס דוושה לצביטה עדינה של הבוהן. לשמור על ההרדמה במהלך כל ההליך הכירורגי. הניחו את העכבר על גבו וסובבו אותו בעדינות לצד ימין כך שהצד השמאלי של הבטן חשוף. הסר את שיער הבטן של העכבר באמצעות קרם depilatory ולנקות עם גזה כדי להבטיח שאף שיער חופשי לא נכנס לבטן לאחר החתך. הכן את הבטן השמאלית לניתוח באמצעות 3 מחזורים של יוד פובידון 10% ואחריו מגבוני אלכוהול לחיטוי העור. באמצעות אזמל סטרילי, לבצע חתך רוחבי או אלכסוני 1.5 ס"מ בעור, 1 ס"מ משמאל לקו האמצע, מתחת לכלוב הצלעות, מעט מדיאלי לטחול. לאחר מכן, להרחיב את החתך דרך שרירי הבטן, שיקוף חתך שטחי מעל. אתרו את הטחול באמצעות מלקחיים שטוחים והחצינו אותו בעדינות מחלל הבטן. משכו את הטחול באמצעות מוליך כותנה סטרילי, ומצאו את זנב הלבלב מחובר לתחתית הטחול. באמצעות מלקחיים שטוחים, למשוך את זנב הלבלב לרוחב. אם הגידול אינו קל לאיתור, השתמש במלקחיים קהים כדי להזיז את הבטן והטחול בעדינות כדי לזהות את הגידול.
- להחצין את הגידול עם מלקחיים קהים באף וללכוד את הגידול בחוזקה עם אלקטרודות הפלטינה של הטוויטר. ספק את פולסי האלקטרופורציה כפי שתוכנתו בשלב 1.7 באמצעות אלקטרופורטור הגל המרובע בקבוצות של 10 פולסים הנשלטים על ידי מתג כף הרגל.
- שמור את הגידול חיצוני לפחות 60 s לאחר IRE כדי לפקח על כל סימנים של דימום. יש להחזיר את הגידול לחלל הבטן ולסגור את החתך כמתואר. בקצרה, סגור את שרירי הבטן באמצעות תפר נספג 6-0 עם תפר רציף או קטוע, וסגור את העור שמעליו באמצעות תפר קטוע 3-0 עד 6-0 שאינו נספג. יש להפסיק את ההרדמה בשלב זה. אפשר לעכבר להתאושש כמתואר ב-1.7. נטר את העכבר עד שיתאושש.
- עקוב אחר ההשפעות של IRE על צמיחת הגידול באמצעות הדמיית in vivo luciferase לפי שלב 2.2.
