מיצוי miRNA במחזור: שיטה לבידוד miRNA מדגימות פלזמה באמצעות מיצוי אורגני והעשרת RNA קטנה

תקציר

מקור: Canale, M. et al., זיהוי פאנל מותאם אישית של מיקרו-רנ"א במחזור בחולים עם סרטן מעי גס גרורתי. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מתאר מיצוי מיקרו-רנ"א במחזור הדם מדגימות פלזמה של חולי סרטן המעי הגס באמצעות מיצוי אורגני ואחריו העשרת עמודי זכוכית. miRNAs יציבים בנוזלים ביולוגיים כגון סרום ופלזמה, מה שהופך אותם לסמנים ביולוגיים אידיאליים במחזור הדם לאבחון סרטן, פרוגנוזה וקבלת החלטות טיפול וניטור. שיטה זו תסייע לזהות סמנים ביולוגיים חדשים במחזור המסוגלים לחזות תוצאות קליניות בחולים.

פרוטוקול

הערה: בצע את כל השלבים הבאים תחת מכסה אדים מעוקר בהתאם ל- Good Laboratory Practice (GLP).

1. איסוף ואחסון פלזמה

1. אסוף 3 מ"ל של דגימת דם היקפית בצינור K3E EDTA.
2. צנטריפוגה את הצינור בטמפרטורת החדר ב 1,880 x גרם במשך 15 דקות.
3. לשחזר את פלזמה supernatant ב aliquots של 450 μL.
4. אחסנו את הדגימות בטמפרטורה של -80°C עד לשימוש.
   הערה: יש לעבד את צינור הדם ההיקפי תוך שעתיים מרגע האיסוף. בעת שחזור הפלזמה מן הצינור, לא להפריע שכבת הלימפוציטים.

2. מיצוי miRNA במחזור הדם מדגימות פלזמה

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
צינורות 1.5 מ"ל ללא מנעול בטוח ללא Rnase	אפנדורף	0030 123.328
1000 μL טיפים ללא Rnase	סטארלאב	S1122-1830
נעילה בטוחה ללא רנאז 2 צינורות מ"ל	אפנדורף	0030 123.344
ללא רנאז 20 טיפים μL	סטארלאב	S1123-1810
200 μL טיפים ללא Rnase	סטארלאב	S1120-8810
mirVana PARIS RNA וערכת טיהור חלבונים טבעית	תרמו פישר	AM1556
100% אתנול anidrous ACS כיתה	ריאגנטים קרלו ארבה	414605
2-מרקפטו-אתנול	סיגמא-אולדריץ'	M3148
0.2-2, 1-10, 2-20, 20-200, 100-1000 מיקרוליטר פיפטות מעבדה
מכסה אדים
מיקרוצנטריפוגה Benchtop
מערבולת