מודל כריתת אילים מורין: חקר מטבוליזם מרה המושרה על ידי איליקטומיה במודל מורין

תקציר

מקור: Zhang, R., et al. הצטברות יתר של מרה הנגרמת על ידי כריתת איל במעי עכבר. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול המפורט לכריתת מעיים במודל מורין. טכניקה זו מספקת תובנות לגבי ספיגת מרה הנגרמת על ידי כריתת איליקטומיה, הצטברות יתר ורעילות במעי העכבר.

פרוטוקול

1. Ileectomy ו Anastomosis

1. מרדימים עכברים עם איזופלורן (2 - 3%) בתא דגירה של בעלי חיים קטנים. קבע הרדמה נאותה באמצעות טכניקת צביטת הבוהן בזמן שהחיה נמצאת על איזופלורן.
2. הסרת שיער בטן על ידי מריחת מוצרים להסרת שיער ונגב את השיער באמצעות ספוגים כירורגיים תוך שמירה על הרדמה. הניחו את העכבר על שולחן ניתוחים של חיות קטנות עם בקרת טמפרטורה (איור 1A) כדי לשמור על טמפרטורת גוף של 37°C. שמרו על הרדמה עם איזופלורן (1-2%) באמצעות מסכת פנים. לטפל בעיני העכבר עם משחה עינית.
3. נקו את העור באמצעות פובידון-יוד ו-70% אלכוהול וכסו את האזור הכירורגי של הבטן בגזה כירורגית סטרילית (איור 1B).
4. בצע חתך בטני בקו האמצע באמצעות אזמל כירורגי ברגע שההרדמה נכנסת לתוקף. השתמשו באפליקטור עם צמר גפן כדי להגן על המעי ומשכו את שרירי הבטן של העכבר בעזרת מחזירים כדי לפתוח ולחשוף את חלל הבטן באופן מלא (איור 1C).
5. אתר את הצקום. החל מהצקום, הזיזו בזהירות את האילאום המחובר ואת חלק הג'ג'ונום אל מחוץ לחלל הבטן (איור 1D).
   הערה: ניתן לזהות בקלות את הצקום בשל גודלו הגדול גם לאחר צום.
6. קשרו את הענף העליון של העורק המזנטרי העליון בתפר משי 7-0 כדי להסתיר את הדם המספק את המקטע האיליאלי שיש לכרות. צבעו משתנה מוורוד לסגול כהה לאחר הקשירה. (איור 1E - F).
7. בהתאם למטרת הניסוי, באמצעות מספריים, הבלו ולהסיר 50% או 90% של ileum.
   הערה: לניתוח דמה, אין לבצע את קשירת העורק המזנטרי העליון ואין להסיר את האילאום.
8. יש לשטוף את הלומן של שני הקצוות עם 0.9% מלוחים.
   הערה: מכיוון שהאילאום השלם שנותר עדיין מקבל אספקת דם תקינה מהעורק המזנטרי העליון, כמות קטנה של דם תישטף החוצה במהלך התהליך. זה גם מצביע על כך שאספקת הדם לקצוות האיליאלית תקינה ומבטיחה שלא תהיה איסכמיה במהלך הליך האנסטומוזה (איור 1G).
9. אתרו את המזנטריות בצד של שני הקצוות. יישרו את המזנטריות ותפרו את הקצוות האיליים יחד באמצעות 8-0 תפר (איור 1G - H).
10. תפרו את הצד הנגדי של האילאום כדי לשמור על האילאום אנסטומוזה באופן טבעי (איור 1I).
11. תפרו את הצד העליון והתחתון בין שני התפרים המקוריים כדי לחבר היטב את שני הקצוות האיליים יחד (איור 1J).
12. ודאו שאין דליפה מאתר האנסטומוזה לאחר סיום הליך התפירה בן שלושת השלבים (איור 1G-I). החזירו את הצקום ואת המעי הדק לחלל הבטן למיקום האנטומי המקורי. יש לשטוף את אזור הניתוח במי מלח חמים בשיעור 0.9% באמצעות מחט קהה. (איור 1K).
13. סגור את החתך של שכבת שריר הבטן עם תפר 6-0. יישרו את החתך בעור הבטן באמצעות מלקחיים ותפרו את עור הבטן כדי לאפשר ריפוי פצעים אופטימלי (איור 1L).

