מודל עכבר אורתוטופי פלואורסצנטי: השתלת GFP המבטא תאים סרטניים בעכבר להערכת התקדמות הגידול ב- Vivo

תקציר

מקור: Moreno, J. A., et al. מודל עכבר אורתוטופי פלואורסצנטי של סרטן הלבלב. J. Vis. Exp.(2016)

סרטון זה מדגים את הפרוטוקול להשתלת תאי סרטן לבלב המבטאים חלבון פלואורסצנטי ירוק באופן אורתוטופי בלבלב העכבר. מודל העכבר האורתוטופי מסייע בחקירת יעילותם של טיפולים חדשניים על גידולים ראשוניים וגרורתיים.

פרוטוקול

כל ההליכים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הביקורת הווטרינרית של Jove.

1. השתלה כירורגית

הערה: ודא שכל החומרים והמכשירים הכירורגיים סטריליים. תרגול טכניקות אספטיות בכל עת.

1. הניחו כרית חימום על השולחן וכסו בשפשוף סטרילי. הגדירו את מכונת ההרדמה וודאו שכל החומרים המתכלים נמצאים בהישג יד.
2. הכניסו את חוטמו של בעל החיים למסכת ההרדמה והגדירו את חומר ההרדמה ל-1 ליטר/דקה חמצן ו-2.5% איזופלורן.
3. לקרצף בעדינות את הצד של החיה עם יוד, ולשטוף עם 70% אתנול. חזור על הפעולה שלוש פעמים.
4. ודא שהחיה מורדמת לחלוטין על ידי צביטת הכף האחורית. בעל החיים מורדם לחלוטין ומוכן לניתוח אם לא נצפתה תגובה. עם זאת, אם בעל החיים נרתע, ודא שיש מספיק הרדמה בוופורייזר ולאפשר לבעל החיים יותר זמן לעבור לחלוטין תחת הרדמה.
5. טען כ 200 μl של תרחיף התא לתוך מזרק 1.0 מ"ל TB עם מחט 18 G (מקורר בעבר). החליפו את המחט במחט 27 גרם והחזירו לקרח עד שהיא מוכנה לשימוש.
6. אתר את האזור הכללי של הטחול (הרביע העליון השמאלי של הבטן) ובעזרת מלקחיים צבט את העור על גבי אזור זה. באמצעות מספריים כירורגיים לבצע חתך של כ 1.0 ס"מ כדי ליצור כיס. באופן דומה, צבטו את השריר החלק על גבי הטחול וחתכו דרך על מנת לגשת לחלל הצפק.
7. תפסו בעדינות את הקצה הקאודלי של הטחול ומשכו אותו החוצה מהגוף. הלבלב יהיה מחובר לטחול. מורחים את הלבלב באמצעות Q-tip סטרילי רטוב ומאתרים את זנב הלבלב.
8. העבירו את הזרקת 50 μl לזנב הלבלב, השאירו את המחט בפנים למשך 10 שניות וסובבו לאט את המחט מחוץ ללבלב. השתלה מוצלחת תיראה כמו בועה שטחית ללא דליפות.
9. מחזירים את הלבלב והטחול לחלל הצפק. ראשית להקיף את השריר ולאחר מכן להקיף את העור בנפרד. השתמש בתפר 6-0 או סיכה כדי לסגור את החתך. כדי למנוע כאב בחיה, יש לתת קטופרופן תת עורית (SC) (5 מ"ג/ק"ג) במשך 24 שעות. לחלופין, יש לתת buprenorphine sc (0.05 - 0.1 מ"ג/ק"ג) כל 12 שעות במשך תקופה של 36 שעות.
10. לשחזר את החיה מן ההרדמה ולהחזיר אותו לכלוב שלה. גם לפקח על כאב. יש לספק לבעלי חיים הקלה בכאב בזמן (או אפילו לפני - ניתוח מנע). הקלה נוספת בכאב חייבת להינתן לבעלי חיים החווים כאב על פי פרוטוקול IACCUC או כפי שנקבע על ידי הווטרינר המטפל או הממונה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
טיפול או חיטוי מוקצף חיטוי	סטריס	639680
מזרק טרפת 27 גרם 1/2	בקטון דיקינסון	305620
איזופלורן	בלוטלר שיין	50562
קטופרופן	פורט דודג' בריאות בעלי חיים
מספריים כירורגיים, מאיו ישר בגודל 5.5 אינץ'	הנרי שיין	22-1600
קו תאי PANC-1 GFP	אנטי סרטן, Inc
מערכת הדמיה של בעלי חיים קטנים: iBox Scientia	UVP, LLC. Upland, CA.		מערכת הדמיה של בעלי חיים קטנים לצפייה בגידול הפלואורסצנטי בבעלי חיים
תפר PGA 6-0 PGA	הנרי שיין	39010
קו תאי PANC-1 GFP	אנטי סרטן, Inc
DPBS (פוספט של DubelccoBuffered מלוחים)	תרמו פיכר Sci	21300025