כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.
1. דימות תהודה מגנטית
- החל MRI כאשר גודל הגידול הוא בערך 5 - 7 מ"מ בקוטר בדרך כלל 2 ~ 4 שבועות לאחר השתלת התא. השתמש בסורק MR ייעודי להדמיית בעלי חיים קטנים או בסורק MR קליני המצויד בסליל מיוחד להדמיית בעלי חיים קטנים.
הערה: השתמשנו בסורק MR של בעלי חיים קטנים 9.4T עם שילוב של מהוד/משדר בנפח 1H ומקלט סליל משטח (קוטר 30 מ"מ) (Bruker BioSpin Corp., Billerica, MA). סליל משטח מספק יחס אות לרעש (SNR) טוב יותר.
- הכינו חומר ניגוד MRI מבוסס גדוליניום להזרקת ~0.1 - 0.2 מילימול / ק"ג לכל חיה ב ~ 0.1 - 0.2 מ"ל PBS (מלח חוצץ פוספט).
הערה: השתמשנו בגדוטרידול, והזרקנו 0.2 mmol / kg ב 0.15 מ"ל PBS במשך תקופה של 15 שניות (0.1 מ"ל / sec).
- הכינו צינור מיקרו-פוליאתלן (אורך: 7.62 מ"מ, קוטר פנימי: 0.28 מ"מ, קוטר חיצוני: 0.64 מ"מ). הכנס מחט 30 G (אורך 12.7 מ"מ) לקצה אחד של הצינור, ומחט קצה קהה 30 G (9.5 מ"מ אורך) לקצה השני. חבר מזרק 1 מ"ל המכיל חומר ניגוד MR למחט החוד הקהה, ודחוף את המזרק באיטיות כדי למלא את הצינור כולו בחומר הניגוד MR.
- יש להרדים בעלי חיים באמצעות אוורור עם ~1-2% איזופלורן מעורבב עם חמצן (2 ליטר/דקה) במהלך ההכנה וההדמיה. אשר את עומק ההרדמה על ידי רפלקס צביטת הבוהן. יש למרוח משחה וטרינרית על העיניים כדי למנוע יובש תחת הרדמה. מרחיבים את וריד הזנב באמצעות מנורת חום לפני החדרת המחט. תפוס את אמצע מחט 30 G באמצעות מלקחיים קלי, והכנס אותה לווריד הזנב. הדביקו את הזנב ואת הצינור על פיסת נייר פלסטיק או קרטון (רוחב 10 מ"מ x 100 מ"מ אורך) כדי לשמור על הזנב ישר.
- הניחו את בעל החיים במצב שכיבה במיטת בעלי חיים המצוידת במים חמים (או אוויר חם) כדי לווסת את טמפרטורת הגוף במהלך ההדמיה. הגדר את הטמפרטורה על המיטה ל 37 ° C. הכנס בדיקת טמפרטורה רקטלית כדי לפקח על טמפרטורת הגוף במהלך ההדמיה.
- יש למרוח לוח פלסטיק מכופף אורתוגונלית לאזור הבטן. ודא שהגידול ממוקם מאחורי הקצה העליון של הלוח, ולאחר מכן משוך מעט את הלוח למטה (~ 2 מ"מ) כדי להבטיח שהגידול נתפס על ידי הלוח. הדביקו את הלוח למיטת בעלי החיים בחוזקה.
- הדביקו מתמר כרית נשימה (SA Instrument, Inc., Stony Brook, NY) על אזור החזה כדי לפקח על נשימת בעלי חיים במהלך ההדמיה. הניחו סליל משטח על החלק העליון של אזור הגידול, והדביקו אותו למיטת בעלי החיים בחוזקה. דחפו את מיטת בעלי החיים לתוך סורק MR כדי למקם את אזור הגידול במרכז סליל הנפח (קוטר פנימי: 72 מ"מ).
- בצע התאמה וכוונון הן עבור המקלט והן עבור המשדר, ולאחר מכן שימינג.
- התחל עם רצף אנטומי MR כדי לאתר את הגידול. השתמש ברצף ספין-הד טורבו משוקלל T2 (T2W) כדי לקבל תמונות ציריות עם פרמטרי הרכישה הבאים. זמן חזרה (TR)/זמן הד (TE) = 3,000/34 מילישנייה, מטריצה של 128 x 128, שדה ראייה של 30 x 30 מ"מ, מספר ממוצעים = 1, אורך רכבת הד = 4, ו-20 פרוסות רציפות בעובי 1 מ"מ במצב שזור לכיסוי כל אזור הגידול (זמן סריקה כולל: 1.6 דקות).
הערה: מכיוון שגידולי לבלב אורתוטופיים קשים יותר לאיתור מאשר גידולים תת-עוריים, תמונות לוקלייזר קונבנציונליות בעלות רזולוציה נמוכה יותר עשויות שלא להיות שימושיות.
- קבל תמונות משוקללות T1 (T1W) עם זוויות היפוך שונות כדי לאחזר את מפת T1. למטרה זו, השתמש בגישת זווית הכפלת הד הדרגתי עם הפרמטרים הבאים: זמן חזרה (TR)/זמן הד (TE) = 115/3 מילישנייה, מטריצה של 128 x 128, שדה ראייה של 30 x 30 מ"מ, מספר ממוצעים = 4, ~ 5 - 7 פרוסות רציפות בעובי 1 מ"מ במצב שזור לכיסוי אזור הגידול, ושבע זוויות היפוך של 10, 20, 30, 40, 50, 60 ו- 70 (זמן סריקה כולל לכל זווית היפוך: 1 דקות).
הערה: עם זאת, גישת זווית ריבוי היפוכים יעילה רק כאשר הומוגניות שדה B1 גבוהה. אם לא, ניתן להשיג מפות T1 עם גישת TR מרובים במקום זאת.
- קבל תמונות T1W לפני ואחרי הזרקת ניגודיות MR מבוססת גדוליניום. השתמש באותם פרמטרי רכישה וגיאומטריה עבור מיפוי T1 אך עם זווית היפוך קבועה של 30. השתמש בקידוד ליניארי כדי להבטיח מצב יציב כאשר מתקבל מרכז מרחב k, במיוחד כאשר משתמשים ב- TR קצר ובזווית היפוך במעלה נמוכה. רכשו 5 תמונות מקו בסיס לפני הזרקת הניגוד. לאחר מכן לרכוש 40 תמונות לאחר הזרקת ניגודיות (זמן סריקה כולל: 45 דקות). השתמש במשאבת מזרק כדי להזריק חומר ניגוד בקצב קבוע (0.01 מ"ל/שנייה).
- עקוב אחר נשימת בעלי חיים באופן רציף, והתאם את ריכוז האיזופלורן כדי לשמור על קצב הנשימה ל 50 - 100 נשימות לדקה. עקוב אחר טמפרטורת הגוף של בעלי החיים במהלך ההדמיה.
- לאחר השלמת DCE-MRI, הסירו את המחט ובדיקות אחרות, והניחו את בעל החיים בכלוב ריק עם מגבות נייר. יש לעסות ברכות את אזור הבטן התחתונה. יש למקם את הכלוב חצי מתחת למנורת חום כדי לאפשר לבעל החיים לנוע פנימה והחוצה משיפוע החום כשהוא מתאושש. אין להשאיר בעל חיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספקת כדי לשמור על עצם החזה.