2. טיפול לאחר ניתוח

1. העבירו את העכברים לאחר הניתוח ליחידה לטיפול נמרץ לצורך התאוששות. אחסנו אותם בכלוב מצעי נייר על כרית חימום מבוקרת טמפרטורה כדי להמשיך את ההתאוששות שלאחר הניתוח במהלך הלילה. לספק לעכברים מזון רך בנוסף למזון ומים רגילים.
2. לנהל buprenorphine (0.05 - 0.1 מ"ג / ק"ג) עם הזרקה תת עורית כל 8-12 שעות עבור שיכוך כאבים.
   הערה: הרדימו עכברים על ידי_CO2 אם הם חולים קשה.
3. בנקודת הסיום, יש להקריב עכברים באמצעות מנת יתר של איזופלורן ולקצור דגימות לפי הצורך (סעיף 3).

3. הערכה של הצטברות יתר של מרה הנגרמת על ידי Ileectomy

1. שקלו ונתחו את העכברים יום אחד לאחר כריתה של 0% (דמה), 50% או 90% מהאיליאום.
2. מוציאים את מערכת העיכול ושוקלים אותה. חשב את יחס משקל GI למשקל גוף כדי להעריך את חומרת תת-ספיגת מלח מרה והצטברות יתר.
3. מעבירים את דרכי העיכול לצינורות חרוטיים של 15 מ"ל וחותכים אותם למקטעים קצרים באמצעות מספריים. לאחר החיתוך, צנטריפוגה ב 3,000 x גרם במשך 10 דקות. מעבירים את הסופרנאטנט (נוזל GI המכיל מלחי מרה) לצינור נקי.
4. למדוד את הנפח והמשקל הכולל של נוזל GI ולחשב את משקל הנוזל למשקל מערכת העיכול כדי להעריך עוד יותר הצטברות יתר של מרה במערכת העיכול.
5. לקבוע את כמות המרה הכוללת supernatant על ידי בדיקת חומצת מרה.

תוצאות

איור 1: ניתוחי כריתת אילינוי. (A) לשמור על טמפרטורת הגוף באמצעות שולחן ניתוחים מבוקר טמפרטורה לבעלי חיים קטנים. (B) לכסות את אזור הניתוח בגזה סטרילית לאחר הכנת עור הבטן. (C) לחשוף את המעי הדק דרך חתך בטני בקו האמצע. (D) Cecum (מסומן בקו מקווקו לבן) מסומן כדי לאתר את האילאום. חשוף את האילאום (קו מקווקו צהוב) ואת ענפי העורק המזנטרי העליון (חיצים צהובים). (E) לקשור את ענפי העורק המזנטרי העלי...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
C57BL/6J	מעבדת ג'קסון
מיקרוסקופ דיסקציה	אולימפוס	SZ61	לניתוח
בקר טמפרטורה לבעלי חיים	Physitemp מכשירים, Inc	TCAT-2LV	לבקרת טמפרטורת הגוף
וופורייזר הרדמה איזופלורן	VetEquip	911104	להרדמה
מלקחיים דיסקציה	Fine Science Tools, Inc.	11274-20	לניתוח
מספריים	Fine Science Tools, Inc	14084-08	לניתוח
מחזיק מחטים	רובוז כלי ניתוח ושות'	RS-7882	לניתוח
מיקרו סכינים-להב מחט	פישר סיינטיפיק	10318-14	לניתוח
תפר מונופילמנט 6-0	אתיקון	1698ז	לסגירת עור הבטן
תפר משי 7-0	אתיקון	766 גרם	לקשירה
תפר מונופילמנט 8-0	אתיקון	1714ז	עבור אנסטומוזה
ספוגים כירורגיים	חברת Dynarex	3333	לניתוח
אפליקטורים קטנים עם קצוות כותנה	פישר סיינטיפיק	23-400-118	לניתוח
איזופלורן	Piramal בריאות מוגבלת	66794-013-25	להרדמה
בופרנורפין הידרוכלוריד	רקיט בנקיזר פרמצבטיקה	12496-0757-1	לשיכוך כאבים
0.9% נתרן כלורי הזרקה	ב. בראון מדיקל בע"מ	0264-7800-10	לשטיפה/הזרקה
תמיסת הכנת יוד Povidone	חברת Dynarex	1413	להכנת העור
משחה וטרינרית Puralube	מוצרים וטרינריים של Dechra	17033-211-38	להגנה על העיניים
תחליב מסיר שיער	כנסייה & Dwight ושות', Inc.		להכנת העור
יחידה לטיפול נמרץ	ThermoCare	FW-1	להחלמה לאחר ניתוח
ערכת בדיקת חומצת מרה כוללת	אבחון Genzyme	DZ042A-K01	לבדיקת חומצת מרה