מידול Xenograft הנגזר מהמטופל: טכניקה ליצירת מודלים של עכברי מלנומה

Abstract

מקור: Min Xiao et al. מודל קסנוגרפט שמקורו בחולה מלנומה. J. Vis. Exp. (2018)

בסרטון זה, תאי מלנומה שמקורם בבני אדם מושתלים באופן תת-עורי באזור האגף של עכבר מדוכא חיסון. מודל PDX מאפשר חקירה פרה-קלינית של תאי מלנומה המשחזרים טוב יותר את ההטרוגניות של הגידול ואת אגרסיביות המלנומה שנצפתה בתנאי in vivo.

Protocol

כל הנהלים הנוגעים למודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. עיבוד רקמת גידול להשתלת עכבר

1. כריתה כירורגית או עיבוד רקמת ביופסיה כירורגית
   1. מעבירים את הרקמה לצלחת פטרי סטרילית ומפרידים ככל האפשר את רקמת הגידול מהרקמה הנורמלית שמסביב.
   2. הסר רקמה נמקית (המזוהה בדרך כלל כרקמה חיוורת-לבנה הממוקמת במרכז הגידול) מהגידול הנותר ככל האפשר.
   3. השתמשו באזמל כדי לחלק גוש גידול ראשוני לחתיכות שוות בקירוב (~3 מ"מ x 3 מ"מ) להשתלת עכבר כירורגית (איור 1).
   4. לחלופין, אם יש מספיק רקמת גידול זמינה, יש להקפיא את....

Results

איור 1: שיטות השתלה חלופיות.(A) גידולים יכולים להיות מעובדים לגושים, תרחיף תרחיף או כתרחיף חד-תאי. (B) כל שלוש השיטות יאפשרו צמיחה של גידולים in vivo. מוצגים כאן עכברים שהושתלו תת עורית עם הגידול ומצולמים 12 יום לאחר ההשתלה. (C) מוצגות עקומות גדילה של הגידול עבור העכברים שהוזרקו להם אחת משלוש שיטות ההשתלה. N = 5 לכל זרוע; קווי שגיאה הם שגיאה רגילה.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 מטר Hepes	תאגיד סיגמא-אולדריץ'	חתול # H0887-100ML
100x PenStrep	Invitrogen	חתול # 15140163
1x HBSS-/- (עם Ca++ או Mg++)	מד	חתול # MT21-023-CV
2.5% טריפסין	תאגיד סיגמא-אולדריץ'	חתול # T4549-100ML	10 מ"ל aliquots מאוחסן ב –20oC
BSA	תאגיד סיגמא-אולדריץ'	חתול # A9418-500G
כלורהקסידין	פישר סיינטיפיק	חתול# 50-118-0313
Collagenase IV (2,000 u/mL)	וורטינגטון	חתול #4189	איפור HBSS-/- ממלאי אבקה Collagenase IV (Worthington #4189, u / mg מצוין על בקבוק ומשתנה עם כל הרבה); הקפאה 1
DMSO	תאגיד סיגמא-אולדריץ'	חתול # C6295-50ML
דנאז	תאגיד סיגמא-אולדריץ'	חתול # D4527
EGTA (אתילן גליקול ביס(2-אתר אמינואתיל)-N,N,N'N'-חומצה טטראצטית)	מרק	חתול # 324626.25
פ.ב.ס.	INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES	חתול # 16000-044
פטריות	INVITROGEN LIFE TECHNOLOGIES	חתול # 15290-018
גנטמיצין	פישר סיינטיפיק	חתול # BW17518Z
איזופלורן	הנרי שיין בריאות בעלי חיים	חתול # 050031
המדיה L15 של לייבוביץ	Invitrogen	חתול # 21083027
מטריג'ל	קורנינג	חתול # 354230	מטריצה חוץ-תאית מלאכותית
מלוקסיקאם	הנרי שיין בריאות בעלי חיים # ::הנרי שיין	חתול # 025115	1-5 מ"ג/ק"ג, כמשכך כאבים
עכברי NOD/SCID/IL2-receptor null (NSG)	מכון ויסטאר, מתקן לבעלי חיים		הרבייה
PVA (אלכוהול פוליוויניל)	תאגיד סיגמא-אולדריץ'	חתול # P8136-250G
RPMI 1640 בינוני (Mod.) 1X עם L-גלוטמין	פישר סיינטיפיק	חתול# MT10041CM
אזמל	נוצה	חתול # 2976-22
קליפסים לפצעים	מיקרון	חתול #427631